DU-145-celler – En omfattende guide til forskere
DU-145 er en human prostatacarcinomcellelinje, der er bredt anvendt i biomedicinsk forskning. Disse celler fungerer som en uvurderlig model til undersøgelse af prostatacancerbioologi, lægemiddelafprøvning og udvikling. Desuden anvender forskere også DU-145-celler til at undersøge molekylære mekanismer, der ligger til grund for udvikling, vækst og progression af prostatacancer.
- Vækstmedium
- EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) med medietilskud, dvs. 10 % føtal bovint serum (FBS), 2 mM L-glutamin, 2,2 g/l NaHCO3 og EBSS. Mediet fornyes 2 til 3 gange om ugen.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for DU-145 ligger mellem 30 og 40 timer.
- Væksttype
- DU-145 er en adhærent cellelinje.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Fås hos
- Cytion — Bestil DU-145
Generel information og oprindelse af DU-145-cellelinjen
Det er vigtigt at forstå en cellelinjes grundlæggende egenskaber og oprindelse, inden man begynder at arbejde med den. Dette afsnit giver en omfattende forståelse af DU-145-cellelinjens egenskaber og oprindelse. Du vil lære: Hvad er DU145-kræftceller? Hvad er morfologien af DU145-celler? Hvad er forskellen mellem PC-3 og DU145?
- DU-145, en human prostatacancercellelinje, stammer fra hjernen på en kaukasisk mand (69 år) med metastatisk prostatacarcinom. Disse celler blev først deponeret af K.R. Stone og kolleger i 1978.
- Ligesom PC-3-prostatacancerceller udtrykker DU-145 også androgenreceptorer. Når disse celler udsættes for behandling med androgenligander, viser de imidlertid ingen aktivitet af androgenreceptorresponsive gener og betragtes derfor som androgenuafhængige celler.
- DU-145-celler har en epitelial morfologi.
- DU-145-celler er hypotriploide og har et modalt kromosomantal på 64. De udviser flere markørkromosomer, såsom del (11) (q23), t(11q12q), 16q+, del (1) (p32) og del (9) (p11).
PC-3 vs. DU145
Begge prostatacancercellelinjer er androgenreceptor-uafhængige. De adskiller sig med hensyn til deres tumorigeniske og metastatiske potentiale. Når den injiceres i en immunkompromitteret mus, danner PC-3-cellelinjen et stærkt metastatisk adenocarcinom af grad IV. I modsætning hertil udvikler DU-145-cellelinjen prostatacancer med moderat metastatisk potentiale [1].
Dyrkning af DU-145-celler
DU-145-cellelinjen er meget udbredt i forskningslaboratorier, der arbejder med prostatakræft. Du bør lære følgende nøglepunkter for at sikre en nem og effektiv dyrkning. Dette afsnit indeholder oplysninger om DU145-mediet, fordoblingstid, cellekulturforhold og protokoller.
Vigtige punkter ved dyrkning af DU-145-celler
Populationsfordoblingstid:
Fordoblingstiden for DU-145 ligger mellem 30 og 40 timer.
Adhærent eller i suspension:
DU-145 er en adhærent cellelinje.
Udsåningstæthed:
DU-145-celler udsættes ved en anbefalet celletæthed på 2 x 104 celler/cm2. Ved denne tæthed danner cellerne et sammenhængende monolag på næsten 4 dage. Til udsåning vaskes cellerne med 1 x fosfatbuffersaltvand og inkuberes med passageringsopløsning, Accutase. Efter 8 til 10 minutters inkubering ved stuetemperatur tilsættes cellerne frisk dyrkningsmedium og centrifugeres. Den opsamlede cellepellet resuspenderes omhyggeligt, og cellerne hældes i nye dyrkningsflasker til vækst.
