Médium pro buněčné kultury
Kultivované buňky vyžadují pro úspěšný růst a udržení pečlivou kontrolu prostředí. Komplexní přístup zahrnuje zajištění sterility, přísunu živin, stability pH a kontroly teploty.
Sterilní podmínky a přísun živin
Aby se zabránilo kontaminaci a zajistila životaschopnost buněk, je rozhodující sterilní prostředí. Toho se obvykle dosahuje pomocí aseptických technik a specializovaného vybavení, jako jsou laminární průtokové digestoře. Živiny jsou dodávány prostřednictvím kultivačních médií, která obsahují směs základních složek, včetně:
- Anorganické soli: Životně důležité pro udržení osmotické rovnováhy a poskytování iontů nezbytných pro buněčné aktivity.
- Sacharidy: - Složení: 1: Slouží jako zdroj energie; nejčastěji používaným cukrem je glukóza.
- Aminokyseliny: Stavební kameny bílkovin; některé jsou nezbytné a buňky je nemohou syntetizovat.
- Vitamíny: Působí jako kofaktory enzymatických reakcí; vitaminy skupiny B jsou nezbytné pro buněčný metabolismus.
- Mastné kyseliny a lipidy: Základní složky pro integritu a funkci buněčných membrán.
- Bílkoviny a peptidy: V bezsérových médiích nahrazují růstové faktory a vazebné proteiny, které obvykle dodává sérum.
- Sérum: Často se používají jako zdroj růstových faktorů, ačkoli bezsérové alternativy jsou stále populárnější, aby se snížila variabilita a riziko kontaminace.
- pH a teplotní stabilita: Buňky obvykle vyžadují pro optimální růst pH v rozmezí 7,2-7,4. To je regulováno pufrovacími systémy, které mohou být buď na bázi CO2/bikarbonátu, nebo chemicky pomocí látek, jako je HEPES. Teplota se udržuje kolem 37 °C, aby se napodobily fyziologické podmínky.
Varianty médií a optimalizace
V průběhu let byla vyvinuta různá základní média, která vyhovují specifickým typům buněk:
- Vyvážené solné roztoky: Tvoří základ složitějších mediálních formulací.
- Základní média, jako je minimální esenciální médium (MEM), se používají pro primární kultury a diploidní buňky.
- Komplexní média: Jako RPMI 1640 jsou vhodná pro širší škálu savčích buněk.
- Média bez séra: Jsou přizpůsobena pro specifické aplikace a snižují riziko kontaminace složkami živočišného původu.
Příprava a kontrola kvality médií
Média lze připravit ve vlastní režii ze základních složek nebo zakoupit jako hotové roztoky. Kontrola kvality zahrnuje zajištění nepřítomnosti kontaminantů a správné koncentrace složek. Rekonstituce práškových médií vyžaduje vysoce kvalitní vodu a připravená média musí být sterilizována, obvykle filtrací.
Použití séra a bezpečnostní hlediska
Použití séra, zejména fetálního hovězího séra (FBS), je běžné vzhledem k jeho bohatému obsahu růstových faktorů. Vzhledem k obavám z nemocí, jako je BSE, se však pro zajištění bezpečnosti dodržují přísné protokoly o testování a získávání.
Regulační pokyny a trendy
Materiály živočišného původu v kulturách se řídí předpisy, které zdůrazňují význam získávání a testování. Trend k eliminaci takových materiálů, pokud je to možné, se odráží ve vývoji alternativních médií bez séra a bez zvířat.
Závěrem lze říci, že média pro buněčné kultury hrají zásadní roli při růstu a udržování buněk in vitro. Každá složka je pečlivě vybírána a optimalizována tak, aby napodobovala prostředí in vivo a zajistila buňkám podmínky pro růst, přežití a funkčnost.
