NIH-3T3-celler: Fremme af fibroblaststudier og anvendelser af NIH-3T3
NIH-3T3-cellelinjen, der blev etableret fra væv fra et 17 dage gammelt schweizisk albino-museembryo i 1962 af Howard Green og George Todaro ved New York University School of Medicine, er blevet en grundlæggende ressource i biomedicinsk forskning. NIH-3T3-celler er anerkendt for deres store modtagelighed for dannelse af leukæmivirus- og sarkomvirusfokus og fungerer som et kritisk værktøj til en lang række videnskabelige undersøgelser, herunder undersøgelser af viral onkologi, genekspressionsanalyse og udforskning af cellulær vækstdynamik. "3T3"-nomenklaturen afspejler celledyrkningsmetoden og betegner et "3-dages overførselsinterval" med en indledende såningstæthed på 3 × 10^5 celler, hvilket fremhæver de standardiserede forhold, hvorunder disse celler først blev dyrket og udvidet.
Forskellige morfologier og anvendelser af NIH-3T3-celler
En af de karakteristiske egenskaber ved NIH-3T3-celler er deres morfologiske tilpasningsevne, som varierer betydeligt med kulturens konfluency. Ved lavere tætheder viser disse fibroblaster en spindelformet, ensom cellestruktur, der udvikler sig til tætte, hvirvlende mønstre, når populationen når konfluens. Med en gennemsnitlig diameter på ca. 18 μm er NIH-3T3-celler en alsidig model til dybdegående cellebiologiske undersøgelser, der spænder fra vævsreparationsmekanismer til de indviklede veje i cellecyklusreguleringen.
Information om dyrkning
Vigtige detaljer om dyrkning:
Tid til fordobling af befolkningen: Cirka 20 timer.
Væksttype: Vedhæftende kulturer.
Udsåningstæthed: Anbefalet: 3 til 4 x 10^4 celler/cm^2.
Vækstmedium: DMEM eller Ham's F12, suppleret med 5 % FBS og 2,5 mM L-glutamin.
Vækstbetingelser: Opbevares ved 37 °C i en befugtet inkubator med 5 % CO2.
Opbevaring: Opbevares ved temperaturer under -195 °C i dampfasen af flydende nitrogen.
Metode til nedfrysning: Brug CM-1 eller CM-ACF medium; anvend en langsom nedfrysningsmetode (1 °C temperaturfald).
Optøningsprotokol: Hurtig opvarmning i et 37 °C vandbad, efterfulgt af centrifugering for at fjerne frysemedium og derefter resuspension i vækstmedium.
Biologisk sikkerhedsniveau: Dyrkning kræver en indstilling på biosikkerhedsniveau 1.
Schweizisk albino-mus i et laboratorium.
Fordele og ulemper ved at bruge NIH 3T3-celler
Fordele og ulemper
Transfektionseffektivitet: NIH-3T3-celler er kendt for deres høje transfektionshastigheder og er fremragende til både forbigående og stabile genekspressionsundersøgelser og kan bruges til en række forskellige transfektionsteknikker.
Anvendelighed somfødelag: Disse celler fungerer ofte som et støttende feederlag til samkulturer med celler som keratinocytter og stamceller takket være deres frigivelse af vækstfaktorer, der fremmer væksten af de samkulturerede celler.
Forskning istamceller : NIH-3T3-celler er et foretrukket valg inden for stamcelleforskning, da de inducerer pluripotens uden genetisk modifikation og giver et gunstigt miljø for stamcelledifferentiering.
Kulturel stabilitet: NIH-3T3-celler er kendt for deres stabilitet og lave frekvens af spontan transformation. Men under visse forhold eller efter eksponering for specifikke onkogener eller mutagener kan NIH-3T3-celler undergå spontan transformation. Denne transformation kan føre til erhvervelse af kræftfremkaldende egenskaber såsom ukontrolleret vækst, tab af kontakthæmning og evnen til at danne tumorer, når de injiceres i modtagelige værter.
Ulemper
Inkonsekvent cellestørrelse: NIH-3T3-cellernes aflange, spindelagtige morfologi kan variere, hvilket komplicerer billedanalyser i assays.
Modtagelighed for infektion: Disse celler er tilbøjelige til at få bakterie- og mycoplasmainfektioner, hvis de ikke vedligeholdes under strenge aseptiske forhold, hvilket potentielt kan påvirke den eksperimentelle integritet.
Forskningsanvendelser af NIH-3T3-celler
Undersøgelser af DNA-transfektion: NIH-3T3-cellernes robusthed gør dem ideelle til at introducere og studere funktionen af forskellige gener, hvilket er demonstreret i forskning, der undersøger proteiner som NAB2-STAT6 og deres rolle i cellulære processer.