Vækstmedium:
EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) med medietilskud, dvs. 10 % føtal bovint serum (FBS), 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 og EBSS. Mediet fornyes 2 til 3 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
DU-145-kulturer opbevares i en befugtet inkubator ved 37 °C med en 5 % CO2-kilde.
Opbevaring:
DU-145-celler opbevares i dampfasen af flydende nitrogen eller ved en temperatur under -150 °C i en elektrisk fryser for at opretholde cellernes levedygtighed i længere tid.
Fryseproces og medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysemedier anbefales til DU-145-prostatacancerceller. Der vælges en langsom frysemetode, hvor temperaturen sænkes gradvist med 1 °C, til at fryse cellerne. Dette forhindrer cellerne i at få et chok og hjælper med at bevare deres levedygtighed.
Optøningsproces:
Frosne DU-145-cellehætteglas optøs hurtigt i et 37 °C varmt vandbad i 40 til 60 sekunder. Derefter tilsættes der dyrkningsmedier til cellerne, og de centrifugeres for at fjerne komponenterne i frysemediet. De høstede celler resuspenderes i et vækstmedium og hældes i kolben til vækst. Det tager næsten 24 timer at genoprette cellerne efter nedfrysning.
Biosikkerhedsniveau:
Der kræves biosikkerhedsniveau 1 for at dyrke den androgenreceptor-uafhængige cellelinje DU145.
DU-145-cellelinjen: Fordele og begrænsninger
Ligesom andre cellelinjer er prostatacancercellelinjen DU-145 forbundet med visse fordele og ulemper. Disse egenskaber kan hjælpe dig med at beslutte, om den skal anvendes i din forskning. De vigtigste fordele og ulemper ved DU-145-celler er nævnt nedenfor.
Fordele
Fordelene ved DU-145-celler er:
Tumorigenicitet
DU-145 er en aggressiv tumorigenisk prostatacancercellelinje med moderat metastatisk potentiale. Anvendes til udvikling af DU145-xenotransplantatmodellen i immunkompromitterede mus til at studere prostatacancerbioologi, udvikling og vækst in vitro og in vivo.
Androgenreceptor-uafhængighed
DU-145-prostatacancerceller er androgenreceptor-uafhængige. De er ikke afhængige af androgener for at vokse og viser ingen reaktion på celle- og molekylært niveau, når de behandles med androgener. Ideel til forskning i hormon-uafhængige mekanismer i prostatacancer.
Begrænsninger
Begrænsningerne ved DU-145-cellelinjen er:
In vitro-model
DU-145 er en in vitro-cellemodel for metastatisk prostatacarcinom, så den repræsenterer muligvis ikke fuldt ud kompleksiteten af primære prostatatumorer. Desuden dækker den muligvis ikke alle typer og undertyper af prostatacancer på grund af specifikke egenskaber såsom androgenreceptor-uafhængighed.
Forskningsanvendelser af DU-145-celler
DU-145-prostatacancercellelinjen har en bred vifte af forskningsanvendelser. Her er nogle få lovende anvendelser.
- Prostatacancerbiologi: DU-145 er en relevant model til at studere prostatacancerbiologi. Forskere anvender disse celler til at undersøge molekylære mekanismer, der driver kræftudvikling, progression og metastase. Desuden undersøges genetiske ændringer, der ofte er forbundet med prostatacancer. Forskning udført i 2021 undersøgte DU-145-cellerne for at identificere potentielle biomarkører med henblik på effektive diagnostiske og terapeutiske implikationer. Undersøgelsen pegede på aktin gamma 1 (ACTG1) som en potentiel biomarkør for prostatacancer, da det fremmer kræftcellers proliferation og regulerer metastase via aktivering af MAPK/ERK-signalvejen [2].
