HT-29-cellelinje
HT-29 er en human kolorektal kræftcellelinje med en bred vifte af anvendelsesmuligheder inden for kræft- og toksikologisk forskning. Disse celler er f.eks. følsomme over for standard kemoterapeutiske behandlinger mod kolorektal kræft. Derudover er HT-29-cellelinjen en velkarakteriseret in vitro-model til undersøgelse af tarmepitelets reaktion på bakteriel infektion. HT-29-cellerne efterligner egenskaberne hos modne tarmceller, dvs. enterocytter, og er derfor velegnede til vedhæftnings- og mekanistiske studier.
- Vækstmedium
- Se produktsiden
- Fordoblingstid
- Se produktsiden
- Væksttype
- Adhærent
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Fås hos
- Cytion — Bestil HT-29
HT-29-celler: Oprindelse og generel information
Inden du bruger en cellelinje, bør du kende dens generelle egenskaber og oprindelse. Dette afsnit hjælper dig med at lære: Hvad er HT-29-celler? Er HT-29 en cellelinje for kolorektal cancer? Hvad er morfologien for HT-29-celler?
Hvad er HT-29-cellelinjen? HT-29 er en kolorektal adenokarcinomcellelinje, der blev etableret i 1964 af Trempe og Fogh. Cellerne stammer oprindeligt fra en primær tumor hos en kaukasisk kvinde (44 år) med kolorektal adenokarcinom [1]. Siden etableringen er denne cellelinje blevet brugt til at studere kræftbiologi.
Morfologi af HT-29-celler: HT-29-cellelinjen har generelt en epitelagtig morfologi. Differenserede celler vokser i monolag, danner tætte celle-celle-forbindelser og har en apikal børstekant. Hvis disse celler dyrkes i et glukosemangelmedium eller gives induktorer som butyrat eller syre, udviser de enterocytlignende træk.
Cellestørrelse: Diameteren af HT-29-kolorektal kræftcellelinjen er 11 μm.
Genom og ploidi: Det modale antal kromosomer for HT-29-cellelinjen er 71. Det kan variere fra 68 til 72. Desuden er det strømlinede kromosomantal for HT-29-celler hypertriploid, hvor 2S-komponenten forekommer med en frekvens på 2,4 %.
Hvad er HT29 MTX? HT29 MTX er en methotrexat-resistent cellelinje isoleret fra den oprindelige HT-29 humane tyktarmskræftcellelinje ved tilpasning til 10 µM methotrexat. Disse celler udviser karakteristika for slimudskillende modne bægerceller.
Oplysninger om cellekulturen for HT-29-cellelinjen
At kende de grundlæggende dyrkningskrav for en cellelinje kan gøre dit arbejde med den lettere. Du bør vide: hvad er fordoblingstiden for HT-29-cellelinjen? Hvad er udsåningsdensiteten for HT-29-celler? Hvilke medier skal der bruges til HT-29-celler?
Fordoblingstid
Den gennemsnitlige fordoblingstid for HT-29-cellelinjen er 24 timer.
Adhærent/suspension
HT-29 er en adhærent cellelinje.
Udsåningstæthed
Den anbefalede udsåningstæthed for HT-29-celler er 3 x 104 celler/cm2. Dyrkede celler vaskes med 1X PBS og løsnes efter inkubation med Accutase i 8-10 minutter. Der tilsættes frisk medie, og cellerne centrifugeres. Cellepelleten resuspenderes, og cellerne dispenseres i nye kolber ved den anbefalede celletæthed.
Vækstmedium
Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) tilsat 2,5 mM L-glutamin og 10 % FBS anvendes til optimal dyrkning af HT-29-celler. Mediet bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
Vækstbetingelser
HT-29-celler kræver en fugtig inkubator med en temperatur på 37 °C og 5 % CO2-tilførsel for at vokse.
Opbevaring
Disse celler opbevares i dampfasen af flydende nitrogen ved under -195 °C.
Frysemedium og -proces
Det frysemedium, der anvendes til HT-29-cellelinjen, er CM-1 eller CM-ACF. Cellerne fryses ved en langsom fryseproces, der medfører et temperaturfald på 1 °C og effektivt beskytter cellernes levedygtighed.
