NCI-H1299-celler: Forskning og kliniske implikationer af NCI-H1299-lungekræftceller
NCI-H1299 er en udødeliggjort human ikke-småcellet lungekræftcellelinje, der i vid udstrækning anvendes i forskning i immunonkologi, kræft og lægemiddelopdagelse. Desuden har forskere brugt disse celler til at undersøge lægemiddelfølsomhed, underliggende signalveje og molekylære mekanismer i forbindelse med lungekræft. Desuden anvendes disse celler til at studere virusinfektioner som SARS-CoV-2.
Generelle egenskaber og oprindelse af NCI-H1299-celler
Det første, du skal vide om en cellelinje, er dens oprindelse og generelle karakteristika, da de hjælper dig med at udtænke dens anvendelse i din forskning. Denne del af artiklen vil hjælpe dig med at lære nogle vigtige oplysninger om NCI-H1299's oprindelse og egenskaber. Hvad er f.eks. NCI-H1299 lungekræftceller? Hvilken type celle er NCI-H1299? Hvad er størrelsen på NCI-H1299-celler? Hvad er forskellen mellem A549 og NCI-H1299?
- NCI-H1299-cellelinjen stammer fra en lymfeknudemetastase i lungen hos en 43-årig kaukasisk mandlig kræftpatient.
- Disse celler har en homozygot delvis deletion af p53-genet, og de udtrykker derfor ikke p53-proteinet. Mangel på NCI-H1299 p53-proteinekspression bidrager til den proliferative tendens hos H1299-lungekræftceller.
- Udover p53 rapporteres disse udødelige celler at have NCI-H1299 KRAS-mutation, der er ansvarlig for deres vækst, spredning, migration og invasionsegenskaber.
- NCI-H1299's karyotype er næsten diploid.
- NCI-H1299-celler har en epitelcellelignende morfologi.
- Disse celler er fladtrykte og har en tykkelse på mindre end 5 µm.
NCI-H1299 og A549
NCI-H1299 og A549 er cellelinjer for ikke-små lungekræft. NCI-H1299-celler er mere aggressive og følsomme sammenlignet med A549. Begge har relativt ensartede mutationer, f.eks. KRAS. Men i modsætning til NCI-H1299-cellerne udtrykker A549-cellerne P53-genet.
Information om dyrkning
Det er ikke let at vedligeholde en cellelinjekultur, før man kender alle de vigtigste oplysninger om den, herunder: Hvad er fordoblingstiden for NCI-H1299? Hvad er udsåningstætheden for NCI-H1299? Hvad er NCI-H1299-cellemedier? Hvordan dyrker man NCI-H1299-cellelinjer? Dette afsnit hjælper dig med at finde svarene på alle disse spørgsmål om dyrkning af NCI-H1299-celler.
Nøglepunkter for dyrkning af NCI-H1299-celler
|
Fordoblingstid: |
NCI-H1299-cellernes fordoblingstid ligger mellem 22-30 timer. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
NCI-H1299 er en adhærent cellelinje. |
|
Sub-kultiveringsforhold: |
NCI-H1299-celler subkultiveres i et anbefalet forhold på 1:3 til 1:6. Til udsåning vaskes de adhærente celler med 1x PBS og inkuberes med Accutase-passageringsopløsning i 8 til 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Løsrevne celler tilsættes frisk dyrkningsmedie og centrifugeres. Cellepelleten resuspenderes derefter, og cellerne hældes i nye kolber, der indeholder vækstmedier. |
|
Vækstmedium: |
RPM1 1640 er et ideelt NCI-H1299-cellemedie. Det er suppleret med 10 % føtalt kvægserum, 4500 mg/L glukose, 2,0 mM L-glutamin, 1 mM natriumpyruvat, 1500 mg/L NaHCO3 og 10 mM HEPES. Medierne skal fornyes hver 2. til 3. gang om ugen. |
|
Vækstbetingelser: |
NCI-H1299 lungekræftcellekulturer holdes i en befugtet inkubator ved 37 °C med 5 % CO2-tilførsel. |
|
Opbevaring: |
NCI-H1299-cellelinjen kan opbevares i dampfasen af flydende nitrogen eller i frysere med ultra-lav temperatur ved under -150 °C på lang sigt. |
|
Fryseproces og medie: |
