Ramos-celler - forskning i B-celle-lymfom: Betydningen af Ramos-celler
Ramos-celler er en B-lymfocytcellelinje, der i vid udstrækning anvendes i biomedicinsk forskning. De finder især anvendelse inden for immunologi og kræftstudier. Forskere bruger disse celler til at evaluere cytotoksiske lægemidler og studere B-celleoverfladeantigener, mutationer og apoptotiske mekanismer.
Oprindelse og generelle egenskaber ved Ramos-celler s
At forstå en cellelinjes oprindelse og væsentlige egenskaber spiller en afgørende rolle i beslutningen om, hvorvidt den er egnet til din forskning. Derfor er det tilrådeligt at vurdere disse oplysninger grundigt, før man påbegynder arbejdet med den. Dette afsnit dækker følgende ofte stillede spørgsmål: Hvad er Ramos-cellelinjen? Hvad er Ramos-cellelinjen CD19? Hvad er Ramos-cellelinje CD20? Hvad er Ramos-cellernes oprindelse? Hvad er markørerne på Ramos-cellelinjen? Hvad er Ramos-cellestørrelsen? Hvad er Ramos-cellelinjens morfologi?
- Ramos-cellelinjen blev etableret i 1972. Disse celler stammer fra ascitesvæsken fra en 3-årig kaukasisk dreng med Burkitt-lymfom af amerikansk type [1].
- De udtrykker vigtige B-cellemarkører, herunder immunoglobulin M (IgM), CD19, CD20 og CD22.
- Ramos-celler er Epstein-bar-virus-negative celler. De kan dog permanent omdannes til Epstein-Barr-virus-positive celler.
- Disse B-lymfoblastceller har en rund morfologi.
Ramos blå celler vs. Ramos B-celler
Ramos blå celler og Ramos B-celler er begge humane Burkitt-lymfomceller. Begge er negative for Epstein Bar-virus. Forskellen mellem disse celler er, at de blå Ramos-celler udtrykker et NF-κB/AP-1-inducerbart reportergen kaldet SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), mens de hvide Ramos-celler ikke gør det.
Dyrkning af Ramos-celler
Denne del af artiklen er dedikeret til at hjælpe dig med at lære vigtige oplysninger om celledyrkning af Ramos-cellerne. Her vil du få det at vide: Hvad er cellelinjens fordoblingstid? Hvad er det anbefalede medium? Hvordan dyrker man Ramos-celler?
Nøglepunkter for dyrkning af Ramos-celler
|
Fordoblingstid: |
Ramos-cellernes fordoblingstid er ca. 20,4 ± 1,5 timer. Den kan dog afvige afhængigt af de givne betingelser for celledyrkning. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
Ramos-cellerne vokser i suspension. |
|
Celletæthed: |
Den optimale celletæthed for Ramos-cellelinjen er 3 x105 celler/ml . Ved subkulturering opsamles de suspenderede celler ved centrifugering. Cellerne tilsættes friske medier og resuspenderes omhyggeligt. Derefter blev cellerne hældt i den nye kolbe med en tæthed på 3 til 9 x105 celler/ml . |
|
Vækstmedie: |
RPMI 1640 suppleret med 10 % føtalt kvægserum, 2,1 mM stabil glutamin og 2,0 g/L NaHCO3 anvendes til dyrkning af Ramos-celler. Mediet skal udskiftes 2 gange om ugen. |
|
Vækstbetingelser: |
Den humane Burkitt-lymfomcellelinje (Ramos) opbevares i en befugtet inkubator ved 5 % CO2 og 37 °C. |
|
Opbevaring: |
Frosne Ramos-celler opbevares ved en temperatur på under -150 grader Celsius eller i dampfasen af flydende nitrogen for at beskytte cellernes levedygtighed i længere tid. |
|
Fryseproces og medium: |
CM-1 eller CM-ACF frysemedier anbefales til Ramos-celler. Der anvendes en langsom fryseproces, som tillader et gradvist fald i temperaturen på 1 grad Celsius pr. minut. Denne langsomme nedfrysning beskytter cellerne mod chok og forbedrer deres levedygtighed. |
|
Optøningsproces: |
Til optøning holdes frosne celleri et forvarmet vandbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, indtil der er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes frisk medium, og cellerne centrifugeres for at fjerne elementer fra frysemediet. Pelleten resuspenderes igen, og cellerne fordeles i en ny kolbe, der indeholder dyrkningsmedium. |
|
Biosikkerhedsniveau: |
Biosafety level 1-laboratoriet er afgørende for at opretholde Epstein-Barr-virusnegative Ramos-cellekulturer. Biosikkerhedsniveauet ændres dog til 2, når Ramos-celler permanent bliver Epstein-Barr-virus-positive. |
Ramos: Fordele og begrænsninger
Ligesom andre cellelinjer har Ramos-celler også forskellige fordele og begrænsninger. I dette afsnit udforskes nogle af de vigtigste, som kan have stor indflydelse på brugen af dem i forskning.