Optøningsproces
Frosne HT-29-celler optøs i et vandbad indstillet til 37 °C. Disse celler kan resuspenderes og dispenseres direkte i kolben med frisk vækstmedium. I modsætning hertil kan de optøede celler centrifugeres for at fjerne elementer fra frysemediet, resuspenderes i frisk medium og dyrkes i kolber.
Biosikkerhedsniveau
Biosikkerhedsniveau 1 anvendes til håndtering og opbevaring af HT-29-cellelinjen.
HT-29-celler: Fordele og begrænsninger
Hver cellelinje har sine egne fordele og ulemper, der adskiller den fra andre cellelinjer. Dette afsnit vil gennemgå de vigtigste fordele og begrænsninger forbundet med HT-29-celler.
Fordele
De vigtigste fordele ved HT-29-celler er:
-
Let at dyrke
HT-29-cellelinjen er nem at håndtere og vedligeholde og stiller ingen komplekse krav til dyrkning. Den dyrkes i vid udstrækning i forskningslaboratorier.
-
In vitro-model af tarmceller
HT-29-celler kan differentieres til modne tarmceller (enterocytter og slimproducerende celler) under specifikke dyrkningsbetingelser. De bruges som en cellulær model til at studere fordøjelsen af fødevarer og biotilgængelighed.
-
Høj transfektionseffektivitet
HT-29-tyktarmskræftceller har høj transfektionseffektivitet, hvilket gør dem velegnede til studier af genekspression og -regulering. Både midlertidige og stabile transfektionseksperimenter kan udføres ved hjælp af forskellige metoder.
-
Lægemiddelfølsomhed
HT-29-celler er følsomme over for kemoterapeutiske lægemidler såsom fluorouracil og oxaliplatin, der ofte anvendes til behandling af tyktarmskræft. De anvendes til at undersøge lægemiddelresistens og screene potentielle terapeutiske lægemidler til kolorektal karcinom.
Begrænsninger
-
Heterogenitet
HT-29-celler udviser, ligesom andre kræftcellelinjer, heterogenitet og danner muligvis ikke en ensartet cellepopulation. Dette kan påvirke reproducerbarheden af resultaterne i visse assays og føre til mindre variationer i eksperimentelle resultater.
-
Begrænset differentiering
HT-29-celler har et begrænset differentieringspotentiale. De differentieres ikke fuldt ud til tarm- eller tyktarmsceller, men udviser kun få karakteristiske træk. Denne begrænsning kan indskrænke deres anvendelse i undersøgelsen af mere komplekse biologiske processer.
HT-29-celler: Anvendelser
HT-29-cellelinjen dyrkes i vid udstrækning i forskningslaboratorier på grund af dens brede vifte af anvendelsesmuligheder. Dette afsnit vil kun dække nogle få væsentlige anvendelser af HT-29-celler.
Kræftforskning: HT-29 er en kolorektal adenokarcinomcellelinje, så den bruges til at studere kræftprogression, udvikling og underliggende molekylære mekanismer. En undersøgelse gennemført i 2018 brugte HT-29-cellelinjen til at undersøge de cellemolekyler, der er ansvarlige for metastase. Denne undersøgelse observerede, at vimentin- og CXCR4-gener regulerer cellemetastaser. Mens transfektion af mikroRNA-193a-5p-mimik kan reducere mRNA-niveauerne af disse gener og med succes mindske kræftcellernes metastaser [2].
Toksikologisk forskning: HT-29-cellelinjen anvendes i vid udstrækning i toksikologisk forskning. Disse kolorektale karcinomceller bruges til at vurdere toksiciteten af forskellige lægemiddelkandidater ved hjælp af forskellige assays. For eksempel undersøgte en undersøgelse det potentielle toksicitet af et etanolutdrag fra planten Syzygium cumini på HT-29-cellelinjen. Resultaterne viste en signifikant hæmning af HT-29-cellevæksten, hvilket indikerer ekstraktets lovende kræftbekæmpende egenskaber [3].
Mikrobiologi: HT-29 kan anvendes som et værtscellesystem til at undersøge patogenesen af potentielle mikrober, dvs. bakterier og vira. Forskere kan inficere HT-29-celler med mikrober for at undersøge deres virulens og værtsrespons. I en sådan undersøgelse blev HT-29-celler anvendt til at undersøge mælkesyrebakteriers probiotiske egenskaber [4]. I en anden undersøgelse blev HT-29-celler anvendt til at evaluere effektiviteten og sikkerheden af bakteriofagbehandlinger [5].