Cellebaserede analyser: Deres pålidelighed strækker sig til forskellige assays, herunder levedygtighed, apoptose og fokusdannelsesassays, der giver indsigt i cellulære reaktioner under forskellige eksperimentelle forhold.
Forskning i cellecyklus: Cellelinjens enkle manipulation af cellecyklus via serumniveauer gør den til en potent model til undersøgelse af cellecyklusregulering og dens afvigelser i sygdomssammenhænge.
Løft din forskning med NIH-3T3-celler
Fremhævelse af vigtige studier, der involverer fibroblastcellelinjen NIH 3T3
NIH-3T3-cellelinjen har været afgørende i adskillige forskningsprojekter, der spænder over forskellige aspekter af cellebiologi. Nedenfor er nogle vigtige undersøgelser, der bruger disse celler:
- Udforskning af NAB2-STAT6-fusionsproteinet: Dette studie, der er offentliggjort i Biochemical and Biophysical Research Communications, undersøger, hvordan NAB2-STAT6-fusionsproteinet påvirker NIH-3T3-celler, især dets rolle i at øge cellevækst og migration gennem EGR-1-regulering
- Undersøgelse af APOBEC3 og Murine Leukemia Virus: Denne forskning i tidsskriftet Virology undersøger hypermutationen af AKV murin leukæmivirus i NIH-3T3-celler, der udtrykker musens APOBEC3-gen
- Evaluering af epigenetiske lægemidlers antimetastatiske potentiale: I Oncotargets and Therapy vurderer denne undersøgelse de antimetastatiske virkninger af hydralazin og valproinsyre på RAS-transformerede NIH-3T3-celler
- Baicaleins indvirkning på NIH-3T3-proliferation og kollagensyntese: Denne forskning bruger NIH-3T3-celler til at undersøge, hvordan baicalein påvirker celleproliferation og kollagenproduktion gennem modulering af miR-9/insulinlignende vækstfaktor-1-aksen
- Undersøgelse af Riboflavin-udtømning og tumorigenese: Denne undersøgelse viser, hvordan riboflavinmangel i NIH-3T3-celler bidrager til tumorigenese ved at fremme celleproliferation og dysregulere cellecyklusgener
Vigtige ressourcer til NIH-3T3-celleforskning
For forskere, der er interesserede i at arbejde med NIH-3T3-celler, er der en række ressourcer til rådighed til at vejlede om dyrknings- og forsøgsprotokoller:
- Sfæroiddannelse i NIH-3T3-celler: Denne video giver en detaljeret gennemgang af dannelsen af sfæroider, en 3D-cellekulturteknik, der samler NIH-3T3-celler i klynger, hvilket giver en mere fysiologisk relevant model til undersøgelser
- Overvågning af NIH-3T3-cellers vækst: Gennem JuLI Br live cell imaging system fanger denne video vækstdynamikken i NIH-3T3-celler over 65 timer, hvilket viser celleproliferation i realtid
Disse ressourcer har til formål at støtte dine forskningsbestræbelser med NIH-3T3-celler og skabe et fundament for vellykkede eksperimenter og opdagelser.
Ofte stillede spørgsmål om NIH-3T3-celler
Referencer
- Rahimi, A.M., M. Cai og S. Hoyer-Fender, Heterogeneity of the NIH3T3 Fibroblast Cell Line. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., et al., Første molekylærcytogenetiske karakterisering i høj opløsning af NIH 3T3-cellelinjen ved hjælp af murin multicolor banding. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al., Sammenlignende analyse af forskellige feederlag med 3T3-fibroblaster til dyrkning af limbale stamceller fra kaniner. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Differentiering af neuronale celler fra NIH/3T3-fibroblaster under definerede forhold. Udvikling, vækst og differentiering, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al., NAB2-STAT6-fusionsprotein medierer celleproliferation og onkogen progression via EGR-1-regulering. Biokemisk og biofysisk forskningskommunikation, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Expression of the Sloppymerase™ in NIH/3T3 Cells: Exploring the Versatility of an Error Prone Fusion Polymerase. 2021.
- Sahinturk, V., et al, Acrylamide exerts its cytotoxicity in NIH/3T3 fibroblast cells by apoptosis. Toksikologi og industriel sundhed, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. og F. Caicci, Discovery of the First Human Retro-Giant Virus: Beskrivelse af dens morfologi, retrovirale kinase og evne til at fremkalde tumorer i mus. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M., et al.,E2F1-Ror2-signalering medierer koordineret transkriptionel regulering for at fremme G1/S-faseovergang ibFGF-stimuleredeNIH/3T3-fibroblaster. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L., et al, Riboflavin Depletion Promotes Tumorigenesis in HEK293T and NIH3T3 Cells by Sustaining Cell Proliferation and Regulating Cell Cycle-Related Gene Transcription. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.