DMEM se od ostatních médií liší svým jedinečným složením. Obsahuje působivé čtyřnásobné zvýšení koncentrace aminokyselin a vitaminů ve srovnání s původním Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM bylo původně vyvinuto s nízkým obsahem glukózy (1 g/l) a pyruvátu sodného, ale často se používá s vyššími hladinami glukózy, buď s pyruvátem sodným, nebo bez něj. DMEM zejména neobsahuje proteiny, lipidy ani růstové faktory, což vyžaduje doplňování. Pro dosažení optimálního růstu je běžným přístupem doplnění DMEM 10% fetálním hovězím sérem (FBS). Kromě toho DMEM používá pufrový systém hydrogenuhličitanu sodného, který vyžaduje 5-10% prostředí CO2 pro udržení fyziologického pH.
Dulbeccovo modifikované médium Eagle (DMEM) je vysoce ceněno mezi definovanými médii pro buněčné a tkáňové kultury, které uspokojuje potřeby růstu různých fenotypů adherentních buněk. Překonává původní Eagleovo médium, vyvinuté v 50. letech 20. století pro kultivaci kuřecích buněk, díky vylepšenému doplňkovému složení známému jako Dulbeccova modifikace. Tato modifikace výrazně zvyšuje obsah vybraných aminokyselin a vitaminů až čtyřnásobně ve srovnání s původním médiem.
V oblasti buněčných kultur hraje DMEM zásadní roli jako růstové médium pro různé typy buněk, včetně primárních buněk, kmenových buněk a transformovaných buněk. Výzkumníci také používají modifikovanou verzi DMEM pro širokou škálu výzkumných aplikací, jako je objevování léčiv, tkáňové inženýrství a studium buněčných signálních drah.
Kontrola kvality
Sterilně filtrovaný
Skladování a doba použitelnosti
Skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chráněné před světlem.
Po otevření skladujte při 4 °C a spotřebujte do 6-8 týdnů.
Přepravní podmínky
Okolní teplota
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2°C až +8°C v temnu. Vyhněte se zmrazování a častému zahřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu výrobku.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné spotřebiče.
Pokud má být použita pouze část média, odeberte požadované množství a před použitím jej zahřejte na pokojovou teplotu.
Složení
Kategorie
Složky
Koncentrace (mg/l)
Aminokyseliny
Glycin
30.00
L-Arginin HCl
84.00
L-Cystin 2 HCl
62.57
L-Glutamin
584.00
L-histidin HClH2O
42.00
L-Isoleucin
105.00
L-leucin
105.00
L-Lysin HCl
146.00
L-methionin
30.00
L-fenylalanin
66.00
L-serin
42.00
L-Treonin
95.00
L-tryptofan
16.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
103.79
L-Valin
94.00
Vitamíny
Cholinchlorid
4.00
D-pantothenát vápenatý
4.00
Kyselina listová
4.00
myo-Inositol
7.20
Nikotinamid
4.00
Pyridoxal HCl
4.00
Riboflavin
0.40
Thiamin HCl
4.00
Anorganické soli
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Ostatní složky
D-glukóza
4500.00
Sodná sůl fenolové červeně
15.90
Pyruvát sodný
110.00
Co obsahuje EMEM?
EMEM je upravená verze Eaglova minimálního esenciálního média, která obsahuje Earleův vyvážený solný roztok, neesenciální aminokyseliny, L-glutamin, pyruvát sodný a hydrogenuhličitan sodný. Je důležité poznamenat, že tato hladina hydrogenuhličitanu sodného je určena pro použití v prostředí s 5% obsahem CO2 ve vzduchu. Pro zachování účinnosti se doporučuje skladovat médium při teplotě 2 °C až 8 °C ve tmě, pokud se nepoužívá.
K čemu se EMEM používá?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) je médium pro kultivaci buněk, které dokáže udržet buňky v tkáňové kultuře. Toto médium obsahuje vyšší koncentrace aminokyselin, což umožňuje přesnější přiblížení složení bílkovin kultivovaných savčích buněk. EMEM lze použít ke kultivaci různých buněk, včetně fibroblastů, buněk lidské buněčné linie rakoviny jater (HepG2) a buněk lidských mozkových progenitorů odvozených od astrocytů (PDA). Obvykle se používá v přítomnosti fetálního hovězího séra (FBS), telecího nebo koňského séra.