5. Forskningspublikationer om HT-29-celler
Dette afsnit vil belyse nogle bemærkelsesværdige publikationer om HT-29-celler, som vil hjælpe dig med at udforme din forskningsundersøgelse.
Denne undersøgelse foreslog Syzygium cumini-ethanolekstrakt som et potentielt kræftbekæmpende middel mod den kolorektale kræftcellelinje HT-29. Ekstraktet hæmmede væksten af kræftceller betydeligt.
Denne publikation i Bioscience Reports testede den kræftbekæmpende virkning af et stof, Tetradrine, på HT-29-celler. Resultaterne viste, at tetrandrin hæmmer kræftcellers spredning og vækst via regulering af cellernes signalveje.
Denne undersøgelse foreslog, at miRNA-193a-5p potentielt kan regulere HT-29-cellemetastaser ved at regulere metastaserelaterede gener.
Denne artikel er offentliggjort i Nature Scientific Reports i 2018. Denne undersøgelse anvendte den tumorigeniske HT-29-cellelinje som en tarmcellemodel til at evaluere effektiviteten af den foreslåede bakteriofagbehandling.
I denne undersøgelse anvendte forskerne HT-29-celler til at undersøge mælkesyrebakteriers probiotiske aktiviteter. Interessant nok viste undersøgelsen, at lactobaciller forhindrer patogene bakterier i at hæfte sig til tyktarmsceller.
HT-29-celler Ressourcer: Protokoller, videoer og mere
Dette afsnit vil dække nogle online ressourcer, der er tilgængelige om HT-29-celler, som vil hjælpe med at lære deres vedligeholdelses-, dyrknings- og transfektionsprotokoller.
Protokoller for cellekulturer
Følgende ressourcer vil guide dig gennem subkultivering af HT-29-celler.
- Dyrkning af HT-29-celler: Dette link giver grundlæggende viden om vækstmediet, optøning og subkultivering af HT-29-celler.
- Vedligeholdelse af HT-29-kulturer: Denne artikel indeholder alle nyttige oplysninger om dyrkning og vedligeholdelse af HT-29-celler.
Transfektionsprotokoller
HT-29-cellelinjen har stor transfektionseffektivitet og bruges ofte i genekspressionsstudier. Følgende ressourcer beskriver de mulige transfektionsprotokoller for disse celler.
- Transfektion af HT-29: Dette link indeholder en detaljeret protokol for transfektion af HT-29-celler.
- Transfektion af HT-29-cellelinjen: Dette dokument beskriver transfektionsprotokollen for HT-29-cellelinjen med plasmid-DNA.
Videoer relateret til HT-29-cellelinjen
Her er nogle videoer om dyrkning og vedligeholdelse af denne tumorigeniske cellelinje.
- Passering af celler: Denne video viser protokollen for passering af adhærente cellelinjer.
- Transfektion af HT-29-celler: Denne video vil guide dig gennem den transfektionsmetode, der anvendes til HT-29-celler.
Vi forventer, at oplysningerne i denne artikel er værdifulde og tilstrækkelige til, at du kan håndtere og vedligeholde HT-29-cellelinjen. Hvis du planlægger at bruge HT-29-celler i din undersøgelse, kan du bestille dem hos os.
Referencer
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles og I. Recio, HT29-cellelinje. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: s. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., microRNA‐193a‐5p hæmmer migrationen af humane HT‐29-tyktarmskræftceller via undertrykkelse af metastasevejen. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): s. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean og R. Safaralizadeh, Evaluering af den kræftbekæmpende virkning af etanolutdrag af Syzygium cumini på HT-29-kolorektalcellelinjen. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: s. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Probiotiske egenskaber hos lactobaciller og deres evne til at hæmme adhæsionen af enteropatogene bakterier til Caco-2- og HT-29-celler. Probiotics and antimicrobial proteins, 2021. 13: s. 102-112.
- Shan, J., et al., Bakteriofager er mere virulente over for bakterier med humane celler end i bakteriekultur; indsigt fra HT-29-celler. Scientific reports, 2018. 8(1): s. 5091.