P19-celler - forskning i embryonalt karcinom ved hjælp af P19-celler
P19 er en murin embryonal karcinomcellelinje. Den bruges i vid udstrækning i biomedicinsk forskning, primært til at studere udviklingsbiologi, stamcellebiologi, celledifferentiering og screening af lægemidler. Da P19-celler har differentieringsevne, kan de være nyttige til at undersøge komplekse biologiske processer som vævsdannelse og tidlig embryonal udvikling. I denne artikel vil vi diskutere det grundlæggende ved P19-celler, der stammer fra mus.
P19-cellers generelle egenskaber og oprindelse
Det er vigtigt at kende til en cellelinjes generelle egenskaber og oprindelse, før du begynder at arbejde med den. Dette afsnit vil dække følgende: Hvad er en P19-cellelinje? Hvad er størrelsen på P19-cellen? Hvad er P19-cellernes oprindelse?
- P19 er en type pluripotente embryonale karcinomceller, der oprindeligt stammer fra teratokarcinom udviklet i en C3H/He-mus. Cellelinjen blev først etableret i 1982 af McBurney og Rogers.
- P19-celler kan vokse kontinuerligt i et serum-suppleret kulturmedie. De kan differentieres til andre celletyper, når de udsættes for ikke-toksiske stoffer som retinsyre og dimethylsulfoxid (DMSO) [1].
- Disse musekarcinomceller har en epitellignende morfologi.
- P19-cellelinjen har en euploid mandlig karyotype (n=40; XY).
Information om dyrkning af P19-celler
P19-cellelinjen dyrkes i vid udstrækning i forskningslaboratorier på grund af dens unikke egenskaber. Det er nemt og overskueligt at dyrke den. Dette afsnit indeholder alle de vigtigste oplysninger, du har brug for til at vedligeholde og dyrke P19-cellekulturer. Vi vil vide det: Hvad er fordoblingstiden for P19-celler? Hvordan dyrker man P19-cellelinjen? Er P19 en adhærent cellelinje?
Nøglepunkter for dyrkning af P19-celler
|
Fordoblingstid: |
Den rapporterede fordoblingstid for P19-cellelinjen er ca. 2 til 3 dage. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
P19 embryonal karcinomcellelinje er adhærent. |
|
Forhold mellem subkulturer: |
P19-celler skal subkultiveres hver 48. time, og der skal opretholdes et splitforhold på 1:10 for disse celler. Vedhæftende celler vaskes med 1 X phosphatbuffersaltvand og inkuberes med Accutase, indtil cellerne dissocieres. Cellerne tilsættes kulturmedier og høstes ved centrifugering. De opsamlede celler resuspenderes omhyggeligt og fordeles i nye kolber. |
|
Vækstmedium: |
DMEM/Ham's F12-medier indeholdende 5 % føtalt kvægserum, 3,1 g/L glukose, 1,6 mM L-glutamin, 1,0 mM natriumpyruvat, 15 mM HEPES og 1,2 g/L NaHCO3 anvendes til dyrkning af P19-celler. |
|
Vækstbetingelser: |
En befugtet inkubator indstillet til 37 °C med 5 % CO2-tilførsel er afgørende for dyrkning af P19 embryonale karcinomcellelinje. |
|
Opbevaring: |
Frosne P19-celleglas skal opbevares ved en temperatur på under -150 °C i en fryser eller i dampfasen af flydende nitrogen for at bevare cellernes levedygtighed på længere sigt. |
|
Fryseproces og medie: |
CM-1- eller CM-ACF-medier kan bruges til at fryse P19-celler ved hjælp af en langsom frysemetode, der beskytter cellerne mod chok og bevarer deres levedygtighed. |
|
Optøningsproces: |
Frosne P19-celler kan optøs i et 37 °C varmt vandbad ved at røre hurtigt rundt i et hætteglas i 40 til 60 sekunder. Cellerne tilsættes frisk medie og centrifugeres for at fjerne elementer fra det frosne medie. Cellepallen resuspenderes igen, og cellerne hældes i den nye kolbe til vækst. |
|
Biosikkerhedsniveau: |
Der kræves laboratorieindstillinger på biosikkerhedsniveau 1 for P19-cellelinjen. |
P19-cellelinjen: Fordele og ulemper
I dette afsnit diskuteres fordele og ulemper ved P19-cellelinjen.