Jak se EMEM liší od jiných médií pro kultivaci buněk?
EMEM a Dulbeccovo modifikované médium Eagle's (DMEM) mají sice některé společné rysy, ale také se liší. Obě média postrádají bílkoviny a obsahují aminokyseliny, soli, glukózu a vitaminy potřebné k zásobování buněk energií a k jejich udržení v tkáňové kultuře. Složení DMEM je však upraveno tak, aby obsahovalo až čtyřikrát více vitaminů a aminokyselin a dvakrát až čtyřikrát více glukózy než EMEM. Stojí za zmínku, že EMEM se také liší od původního složení MEM.
Kontrola kvality
Sterilně filtrovaný
Skladování a doba použitelnosti
Skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chraňte před světlem.
Po otevření skladujte při teplotě 4 °C a spotřebujte do 6-8 týdnů.
Přepravní podmínky
Okolní teplota
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2°C až +8°C v temnu. Vyhněte se zmrazování a častému zahřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu výrobku.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné spotřebiče.
Pokud má být použita pouze část média, odeberte požadované množství a před použitím jej zahřejte na pokojovou teplotu.
Složení
Kategorie
Složky
Koncentrace (mg/l)
Aminokyseliny
L-Arginin HCl
126.00
L-Cystin 2 HCl
31.30
L-Glutamin
292.00
L-histidin HClH2O
42.00
L-Isoleucin
52.00
L-leucin
52.00
L-Lysin HCl
72.50
L-methionin
15.00
L-fenylalanin
32.00
L-Treonin
48.00
L-tryptofan
10.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitamíny
Cholinchlorid
1.00
Vitamíny
D-pantothenát vápenatý
1.00
Kyselina listová
1.00
myo-Inositol
2.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoxal HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Thiamin HCl
1.00
Anorganické soli
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganické soli
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Ostatní složky
D-glukóza
1000.00
Ostatní složky
Sodná sůl fenolové červeně
11.00
Jednou z jeho významných výhod je schopnost podporovat růst buněk bez nutnosti doplňování séra. Tím se eliminují možné interference způsobené sérovými složkami, což zajišťuje konzistentní a spolehlivé výsledky pokusů. Tím, že poskytuje kultivační prostředí bez séra, nabízí Ham's F-12 Medium výzkumníkům větší kontrolu nad jejich zkoumáním.
Dalším klíčovým rysem média Ham's F-12 je jeho vhodnost pro pokovování jednotlivých buněk. Díky tomu je vynikající volbou pro různé buněčné linie, včetně buněk CHO, plicních buněk a myších buněk L. Optimalizované složení živin v médiu usnadňuje účinné uchycení a růst jednotlivých buněk, což umožňuje vytvoření homogenních buněčných kultur s lepší reprodukovatelností.
Kromě toho si médium Ham's F-12 získalo uznání jako preferované médium pro test klonální toxicity (CTA). Tento test hraje zásadní roli při hodnocení cytotoxických účinků látek na buňky. Použitím média Ham's F-12 v testu CTA mohou výzkumní pracovníci přesně vyhodnotit dopad různých sloučenin nebo ošetření na jednotlivé buňky a získat tak cenné informace o toxikologických profilech.
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 při 20-25 °C.
Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmy a bakterií.
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C ve tmě. Zmrazování a zahřívání až do +37 °C snižuje kvalitu přípravku na minimum.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37° C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné přístroje).
Pokud má být použita pouze část média, odeberte toto množství z lahvičky a zahřejte jej při pokojové teplotě.
Doba použitelnosti jakéhokoli média s výjimkou základního média je 8 týdnů od data výroby.
