Accutase-cellefrigørelsesvæske med EDTA og fenolrød – 100 ml

Accutase er en brugsklar, sterilt filtreret celleafløsningsopløsning, der er udviklet som et skånsomt alternativ til trypsin/EDTA til at adskille vedhæftede pattedyrceller fra standard plastudstyr til vævskultur og overflader med vedhæftningsbelægning. Den kombinerer proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet i en afbalanceret saltopløsning for at sikre en effektiv, men kontrolleret adskillelse, der bevarer proteinerne på celleoverfladen og understøtter høj levedygtighed efter passage samt hurtig genvedhæftning.

Accutase-formuleringen er baseret på Dulbeccos phosphatbufferede saltvand (DPBS) med EDTA og fenolrødt som visuel pH-indikator. Enzymerne er af ikke-pattedyr
- og ikke-bakteriel oprindelse, hvilket gør Accutase særligt velegnet til stamcelleforskning, vaccinearbejdsgange og enhver anvendelse, hvor forurening fra dyr eller mikroorganismer skal minimeres. Opløsningen hæmmer sig selv ved 37 °C, så der kræves ingen neutraliserende reagens eller serumholdigt medium efter løsningen – cellerne kan overføres direkte til frisk medium.

Nøglefunktioner

Klar til brug 1x sterilt filtreret væske – ingen fortynding eller rekonstituering kræves
Kombineret proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet for skånsom dissociation
Hvert parti er standardiseret til en defineret dissociationsaktivitet for konsistens fra parti til parti
Enzymer af ikke-pattedyr og ikke-bakteriel oprindelse
Selvhæmmer ved 37 °C – ingen neutraliserende opløsning nødvendig
Formuleret i Dulbeccos PBS med EDTA
Fenolrødt inkluderet som visuel pH-indikator
pH 6,8 – 7,8


Typiske anvendelser
Accutase adskiller skånsomt en lang række adhærente og følsomme celletyper, herunder humane embryonale stamceller (hESCs), humane inducerede pluripotente stamceller (iPSCs), neurale stamceller, primære neuroner og rutinemæssigt dyrkede adhærente cellelinjer såsom HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 og A549. Typiske anvendelsestilfælde omfatter:

Rutinemæssig subkultur og passering af adhærente pattedyrceller
Skånsom enkeltcelle-dissociation af hESC'er, iPSC'er og andre følsomme linjer
Prøveforberedelse til flowcytometri og FACS-analyse
Analyse af celleoverflademarkører, hvor epitopintegritet er afgørende
Assays af cellemigration, proliferation og apoptose
Hviletilstandsassays ved serumudtømning og onkogen-transfektionsstudier
Assays af tumorcelle
- og neuralkamcellemigration
Opskalering af produktionen i bioreaktor-arbejdsgange

Til rutinearbejde påføres ca. 10 ml Accutase pr. 75 cm2 kulturoverflade og inkuberes i 5–10 minutter ved stuetemperatur. Den optimale inkuberingstid bør bestemmes for hver cellelinje og bør ikke overstige en time. Før tilsætning skylles cellelaget med en Ca2+/Mg2+-fri saltopløsning, såsom DPBS uden calcium og magnesium, for at fjerne resterende serum og toværdige kationer.

Håndtering og opbevaring
Opbevar den uåbnede flaske frosset ved -15 °C eller derunder. Optø enten ved stuetemperatur eller natten over ved +2 °C til +8 °C. Optø ikke Accutase i et 37 °C vandbad, da forhøjede temperaturer reducerer enzymaktiviteten. Efter optøning kan opløsningen opbevares i op til 2 måneder ved +2 °C til +8 °C; opbevar ikke ved stuetemperatur. Reagenset må ikke forvarmes til 37 °C før anvendelse – tilsæt det direkte til vaskede celler ved stuetemperatur. For at opnå lang holdbarhed anbefales det at opdele reagenset i engangsportioner for at undgå gentagne optøningscyklusser. Arbejd altid under aseptiske forhold.

Kvalitet
Fremstillet under strenge kvalitetsstandarder. Hvert parti Accutase er sterilt filtreret og testet for sterilitet, pH, udseende og dissociationsaktivitet for at sikre ensartet, reproducerbar ydeevne fra parti til parti.

Produktspecifikationer



Specifikation
Detaljer



ProdukttypeReagens til celleafløsning/dissociation
FormatSterilfiltreret væske, klar til brug
Volumen100 ml
Arbejdskoncentration1x (klar til brug)
EnzymaktivitetKombineret proteolytisk og kollagenolytisk
Enzymets oprindelseIkke-pattedyr og ikke-bakterielt
BuffersystemDulbeccos PBS med EDTA
pH-indikatorFenolrød
pH-interval6,8 – 7,8
UdseendeKlar, lyserød til orange opløsning
Opbevaringstemperatur-15 °C eller derunder
Stabilitet efter optøningOp til 2 måneder ved +2 °C til +8 °C
Anbefalet anvendelsesvolumen~10 ml pr. 75 cm2 dyrkningsflade
Typisk inkubationstid5 – 10 minutter ved stuetemperatur
ForsendelsesbetingelserFrosset på tøris
Tilsigtet anvendelseUdelukkende til forskningsbrug og videreforarbejdning



Formulering (sammensætning pr. liter)



Komponent
Koncentration (mg/L)




Uorganiske salte

Natriumchlorid (NaCl)8000,00
Dinatriumhydrogenphosphat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumchlorid (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4)200,00

Andre komponenter

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Phenolrød3,00
Proprietær enzymblanding (proteolytisk og kollagenolytisk aktivitet)1x



Accutase er et registreret varemærke tilhørende Innovative Cell Technologies, Inc.