CM-1 eller CM-ACF er frysemedier til NCI-H1299-celler. Cellerne fryses ved hjælp af en langsom fryseproces, der kun tillader et temperaturfald på 1 grad pr. minut for at beskytte cellernes levedygtighed. |
|
Optøningsproces: |
Frosne NCI-H1299-celler omrøres hurtigt i et forvarmet vandbad ved 37 grader Celsius i 40 til 60 sekunder, indtil der er et lille stykke is tilbage. Optøede celler tilsættes friske medier og kan dyrkes direkte i nye kolber eller centrifugeres. I førstnævnte tilfælde skal mediet udskiftes efter 24 timers inkubation. Centrifugering hjælper med at fjerne frysende medieelementer. Bagefter resuspenderes de høstede celler i frisk medium og fordeles i den nye kolbe til dyrkning. |
|
Biologisk sikkerhedsniveau: |
Et laboratorium på biosikkerhedsniveau 1 er påkrævet for at håndtere NCI-H1299-cellekultur. |
Køb NCI-H1299-cellelinjen: Forskningsværktøjer af høj kvalitet til undersøgelse af lungekræftbiologi
Fordele og ulemper ved NCI-H1299-celler
Ligesom andre humane kræftcellelinjer har NCI-H1299 også nogle særlige egenskaber, der er forbundet med specifikke fordele og ulemper. Her har vi opsummeret nogle af de vigtigste.
Fordele og ulemper
De vigtigste fordele ved NCI-H1299-cellelinjen for ikke-småcellet lungekræft er:
-
In vitro-lungekræftmodel
NCI-H1299-cellelinjer er blevet udviklet fra lymfeknudemetastaser af lungekarcinom og har derfor relativt ensartede egenskaber. Derfor kan disse celler fungere som en in vitro-model til at undersøge lungekræftbiologi, celle- og molekylære mekanismer og screene og teste potentielle behandlingsmidler.
-
Nemme at dyrke
NCI-H1299-celler er nemme at dyrke og vedligeholde i et forskningslaboratorium. Der er ingen besværlige krav og procedurer for celledyrkning.
-
NCI-H1299 P53 og NCI-H1299 KRAS-mutation
NCI-H1299-celler mangler p53-genekspression, som gør det muligt for cellerne at sprede sig kraftigt. Desuden har de en KRAS-mutation, som bidrager til cellevækst, spredning, invasion og migration. På den baggrund bruger forskere H1299-celler til at undersøge molekylære mekanismer, der er relevante for KRAS- og P53-mutationer.
Ulemper
Ulemperne ved NCI-H1299-celler er:
-
Vævsspecificitet
NCI-H1299 stammer fra lungevæv. Derfor er dens anvendelighed for det meste begrænset til forskning i lungekarcinom. Den repræsenterer muligvis ikke fuldt ud andre kræfttypers heterogenitet og generelle karakteristika.
Forskningsanvendelser af NCI-H1299-celler
NCI-H1299-cellelinjen bruges i vid udstrækning til forskning i lungekræft. Et par lovende anvendelser af denne cellelinje er nævnt her.
- Kræftbiologi: NCI-H1299-celler er et godt forskningsværktøj til at undersøge kræftudvikling, progression og relaterede celle- og molekylære mekanismer. Disse celler er udstyret med visse mutationer, som gør det muligt for forskere at udforske relateret kræftcelleadfærd, signalveje og genekspressionsprofiler. Flere studier har brugt NCI-H1299-cellelinjen for ikke-småcellet lungekarcinom til at studere lungekræftbiologi. Et studie fra 2018 undersøgte f.eks. den signalvej, der er involveret i apoptose af lungekræftceller, ved hjælp af NCI-H1299-celler. Forskerne fandt ud af, at PI3K/AKT-signalvejen bidrager til celleproliferation, og at dens hæmning kan forårsage kræftcelledød [1]. Ligeledes undersøgte en anden forskning de mekanismer, der er involveret i NCI-H1299 epitelial-til-mesenchymal transition (EMT). Denne undersøgelse foreslog, at et ekstracellulært protein SPARC (udskilt protein surt og rigt på cystein) bidrager til NCI-H1299 EMT og migration og dermed fremmer tumorigenese i celler - SPARC-proteinet fungerer som en mediator for TGF-β1-signalering [2].