Složení
Složení
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
44,00
Síran měďnatý(II) x 5H2O
0,00
Síran železnatý x 7H2O
0,83
Chlorid hořečnatý x 6H2O
122,00
Chlorid draselný
223,65
Chlorid sodný
7599,00
hydrogenfosforečnan sodnýbezvodý
142,04
Síran zinečnatý x 7H2O
0,86
Ostatní složky
D(+)-glukóza bezvodá
1801,60
Hypoxantin
4,08
Kyselina linolová
0,08
Kyselina DL-α-lipoová
0,21
Fenolová červeň
1,20
Putrescin x 2HCl
0,16
Pyruvát sodný
110,00
Thymidin
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminokyseliny
L-Alanin
8,91
L-Arginin x HCl
210,70
L-Asparagin x H2O
15,01
Kyselina L-asparagová
13,31
L-cystein x HCl x H2O
35,12
L-Alanyl-L-Glutamin
217,30
Kyselina L-glutamová
14,71
Glycin
7,51
L-histidin x HCl x H2O
20,96
L-Isoleucin
3,94
L-leucin
13,12
L-Lysin x HCl
36,54
L-methionin
4,48
L-fenylalanin
4,96
L-Prolin
34,53
L-serin
10,51
L-treonin
11,91
L-tryptofan
2,04
L-Tyrosin
5,44
L-Valin
11,71
Vitamíny
D(+)-Biotin
0,01
D-pantothenát vápenatý
0,24
Cholinchlorid
13,96
Kyselina listová
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoxin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Thiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
Tento jedinečný přípravek kombinuje Dulbeccovo modifikované orlí médium (DMEM) a Hamovu směs F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) v přesném poměru 1:1. Přídavek L-glutaminu dále vylepšuje jeho složení.
DMEM, odvozený od Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), nabízí ve srovnání se svým předchůdcem zvýšenou koncentraci aminokyselin a vitaminů. Naproti tomu Ham's F-12 vychází z média Ham's F-10 a poskytuje doplňkovou sadu základních složek.
Pro podporu optimálního růstu buněk je běžnou praxí doplnit DMEM:Ham's F12 o FBS v typické koncentraci 5 až 10 %. Tento přídavek je nezbytný, protože médium postrádá růstové hormony, lipidy a proteiny, které jsou pro vývoj buněk klíčové.
DMEM:Ham's F12 obsahuje systém pH pufru a často se doplňuje fenolovou červení, indikátorem pH. Kultivace buněk v DMEM:Ham's F12 nebo v jakémkoli jiném médiu využívajícím hydrogenuhličitanový pufrovací systém vyžaduje řízené prostředí s 5 až 10 % CO2, aby se udržely vhodné hodnoty pH.
Kontrola kvality
Sterilně filtrovaná
Skladování a doba použitelnosti
Skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chráněné před světlem.
Po otevření skladujte při 4 °C a spotřebujte do 6-8 týdnů.
Přepravní podmínky
Okolní teplota
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2°C až +8°C v temnu. Vyhněte se zmrazování a častému zahřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu výrobku.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné spotřebiče.
Pokud má být použita pouze část média, odeberte požadované množství a před použitím jej zahřejte na pokojovou teplotu.
