Buněčná linie Neuro-2a
Neuro-2a je myší nervová buněčná linie široce používaná v neurovědním výzkumu. Tyto buňky se používají především ke studiu vývoje nervové soustavy, diferenciace, neurotoxicity, buněčných signálních drah a axonálního růstu. Kromě toho se používají pro vývoj a screening léčiv.
Tento článek se zaměřuje na důležité aspekty neuroblastomových buněk Neuro-2a, které by vám mohly pomoci před zahájením práce s nimi. Bude se zabývat především:
- Obecné vlastnosti a původ buněk Neuro-2a
- Informace o kultivaci buněčné linie Neuro-2a
- Výhody a nevýhody buněčné linie Neuro-2a
- Výzkumné aplikace buněčné linie Neuro-2a
- Výzkumné publikace s buňkami Neuro-2a
- Zdroje pro buňky Neuro-2a: Protokoly, videa a další zdroje informací
1. Obecné vlastnosti a původ buněk Neuro-2a
Tato část článku se bude zabývat pozadím a základními vlastnostmi buněčné linie Neuro-2a, které je nezbytné znát před prací s ní. Dozvíte se zde: Co je buněčná linie Neuro-2a? Jaký je původ buněčné linie Neuro-2a? Co je to diferenciace buněk Neuro-2a? Jaká je velikost buňky Neuro-2a? Jaká je morfologie buněk Neuro-2a?
- Buňky Neuro-2a pocházejí ze spontánního nádoru (neuroblastomu) albinotické myši (kmen A). Tuto buněčnou linii vytvořili R. J. Klebe a F. H. Ruddle.
- Neuroblastomové buňky Neuro-2a vykazují morfologii neuronálních a améboidních kmenových buněk.
- Velikost buněk Neuro-2a je 12 mikrometrů na výšku [1].
- Počet chromozomů buněk Neuro-2a se může pohybovat od 59 do 193 s modálním počtem 95. Karyotyp těchto neuroblastomových buněk je nestabilní v rozmezí 94 až 98 chromozomů.
2. Informace o kultivaci buněčné linie Neuro-2a
Buňky Neuro-2a jsou široce používány v laboratořích pro výzkum neurověd. Před prací s těmito buňkami byste se měli seznámit s níže uvedenými nezbytnými informacemi o kultivaci buněk. To vám může usnadnit práci s nimi. Budete vědět: Co je to médium pro kultivaci buněk Neuro-2a? Jak se kultivují buňky Neuro-2a? Jaká je doba zdvojení buněk Neuro-2a? Jaká je hustota výsevu buněk Neuro-2a ? Jaký je protokol kultivace buněk Neuro-2a? Jaké je médium pro kultivaci buněk Neuro-2a?
Klíčové body pro kultivaci buněk Neuro-2a
|
Doba zdvojení: |
Doba zdvojení buněk Neuro-2a je přibližně 70 hodin. |
|
Adherentní nebo v suspenzi: |
Neuro-2a je adherentní buněčná linie. |
|
Hustota výsevu: |
Optimální hustota výsevu buněk pro buněčnou linii Neuro-2a je 1 x104 buněk/cm2. Pro výsev se buňky promyjí fyziologickým roztokem bez hořčíku a vápníku (1x). Později se přidá pasážovací roztok (Accutase) a buňky se inkubují 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Po disociaci buněk se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí. Sebraná buněčná peleta se opatrně resuspenduje a buňky se přelijí do kultivační nádoby pro růst. |
|
Růstové médium: |
Pro kultivaci buněk Neuro-2a se používá EMEM. Obsahuje 10 % FBS, 2 mM L-Glutamin, 1,5 g/l NaHCO3, EBSS, 1 mM pyruvát sodný a NEAA pro ideální růst buněk. Médium by se mělo vyměňovat 1 až 2krát týdně. |
|
Růstové podmínky: |
Neuro-2a se udržují ve zvlhčeném inkubátoru o teplotě 37 °C, který je napojen na 5% přívod CO2. |
|
Skladování: |
Buňky by měly být dlouhodobě skladovány při teplotě nižší než -150 °C v elektrické mrazničce s velmi nízkou teplotou nebo v plynné fázi kapalného dusíku. |
|
Postup zmrazování a médium: |
Ke zmrazení buněk Neuro-2a se používá médium CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují pomalým zmrazovacím procesem, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 °C za minutu. To chrání buňky před šokem a zachovává jejich životaschopnost. |
|
Proces rozmrazování: |
Pro rozmrazení zmrazených kultur se lahvička vloží do vodní lázně o teplotě 37 °C na 40 až 60 sekund, dokud nezůstane jen malý ledový chuchvalec. Poté se přidá kultivační médium a buňky se odstředí. Tento krok pomáhá odstranit složky zmrazovacího média. Buněčná peleta se poté resuspenduje a buňky se přenesou do nové baňky naplněné kultivačním médiem. Poté se buňky umístí do inkubátoru při teplotě 37 °C na dobu nejméně 24 hodin. |
|
Úroveň biologické bezpečnosti: |
Pro manipulaci s kulturami Neuro-2a a jejich udržování je nutné laboratorní prostředí úrovně biologické bezpečnosti 1. |
3. Výhody a nevýhody buněčné linie Neuro-2a
Buňky Neuro-2a mají některé výhody a nevýhody, které je odlišují od ostatních neuronálních buněčných linií. Zde jsou uvedeny některé významné výhody a nevýhody těchto buněk.
Výhody
Výhody myší neuroblastomové buněčné linie Neuro-2a jsou následující:
-
Snadná údržba
Buněčná linie Neuro-2a není spojena se složitými nebo komplikovanými postupy kultivace buněk. Snadno se kultivují a udržují ve výzkumných laboratořích.