Fordele og ulemper
- Differentieringspotentiale: P19-celler kan differentieres til forskellige celletyper, herunder kardiomyocytter, neuroner og mikrogliaceller. De kræver ikke-toksiske stoffer til differentiering, f.eks. retinsyre og dimethylsulfoxid (DMSO). Retinsyre inducerer udviklingen af neuroner, mikroglia og astroglia, mens DMSO sætter gang i udviklingen af bankende kardiomyocytter og glatte muskelceller. Derfor er P19-celler nyttige til at studere celledifferentiering og udviklingsprocesser
- Modelsystem: Den pluripotente embryonale karcinomcellelinje P19 er en værdifuld model til at studere den tidlige embryonale udvikling. Forskere bruger P19-celler til at belyse cellesignalveje og de cellulære og molekylære mekanismer, der er involveret i disse processer
Ulemper ved P19
- Murin oprindelse: P19 er en murin embryonal karcinomcellelinje. Derfor er det ikke sikkert, at resultaterne fra undersøgelser med disse celler kan overføres fuldt ud til menneskelig biologi og processer
Forskningsanvendelser af P19-celler
P19-celler har flere forskningsmæssige anvendelser på grund af deres differentieringsevne og relevans for udviklingsbiologi og stamcelleforskning. Nogle af de vigtige forskningsanvendelser af P19-embryonale karcinomceller omfatter:
- Undersøgelser af celledifferentiering: Som vi ved, kan P19-celler differentieres til neuroner, mikrogliale celler, glatte muskelceller og kardiomyocytter; derfor bruges de i vid udstrækning til at studere celledifferentieringsprocesser. Derudover hjælper det forskningen med at undersøge neural- og hjerteudvikling og de underliggende mekanismer. En undersøgelse foretaget i 2018 viste, at reaktive iltarter (ROS) styrer differentieringen af P19-celler til specifikke celletyper og forhindrer induktion af andre [3]. Et andet studie undersøgte den retinsyre-medierede neurale differentieringsproces og fandt, at PI3K/Akt/GSK3β-signalvejen var involveret [4].
- Udviklingsbiologi: P19-celler er en uvurderlig model til at studere den tidlige embryonale udvikling. De hjælper forskere med at forstå komplekse biologiske processer som f.eks. vævsdannelse under embryoudviklingen. Forskningen brugte P19-celler og undersøgte de medvirkende molekylære faktorer til dannelse af ventrikelseptumdefekt (VSD). Resultaterne afslørede, at et langt ikke-kodende RNA SNHG6 bidrager til VSD ved at regulere miRNA-101 negativt og aktivere Wnt/β-catenin-vejen [5].
- Test af lægemidler: P19-cellelinjen fra musens embryonale karcinom bruges også til at screene potentielle lægemiddelkandidater. En undersøgelse brugte differentierede P19-celle-neuroner og undersøgte de neurobeskyttende acetylcholinesterase-hæmmende virkninger af syntetisk L-Dopa og vandigt Mucuna pruriens-frøekstrakt. Resultaterne viste, at planteekstraktet udviste lovende resultater sammenlignet med L-Dopa [6].
Køb din P19-cellelinje i dag
P19-celler: Forskningspublikationer
Dette artikelafsnit dækker et par interessante forskningspublikationer med P19-celler.
Denne artikel blev offentliggjort i Oncology Reports i 2017. Undersøgelsen foreslog, at hypofysens kønshormoner driver teratokarcinomcellelinjernes vedhæftning, spredning og migration, herunder P19-celler.
Det lange ikke-kodende RNA uc. 4 påvirker celledifferentiering gennem TGF-beta-signalvejen
Denne publikation i tidsskriftet Experimental & Molecular Medicine (2018) brugte P19-celler og undersøgte funktionen af det lange ikke-kodende RNA uc.4. Resultaterne afslørede, at uc.4 påvirker celledifferentieringen via modulering af TGF-beta-signalvejen.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2018 i Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Undersøgelsen viste, at naturligt hjernevævsekstrakt og 3D-cellekultur kan fremskynde P19-embryonale karcinomcellers differentiering til neurale celler.
Denne undersøgelse blev offentliggjort i Journal of Ethnopharmacology i 2020. Undersøgelsen foreslog, at Cichorium intybus L. bladekstrakt kan inducere differentiering i P19 embryonale karcinomceller til insulinproducerende β-celler i bugspytkirtlen.
Denne forskning blev offentliggjort i Molecules (2022). Denne undersøgelse udforskede de neurobeskyttende og acetylkolinesterasehæmmende virkninger af Mucuna pruriens-frøekstrakt på P19-celleneuroner.
Ressourcer til P19-cellelinjen: Protokoller, videoer og meget mere
Følgende er nogle få ressourcer om P19-celler.
- Protokol for neuronal differentiering af P19-celler: Denne artikel indeholder P19-cellers neurale differentieringsprotokol og andre nyttige oplysninger om P19-celledifferentiering.
- Transfektion afP19-celler: Dette link hjælper dig med at lære P19-celletransfektionsprotokollen.
Følgende link indeholder protokollen for P19-celledyrkning.
- P19-celler: Dette websted indeholder alle nyttige oplysninger om P19-cellelinjen, herunder dens dyrkningstilstand, P19-cellemedier, celledeling og meget mere.
Udforskning af P19-cellelinjen: Ofte stillede spørgsmål
Referencer
- McBurney, M.W., P19 embryonale karcinomceller. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al, P19 Embryonic Carcinoma Cell Line: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey og G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinoid acid inducerer differentiering af P19-celler til neuroner, der er involveret i PI3K/Akt/GSK3β-signalvejen. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Langt ikke-kodende RNA SNHG6 bidrager til dannelse af ventrikulær septumdefekt via negativ regulering af miR-101 og aktivering af Wnt/β-catenin-vejen. Die Pharmazie - et internationalt tidsskrift for farmaceutisk videnskab, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens frøvandig ekstrakt forbedrede neurobeskyttende og acetylcholinesterasehæmmende effekter sammenlignet med syntetisk L-dopa. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.