- Lægemiddelscreening og -udvikling: DU-145-prostatacancerceller anvendes i vid udstrækning til at teste cytotoksicitet og effektivitet af potentielle kræftlægemidler. Dette hjælper forskere med at identificere nye lægemidler, forstå lægemiddelresistens og underliggende molekylære mekanismer. En undersøgelse gennemført i 2022 undersøgte den cytotoksiske virkning af en harpiksagtig blanding, propolis eller bi-lim, i prostatacancercellelinjerne PC-3 og DU-145. Undersøgelsen viste væksthæmmende effekter af dette naturlige stof i begge cellelinjer og foreslog dets potentiale som kræftmiddel [3]. I 2019 blev der gennemført en anden undersøgelse, der undersøgte de antiproliferative virkninger af et naturligt stof, betain, i DU-145-prostatacancerceller. Forskningen viste, at betain udøver antiproliferative aktiviteter ved at øge oxidativ stress-medieret celledød og inflammation i DU-145-celler [4].
5. Forskningspublikationer om DU-145-celler
Nedenfor følger nogle forskningspublikationer om DU-145-cellelinjen.
Denne undersøgelse i Biological Trace Element Research, 2020, foreslog, at zinksulfat (ZnSo4) udøver antiproliferative effekter i DU-145-celler via induktion af apoptose, morfologiske ændringer, oxidativ skade og inflammation.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i BMC Complementary Medicine and Therapies i 2020. Denne undersøgelse undersøgte det cytotoksiske og antimetastatiske potentiale af en plante, Annona muricata L.-barkekstrakt, og dets bioaktive annonacin i DU-145-cellelinjen.
Denne publikation i IUBMB Life (2019) foreslog, at interaktionen mellem det lange ikke-kodende RNA LOXL1-AS1 og miR-let-7a-5p samt EGFR-signalvejen regulerer doxorubicinresistensen i DU-145-prostatacancerceller.
Denne artikel i Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2020) fastslog, at nedregulering af Discoidin Domain Receptor1 (DDR1)-genet forårsager DU-145-celledød og hæmmer epitel-til-mesenkym-overgang (EMT) via aktivering af Pyk2/MKK7-signalvejen.
Denne undersøgelse i Journal of Food Biochemistry (2019) foreslog, at Casticin, et polymethoxyflavon, hæmmer migration og invasion af DU-145-celler ved at regulere Ras/Akt/NF-κB-signalering.
Ressourcer til DU-145-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Der findes mange online ressourcer om DU-145-prostatacancercellelinjen. I dette afsnit nævnes et par ressourcer, der forklarer håndtering, vedligeholdelse og transfektionsprotokol for disse celler:
- DU-145-transfektion: Denne videovejledning er en trinvis guide til at lære protokollen for transfektion af DU-145-celler.
DU-145-cellekulturprotokollen nævnes her.
- DU-145-subkultivering: Dette link hjælper dig med at lære protokollen for subkultivering eller subkultivering af DU-145-celler.
- DU-145-celler: Denne hjemmeside indeholder masser af nyttig information om DU-145-cellelinjen, herunder DU145-medium, protokol for subkultivering samt håndtering af proliferative og kryopræserverede kulturer.
Referencer
- Lima, A.R., et al., Diskrimination mellem det normale og kræftcellernes eksometabolom i den menneskelige prostata ved hjælp af GC-MS. Scientific reports, 2018. 8(1): s. 5539.
- Xiao, L., et al., Silencing ACTG1 expression induces prostate cancer epithelial mesenchymal transition through MAPK/ERK signaling pathway. DNA and Cell Biology, 2021. 40(11): s. 1445-1455.
- Gogacz, M., et al., Anticancer-effekter af propolisekstrakter fremstillet ved koldseparationsmetoden på PC-3- og DU-145-prostatacancercellelinjer. Molecules, 2022. 27(23): s. 8245.
- Kar, F., et al., Betain hæmmer celleproliferation ved at øge oxidativt stress-medieret apoptose og inflammation i den humane prostatacancercellelinje DU-145. Cell Stress and Chaperones, 2019. 24: s. 871-881.