Složení
Kategorie
Složky
Koncentrace (mg/l)
Aminokyseliny
Glycin
18.75
L-Alanin
4.45
L-Arginin HCl
147.50
L-Asparagin H₂O
7.50
Kyselina L-asparagová
6.65
L-cystein HCl H₂O
17.56
L-Cystin 2 HCl
31.29
Kyselina L-glutamová
7.35
L-Glutamin
365.00
L-histidin HCl H₂O
31.48
L-Isoleucin
54.47
L-leucin
59.05
L-Lysin HCl
91.25
L-methionin
17.24
L-fenylalanin
35.48
L-Prolin
17.25
L-serin
26.25
L-Treonin
53.45
L-tryptofan
9.02
L-tyrosin disodná sůl
48.10
L-Valin
52.85
Vitamíny
D-biotin
0.0035
Cholin chlorid
8.98
D-pantothenát vápenatý
2.24
Kyselina listová
2.66
myo-Inositol
12.60
Nikotinamid
2.02
Pyridoxin HCl
0.031
Pyridoxal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Thiamin HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Anorganické soli
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Ostatní složky
D-glukóza
3151.00
Hypoxantin
2.40
HEPES
3574.50
Kyselina linolová
0.042
Kyselina lipoová
0.105
Sodná sůl fenolové červeně
8.63
Putrescin 2 HCl
0.081
Pyruvát sodný
55.00
Thymidin
0.365
Médium Ham's F-12K (Kaighn's) je pečlivě sestaveno tak, aby optimalizovalo podmínky kultivace buněk. Má obohacené složení, které poskytuje zvýšené množství základních složek, jako jsou aminokyseliny a pyruvát sodný, a také dalších prvků včetně putrescinu, thymidinu, hypoxantinu a zinku. Tyto přídavky umožňují výzkumným pracovníkům doplnit médium o minimální množství séra nebo definovaných složek pro specifické typy buněk, což usnadňuje přesné experimentální podmínky.
Pozoruhodné je, že Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) neobsahuje proteiny ani růstové faktory. V důsledku toho je často nutné doplnění růstovými faktory a fetálním hovězím sérem (FBS), což výzkumníkům umožňuje přizpůsobit médium požadavkům jejich specifických buněčných linií. Pro dosažení optimálního výkonu musí být koncentrace FBS pečlivě optimalizována pro každou buněčnou linii, čímž se zajistí optimální růst a funkčnost.
Pro udržení fyziologického pH využívá médium Ham's F-12K (Kaighn's) pufrovací systém hydrogenuhličitanu sodného (2,5 g/l), což vyžaduje kontrolované prostředí s 5-10 % CO2 během kultivace. To zajišťuje, že pH média zůstává v ideálním rozmezí pro růst a životaschopnost buněk
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 při 20-25 °C.
Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmy a bakterií.
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C ve tmě. Zmrazení i zahřátí na +37 °C snižuje kvalitu přípravku na minimum.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné přístroje).
Pokud má být použita pouze část média, odeberte toto množství z lahvičky a zahřejte jej při pokojové teplotě.
Doba použitelnosti jakéhokoli média kromě základního média je 8 týdnů od data výroby.
Složení
Složení
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
135,24
Síran měďnatý(II) x 5H2O
0,00
Síran železnatý x 7H2O
0,83
Chlorid hořečnatý x 6H2O
105,72
Síran hořečnatý x 7H2O
394,49
Chlorid draselný
283,29
Dihydrogenfosforečnan draselný
58,52
Chlorid sodný
7597,20
hydrogenfosforečnan sodnýbezvodý
115,02
Síran zinečnatý x 7H2O
0,14
Ostatní složky
D(+)-glukóza bezvodá
1260,00
Hypoxantin
4,08
DL-α-Lipoová kyselina
0,21
Fenolová červeň
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Pyruvát sodný
220,00
NaHCO3
2500,00
Thymidine
0,73
Aminokyseliny
L-Alanin
17,82
L-Arginin x HCl
421,40
L-Asparagin x H2O
30,02
Kyselina L-asparagová
26,62
L-cystein x HCl x H2O
70,24
L-Glutamin
292,20
Kyselina L-glutamová
29,42
Glycin
15,01
L-histidin x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucin
7,87
L-leucin
26,24
L-Lysin x HCl
73,04
L-methionin
8,95
L-fenylalanin
9,91
L-Prolin
69,06
L-serin
21,02
L-treonin
23,82
L-tryptofan
4,08
L-Tyrosin
10,87
L-Valin
23,42
Vitamíny
D(+)-Biotin
0,07
D-pantothenát vápenatý
0,48
Cholinchlorid
13,96
Kyselina listová
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoxin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Thiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
- 0,02 při 20-25 °C. Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmat a bakterií. Skladování Skladujte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C v temnu. Zmrazení a ohřátí na +37 °C snižuje kvalitu produktu. Neohřívejte médium na více než 37 °C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné trouby). Pokud má být použita pouze část média, odeberte toto množství z lahve a ohřejte jej na pokojovou teplotu. Skladovatelnost všech médií s výjimkou základního média je 6 až 8 týdnů od data otevření. Složení Složky mg/l Anorganické soliChlorid vápenatý x 2H2O132,00 Síran hořečnatý97,67 Chlorid draselný400 Chlorid sodný6 460,00 Hydrogenfosforečnan sodný (bezvodý)504,00 Ostatní složkyD(+)-glukóza (bezvodá)3 000 Glutathion (redukovaný)0 Masový pepton600 Fenolová červená sodná sůl11 AminokyselinyL-alanin13,3 L-arginin x HCl42,14 L-asparagin x H2O45,03 Kyselina L-asparagová19,97 L-cystein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabilní)219,15 Kyselina L-glutamová22,07 Glycin7,5 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hydroxyprolin19,67 L-isoleucin39,36 L-leucin39,36 L-lysin x HCl36,54 L-methionin14,92 L-fenylalanin16,52 L-prolin17,27 L-serin26,28 L-threonin17,87 L-tryptofan3,06 L-tyrosin disodná sůl26,1 L-valin17,57 VitamínyKyselina p-aminobenzoová1 Kyselina askorbová0,56 D(+)-biotin0 D-pantothenát vápenatý0 Cholin chlorid5 Kyselina listová10 myo-inositol36 Nikotinamid0 Kyselina nikotinová0 Pyridoxal HCl0,5 Pyridoxin HCl0,5 Riboflavin0,2 Thiamin HCl0 Vitamin B122,0
IMDM je vhodný pro rychle se množící buněčné kultury s vysokou hustotou, včetně buněk Jurkat, COS-7 a makrofágů. Různé modifikace IMDM, které jsou k dispozici pro celou řadu aplikací buněčných kultur, naleznete pomocí nástroje pro výběr médií. Kapalná média poskytují základní živiny pro všechny aplikace buněčných kultur. Každé z našich vysoce kvalitních médií pro buněčné kultury je vyráběno podle původně zveřejněného vzorce nebo modifikací nezbytných pro konzistentní výkon a stabilitu kultivačního média.
IMDM vs. DMEM
IMDM obsahuje dusičnan draselný místo dusičnanu železitého a HEPES a pyruvát sodný. Díky dalším složkám v IMDM je vhodnější pro specializované typy buněk a specifické aplikace než DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM a RPMI mají odlišné složení, které může být důležité pro stimulaci PMA/ionomycinem. Jedním z významných rozdílů je koncentrace Ca2+. Zatímco RPMI obsahuje 0,42 mM Ca2+, IMDM obsahuje 1,49 mM.
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 při 20-25 °C.
Každá šarže byla testována na sterilitu a nepřítomnost mykoplazmy a bakterií.
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2 °C až +8 °C ve tmě. Zmrazování a zahřívání až do +37 °C snižuje kvalitu přípravku na minimum.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37° C a nepoužívejte nekontrolovatelné zdroje tepla (např. mikrovlnné přístroje).
Pokud má být použita pouze část média, odeberte toto množství z lahvičky a zahřejte jej při pokojové teplotě.
Doba použitelnosti jakéhokoli média s výjimkou základního média je 8 týdnů od data výroby.