-
Model neuronálních buněk in vitro
Neuro-2a je vhodným modelem neuronálních buněk, který výzkumníci hojně využívají při studiu vývoje a diferenciace neuronů.
Nevýhody
Nevýhody buněk Neuro-2a jsou následující:
-
Myší původ
Neuro-2a jsou myšího původu a výzkumníci by měli být opatrní při extrapolaci výsledků studií na myších na lidské zdraví a nemoci, protože biologie myší a lidí se může výrazně lišit.
4. Výzkumné aplikace buněčné linie Neuro-2a
Buňky Neuro-2a nabízejí mnoho aplikací v oblasti neurovědního výzkumu. Zde je popsáno několik slibných využití této buněčné linie:
- Vývoj nervové soustavy: Neuro-2a je model neuronálních buněk in vitro, který se široce používá ke studiu vývoje neuronů a souvisejících procesů, jako je diferenciace, růst axonů a tvorba synapsí. Studie provedená v roce 2020 využila buňky Neuro-2a ke zkoumání úlohy mikroRNA-124 v diferenciaci neuronálních buněk indukované kyselinou retinovou [2]. Další studie zkoumala expresi receptoru kyseliny retinové gama (RARG) Neuro 2a a miRNA-124 v neuroblastomové buněčné linii (N2A). Tato studie navrhla, že RARG je cílem miR-124 a potlačuje růst neuritů [3].
- Neurotoxicita: Neuro-2a se také používá k hodnocení toxických účinků léků, chemických látek nebo faktorů prostředí na nervové buňky. Například studie provedená Zhihong Yinem a spolupracovníky zkoumala neurotoxicitu bisfenolu A (BPA), chemické látky z životního prostředí, pomocí buněk Neuro-2a. Pozorovali, že BPA potlačuje diferenciaci a proliferaci neuronálních buněk tím, že narušuje jejich buněčnou a synaptickou integritu [4].
- Screening léčiv: Neuro-2a buňky se také používají k hodnocení terapeutických aktivit několika léčiv, sloučenin a přírodních produktů. V jedné studii byly například použity buňky Neuro-2a a studován antioxidační potenciál rostlinného extraktu Gingko biloba. Výzkum navíc navrhl, že způsobuje pokles agregace Aβ a může být potenciální léčbou Alzheimerovy choroby [5].
5. Výzkumné publikace s buňkami Neuro-2a
Zde je několik zajímavých výzkumných prací s buněčnou linií Neuro-2a.
Tato studie v časopise Journal of Natural Medicines z roku 2018 zkoumala terapeutické účinky alkamidů izolovaných z bílého pepře (P. nigrum) na neuronální buňky Neuro-2a.
Downregulace Nkx2. 1 se podílí na abnormalitách mozku vyvolaných nadbytkem kyseliny retinové
Tento výzkum v Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020 navrhl, že gen Nkx2.1 hraje důležitou roli ve vývoji myšího mozku tím, že reguluje signální kaskádu Shh.
Tento článek byl publikován v časopise Toxicology and Industrial Health (2023) a navrhuje, že environmentální chemická látka bisfenol A, vyvolává neurotoxicitu v buňkách neuro-2a a narušuje jejich synaptickou a cytoskeletální dysfunkci.
Tento článek v časopise Pharmaceuticals (2021) navrhl, že léčivo, hexarelin, moduluje kaskádu PI3K/AKT a MAPK v neuroblastomových buňkách (Neuro-2a) a inhibuje apoptózu neuro-2a buněk vyvolanou peroxidem vodíku.
Tento výzkumný článek v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) navrhuje, že extrakt z plodů Emblica officinalis potlačuje neurozánět v buňkách Neuro-2a, a může tak být prospěšný při neurozánětlivých onemocněních.
6. Zdroje pro buňky Neuro-2a: Zdroje: protokoly, videa a další zdroje
Níže jsou uvedeny dostupné online zdroje týkající se buněk Neuro-2a. Zahrnují protokoly o kultivaci a transfekci buněk Neuro-2a.
- Protokol transfekce buněk Neuro-2a: Neuro-2a je vhodným hostitelem pro transfekci. Tento odkaz vám poskytne vodítko ohledně transfekčního protokolu buněčné linie. Účinnost transfekce Neuro 2a se liší podle jednotlivých činidel.
Následující odkaz obsahuje protokol buněčné kultury Neuro-2a.
- Protokol o kultivaci buněk Neuro-2a: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem subkultivace buněk neuro 2a.
- Neuro-2a buňky: V tomto článku je popsán postup kultivace buněk Neuro-2a: Tato webová stránka obsahuje komplexní znalosti o médiích pro buňky Neuro-2a, hustotě výsevu a protokolech pro subkultivaci a manipulaci s kryokonzervovanými a proliferačními kulturami.
Odkazy
- Lulevich, V., et al., Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions (Mechanika jednotlivých buněk poskytuje citlivý a kvantitativní prostředek pro zkoumání interakcí amyloid-beta peptidu a neuronálních buněk ). Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., Role miR-124 v regulaci diferenciace buněk Neuro-2A indukované kyselinou retinovou. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., Retinoic acid receptor gamma is targeted by microRNA-124 and inhibits neurite outgrowth (Retinový receptor kyseliny gama je cílený mikroRNA-124 a inhibuje růst neuritů). Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisphenol-A exposure induced neurotoxicity and associated with synapse and cytoskeleton in Neuro-2a cells (Expozice bisfenolu-A vyvolala neurotoxicitu a souvisí se synapse a cytoskeletem v buňkách Neuro-2a ). Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Gingko biloba extract (EGb) inhibuje oxidační stres v buňkách neuro 2A nadměrně exprimujících APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.