Fordele og begrænsninger
- Burkitt-lymfom-cellemodel: Ramos-celler blev udviklet fra en patient med Burkitts lymfom, hvilket gør dem til en relevant cellemodel til undersøgelse af lymfoide maligniteter
- Nem dyrkning: Ramos-celler er nemme at dyrke og vedligeholde i laboratoriet. De har enkle krav og betingelser for celledyrkning
Begrænsninger
- In vitro-model: Ramos-celler repræsenterer måske ikke helt den genetiske kompleksitet i patienttumorer, hvilket begrænser deres anvendelighed. Desuden afspejler resultaterne af eksperimenter med Ramos-cellelinjen måske ikke helt in vivo-forhold, hvilket potentielt kan føre til oversættelsesmæssige udfordringer
anvendelser af Ramos-celler i forskning
Ramos tilbyder lovende anvendelser inden for det biomedicinske område. Nogle af de vigtige forskningsanvendelser af Ramos-cellerne omfatter:
- Lymfom-biologi: Ramos-celler bruges i vid udstrækning til at studere lymfomets biologi. De bruges til at udforske genetiske og molekylære faktorer, der ligger til grund for lymfoide maligniteter. Desuden får forskere indsigt i sygdomsinitiering, progression og heterogenitet ved hjælp af disse Burkitt-lymfomceller. Genetiske mutationer og signalveje undersøges også, hvilket potentielt kan føre til udvikling af mere præcise diagnostiske og terapeutiske tilgange. En undersøgelse udført i 2019 viste, at GCN5 (General control non-depressible 5) histonacetyltransferase-hæmning mindsker tumorigeniciteten af humane Burkitt-lymfomceller (Ramos) via afbrydelse af BCR-signalering. Derfor foreslås GCN5 som et muligt mål for udvikling af lægemiddelterapi mod lymfom [2].
- Screening og testning af lægemidler: Ramos-cellelinjen bruges i vid udstrækning til screening og testning af lægemidler. Forskere evaluerer effekten af potentielle terapeutiske forbindelser i forhold til at hæmme celleproliferation og -vækst og fremkalde celledød i lymfomceller. Det hjælper med at identificere lovende lægemiddelkandidater og letter dermed udviklingen af målrettede behandlinger til lymfekræftpatienter. Forskningen viste, at methanolisk ekstrakt af Annona-frugtskind, -pulp og -frø havde en moderat effekt, mens chloroformekstrakt havde en robust effekt på spredningen af Ramos-celler. Undersøgelsen foreslog således, at Annona-frugter kan vise sig at være effektive i forebyggelse og behandling af lymfekræft [3].
Ramos-celler til din forskning
Publikationer med Ramos-celler
Denne del af artiklen indeholder en række interessante forskningspublikationer med Ramos-cellelinjen:
Kontinuerlig signalering af CD 79b og CD 19 er nødvendig for Burkitt-lymfom B-cellers fitness
Denne forskning blev offentliggjort i The EMBO journal i 2018. Undersøgelsen viste, at Ramos B-celler kræver udtryk for Ramos-cellernes CD19- og CD79b-markører (BCR-signalkomponent Igβ) for at være i stand til at konkurrere og vokse.
Denne undersøgelse offentliggjort i Neoplasia (2021) anvendte Ramos-celler og foreslog, at mixed lineage kinase-domænet (MLKL) er epigenetisk reguleret i Burkitt-lymfomceller (Ramos). Det er således en lovende prognostisk markør for behandlingssuccesen af nekroptoserelaterede terapier.
Fosforylering af PBK/TOPK Tyr74 af JAK2 fremmer vækst af Burkitt-lymfom-tumorer
Denne forskningsartikel i Cancer Letters (2022) antyder, at JAK2/TOPK/histone H3-signalaksen spiller en afgørende rolle i spredningen af B-lymfomcellelinjer in vitro.
Verotoxin-1-induceret ER-stress udløser apoptotiske eller overlevelsesveje i Burkitt-lymfomceller
Denne artikel blev offentliggjort i 2020 i Toxins. Undersøgelsen foreslog, at behandling med verotoksin-1 inducerer endoplasmatisk retikulum (ER)-stress i Ramos B-celler. Dette fører til igangsættelse af apoptotisk eller overlevelsessignalering i lymfomcellelinjer.
Silymarin hæmmer genekspressionen af Toll-like receptor 8 og apoptose i Ramos-kræftcellelinjen
Denne undersøgelse i Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) rapporterede, at en naturlig forbindelse, silymarin, undertrykker TLR8 (Toll-like receptor 8)-ekspression og apoptose i Ramos-cellelinjen.
Ressourcer til Ramos-cellelinjen: Protokoller, videoer og meget mere
Følgende er nogle få online-ressourcer om Ramos-celler:
- Transfektion af Ramos-celler: Dette dokument hjælper dig med at lære protokollen for transfektion af Ramos-cellelinjen.
Følgende link indeholder protokollen for Ramos-celledyrkning:
- Ramos-celler: Dette websted indeholder grundlæggende oplysninger om Ramos-cellelinjen. Det indeholder også en protokol til subkulturering af Ramos-celler og håndtering af prolifererende og kryopræserverede kulturer. Desuden findes der oplysninger om Ramos-cellemedier, fordoblingstid og celletæthed.
Vigtig indsigt i Ramos-celler: Ofte stillede spørgsmål
Referencer
- Kerntke, C.G., Analysis of the organization and signaling capacity of the membrane IgE during its interaction with CD19 and CD23 in B lymphocytes. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., GCN5 HAT-inhibering reducerer overlevelsen af humane Burkitt-lymfomceller gennem reduktion af MYC-målgenekspression og hindring af BCR-signalveje. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Fytokemisk profil og antioxidationsaktivitet af annona-frugt og dens effekt på lymfomcelleproliferation. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.