Složení
Složení
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2 H2O
219,00
Chlorid draselný
330,00
Dusičnan draselný
0.076
Síran hořečnatý bezvodý
97,73
Chlorid sodný
4,505.00
Dihydrogenfosforečnan sodný bezvodý
109,00
Seleničitan sodný
0,02
Ostatní složky
D(+)-glukosa bezvodá
4,500.00
HEPES
5,958.00
Pyruvát sodný
110,00
Fenolová červeň
15,00
Aminokyseliny
L-Alanin
25,00
L-Arginin x HCl
84,00
L-Asparagin x H2O
25,00
Kyselina L-asparagová
30,00
L-Cystin x 2HCl
91,24
L-Glutamin
584,00
Kyselina L-glutamová
75,00
Glycin
30,00
L-histidin x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucin
104,80
L-leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-methionin
30,00
L-fenylalanin
66,00
L-Prolin
40,00
L-serin
42,00
L-Treonin
95,20
L-tryptofan
16,00
L-Tyrosin x 2Na
104,20
L-Valin
93,60
Vitamíny
D(+)-Biotin
0.013
D-pantothenát vápenatý
4,00
Cholinchlorid
4,00
Kyselina listová
4,00
myo-Inositol
7,20
Médium RPMI 1640, původně určené k podpoře růstu lidských leukemických buněk v suspenzních i monovrstvých kulturách, se díky úpravám výzkumníků a komerčních dodavatelů vyvinulo tak, aby bylo vhodné pro nejrůznější savčí buňky. Je mimořádně kompatibilní s buněčnými liniemi, jako jsou HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyty a karcinomy.
Médium RPMI 1640 se od ostatních médií pro kultivaci buněk odlišuje svým jedinečným složením. Obsahuje značné množství fosfátů, aminokyselin a vitaminů. Zejména obsahuje biotin, vitamin B12 a PABA, které se v Eagle's Minimal Essential Medium nebo Dulbecco's Modified Eagle Medium nevyskytují. Kromě toho médium RPMI 1640 vykazuje výrazně zvýšené koncentrace vitaminů inositolu a cholinu. Neobsahuje však bílkoviny, lipidy ani růstové faktory. V důsledku toho je běžně vyžadováno doplnění 10% fetálního hovězího séra (FBS), aby byly zajištěny optimální podmínky pro růst buněk.
Pufrovací systém média RPMI 1640 je založen na hydrogenuhličitanu sodném a k udržení fyziologicky vhodného pH vyžaduje prostředí s 5-10 % CO2. Začlenění redukčního činidla glutathionu dále odlišuje toto médium od ostatních.
Kontrola kvality
Sterilně filtrované
Skladování a trvanlivost
Skladujte při teplotě +2 °C až +8 °C, chraňte před světlem.
Po otevření skladujte při 4 °C a spotřebujte do 6-8 týdnů.
Přepravní podmínky
Okolní teplota
Údržba
Uchovávejte v chladu při teplotě +2°C až +8°C v temnu. Vyhněte se zmrazování a častému zahřívání na +37 °C, protože to snižuje kvalitu výrobku.
Nezahřívejte médium na teplotu vyšší než 37 °C a nepoužívejte nekontrolované zdroje tepla, jako jsou mikrovlnné spotřebiče.
Pokud má být použita pouze část média, odeberte požadované množství a před použitím jej zahřejte na pokojovou teplotu.
Složení
Kategorie
Složky
Koncentrace (mg/l)
Aminokyseliny
Glycin
10.00
L-Alanyl-L-Glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-AsparaginH2O
56.82
Kyselina L-asparagová
20.00
L-Cystin 2HCl
65.20
Kyselina L-glutamová
20.00
L-histidin HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Prolin
20.00
L-Isoleucin
50.00
L-leucin
50.00
L-Lysin HCl
40.00
L-methionin
15.00
L-fenylalanin
15.00
L-Prolin
20.00
L-serin
30.00
L-Treonin
20.00
L-tryptofan
5.00
L-Tyrosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitamíny
kyselina p-aminobenzoová
1.00
D-biotin
0.20
Cholinchlorid
3.00
D-pantothenát vápenatý
0.25
Kyselina listová
1.00
myo-Inositol
35.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoxin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Thiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Anorganické soli
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Ostatní složky
D-glukóza
2000.00
L-Glutathion redukovaný
1.00
Sodná sůl fenolové červeně
5.30