Fosfatbufferet saltopløsning (PBS)
Fosfatbufferet saltvand (PBS) er en meget anvendt bufferopløsning inden for biologisk og kemisk forskning. Den spiller en afgørende rolle i opretholdelsen af pH-balancen og osmolariteten under forskellige eksperimentelle procedurer, herunder vævsbehandling og cellekultur. Vores PBS-opløsning er omhyggeligt formuleret med ingredienser af høj renhed for at sikre stabilitet og pålidelighed i hvert eksperiment. Osmolariteten og ionkoncentrationerne i vores PBS efterligner nøje dem i menneskekroppen, hvilket gør den isotonisk og ugiftig for de fleste celler.

Sammensætning af vores PBS-opløsning
Vores PBS-opløsning er en pH-justeret blanding af ultrarene fosfatbuffere og saltopløsninger. Ved en 1X arbejdskoncentration indeholder den:

8000 mg/L natriumklorid (NaCl)
200 mg/L kaliumklorid (KCl)
1150 mg/L Natriumfosfat dibasisk vandfri (Na2HPO4)
200 mg/L Vandfri monobasisk kaliumfosfat (KH2PO4)

Denne sammensætning sikrer en optimal pH
- og ionbalance, der er velegnet til en lang række biologiske anvendelser.

Anvendelser af vores PBS-opløsning
Vores PBS-opløsning er ideel til forskellige anvendelser inden for biologisk forskning. Dens isotoniske og ikke-toksiske egenskaber gør den velegnet til fortynding af stoffer og skylning af cellebeholdere. PBS-opløsninger, der indeholder EDTA, er effektive til at løsne fastgjorte og sammenklumpede celler. Der bør dog ikke tilsættes divalente metaller som f.eks. zink til PBS, da det kan forårsage udfældning. I sådanne tilfælde anbefales Good's buffere. Derudover er vores PBS-opløsning et acceptabelt alternativ til viralt transportmedium til transport og opbevaring af RNA-vira, herunder SARS-CoV-2.

Kvalitetskontrol

Sterilt filtreret


Opbevaring og holdbarhed

Opbevares ved +2°C til +25°C, beskyttet mod lys.
Når den er åbnet, skal den opbevares ved 2 °C til 25 °C og bruges inden for 24 måneder.


Betingelser for forsendelse

Omgivelsestemperatur


Vedligeholdelse

Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da det forringer produktkvaliteten.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerede varmekilder som f.eks. mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du fjerne den nødvendige mængde og varme den op til stuetemperatur før brug.

Sammensætning



Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)


Salte
Kaliumklorid
200



Vandfrit monobasisk kaliumfosfat
200



Natriumklorid
8000



Natriumfosfat dibasisk vandfri
1150

Mycoplasma er små prokaryote organismer, som er for små til at kunne ses i mikroskop, og som ikke kan elimineres med almindelige antibiotiske reagenser. Mycoplasma kan påvirke cellevækst, spredning og morfologi af cellelinjer, hvilket kan føre til upålidelige eksperimentelle resultater. ca. 15 til 35 % af laboratoriecellekulturer er forurenet med mycoplasma. Derfor anbefales en hyppig kontrol for at garantere et mycoplasmafrit miljø.
Analysemetode
CLS tilbyder både korttids
- og langtidstest til påvisning af mycoplasma. I førstnævnte testes prøverne umiddelbart efter ankomst, mens der i sidstnævnte påbegyndes celledyrkning, og cellerne testes efter 14 dages antibiotikafri dyrkning. Mycoplasma-testning udføres ved hjælp af et to-punkts detektionssystem med både PlasmoTest™
- Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) og Certus QC
- mycoADVANCED detektionskit (Certus).
Prøver

Til den hurtige test skal der leveres mindst 50 µl cellesuspension indeholdende 50.000 celler. Cellesuspensionen kan sendes ved omgivelsestemperatur.
Til premium-testen skal du levere mindst 1 million celler i et egnet frysemedium for at sikre en robust og sund kultur til dyrkning og efterfølgende testning af cellerne. Forsend venligst prøverne på tøris.

Udfyld venligst Mycoplasma Testme Sample Form og vedlæg den din prøveforsendelse.

Kolorimetrisk reporter-assay
Denne test er et cellebaseret kolorimetrisk assay. I nærvær af mycoplasma inducerer en reportercellelinje en signalkaskade, der udløser en farveændring i mediet fra rød til blå. Assayet udføres i 96-brønds multibrøndplader. Signalerne registreres i et mikropladespektrofotometer ved 620-655 nm. Alle mycoplasma
- og acholeplasma-arter, men også andre kontaminanter i cellekulturer som f.eks. bakterier, påvises.
Isotermisk amplifikation
Isotermisk amplifikation er en hurtig og pålidelig test baseret på isotermisk amplifikation af mycoplasmaspecifikt DNA kombineret med realtidsdetektion ved hjælp af et DNA-interkalerende farvestof. Testen er i stand til at påvise seks af de mest almindelige arter, der tegner sig for >95 % af kontamineringen: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis og A.laidlawii. På grund af sekvenshomologi vil andre mycoplasma-arter også blive påvist (M.pneumoniae, M.gallisepticum og M.synoviae). For at identificere, om prøven er mycoplasma-positiv eller -negativ, undersøges smeltetemperaturen (Tm).