- Opdagelse og screening af lægemidler: NCI-H1299, en human lungekræftcellelinje, bruges i vid udstrækning til at vurdere toksiciteten og effekten af potentielle lægemidler. Desuden bruges den af forskere til at undersøge virkningsmekanismen for antitumorlægemidler. Undersøgelser har også brugt disse celler til at identificere mulige lægemiddelmål og resistensmekanismer. For eksempel undersøgte Xiao-Yun Shen og kolleger det naturlige stof bruceine D's (BD) potentiale mod kræft. Resultaterne viste, at BD markant hæmmer spredning, invasion og migration af NCI-H1299-celler. Derfor kan det betragtes som en potentiel adjuverende terapi til behandling af ikke-småcellet lungekarcinom [3]. På samme måde evaluerede en undersøgelse de cytotoksiske virkninger af xanthohumol alene og i kombination med cisplatin kemoterapeutisk lægemiddel på NCI-H1299 lungekræftceller [4].
Forskningspublikationer med NCI-H1299-celler
Nogle af de vigtigste og mest citerede forskningspublikationer om NCI-H1299 lungekarcinomcellelinjen findes her.
Denne artikel er udgivet i tidsskriftet Human and Experimental Toxicology (2021). Undersøgelsen foreslog, at indol-3-carbinol inducerer apoptose i H1299 via forhøjede niveauer af reaktive oxygenarter (ROS).
Denne forskning blev offentliggjort i 2018 i tidsskriftet Cellular Physiology and Biochemistry. Forskningsresultaterne afslørede, at kombinationen af koffeinsyre og paclitaxel har en synergistisk effekt mod kræft i cellelinjen for ikke-småcellet lungekræft, NCI-H1299.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i Molecular Medicine Reports (2018). Undersøgelsen evaluerede antitumoreffekten af tubeimosid-1, et triterpenoid-saponin, og de underliggende mekanismer i NCI-H1299-cellelinjen.
Pristimerin inducerer apoptose og hæmmer spredning og migration i H1299-lungekræftceller
Denne artikel offentliggjort i Journal of Cancer (2020) foreslog, at Pristimerin, en naturlig forbindelse, undertrykker spredning og migration af NCI-H1299-celler.
Mekanisme for VIPR1-genregulering af humane lungeadenokarcinom H1299-celler
Dette studie i Medical Oncology (2019) undersøgte de potentielle effekter af VIPR1-genets overekspression på NCI-H1299 adenokarcinom-cellelinjen.
Ressourcer til NCI-H1299-cellelinjen: Protokoller, videoer og meget mere
Her er nogle online-ressourcer med NCI-H1299-celler.
- NCI-H1299-transfektion: Denne video forklarer protokollen for transient transfektion for NCI-H1299-cellelinjer.
- Subkulturering af en adhærent cellelinje: Denne video hjælper dig med at lære en generel subkultureringsprocedure for en adhærent cellelinje.
Følgende link indeholder oplysninger om celledyrkning for NCI-H1299-celler.
- NCI-H1299 cellelinje: Dette link kan hjælpe dig med at lære om NCI-H1299-cellepassage- og transfektionsprotokollen.
Ofte stillede spørgsmål om NCI-H1299-cellelinjen
Referencer
- Gu, J., et al., Undersøgelse af EGCG-induceret apoptose i lungekræftceller ved at hæmme PI3K/Akt-signalvejen. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC fungerer som mediator for TGF-β1 i forbindelse med fremme af epitelial-til-mesenchymal transition i A549- og H1299-lungekræftceller. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al, A study on the mechanism of bruceine D in the treatment of non-small cell lung cancer H1299 cells. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al, Cytotoksiske virkninger af Xanthohumol og dets kombination med Cisplatin på humane metastatiske lungekræftceller H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.