Autentizace myší buněčné linie (krátké tandemové repetice (STR))
Vzhledem k častému výskytu křížové kontaminace a nesprávné identifikace představuje pravost buněk používaných ve vědeckých výzkumných projektech závažný problém. Odhaduje se, že přibližně 15–20 % veškerého výzkumu založeného na buněčných liniích pracuje s nesprávně identifikovanými buněčnými liniemi. Proto je stanovení profilu buněčné linie pomocí STR analýzy zásadní pro provádění spolehlivého a reprodukovatelného výzkumu. Navíc stále více odborných časopisů vyžaduje ověření buněčné linie před přijetím článku.
Naše služby zahrnují
- Ověření pravosti buněčné linie
- Porovnání s online databázemi
- Analytickou zprávu připravenou k publikaci
Snadné použití
- Stáhněte si prosím objednávkový formulář pro ověření buněčné linie a vyplněný a vytištěný formulář přiložte k zásilce se vzorky.
- Vzorky nám prosím zašlete v polstrované obálce při pokojové teplotě.
- V případě gDNA nám prosím poskytněte ≥ 50 μl roztoku gDNA o koncentraci 50 ng/μl v Tris nebo EDTA (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA).
- V případě buněčných pelet nám prosím poskytněte 1,0–5,0 milionů buněk ve formě buněčné pelety. Prosím, dvakrát je promyjte PBS a resuspendujte v 0,5 ml 70–90% etanolu.
Markery
- Lidské buňky se typizují pomocí systému PowerPlex od společnosti Promega s využitím 16 STR markerů.
- Myší buňky se typizují pomocí 18 STR markerů.
- Typizace buněk potkanů se provádí pomocí 14 STR markerů a jednoho pohlavně specifického markeru.
- Buňky psů se typizují pomocí 11 STR markerů.
- Typizace buněk křečků se provádí pomocí 10 STR markerů.
Výsledky
Výsledky obdržíte do 2 týdnů e-mailem. Výsledky zahrnují srovnání dat s databází Cellosaurus. Buněčná linie bude klasifikována jako ověřená nebo nesprávně identifikovaná.
Krátké tandemové repetice (STR)
Krátká tandemová repetice (STR) je DNA motiv o délce 2–13 bází, který se opakuje až několik setkrát. Individuální variabilita v počtu opakování v STR vede při použití PCR k variacím v délce vzniklých fragmentů. Profil buněčných linií se stanovuje na základě těchto variací v délkách fragmentů na několika lokusech.
Detekce směsí buněčných linií
Je možné identifikovat kontaminaci jedné buněčné linie jednou nebo více dalšími buněčnými liniemi až do frekvence 10 % kontaminující buněčné linie. Kombinace buněčných linií obvykle poskytují profily STR se třemi nebo více píky pro jeden nebo několik lokusů.