Клетките на Рамос - изследвания на В-клетъчния лимфом: Важността на клетките на Рамос
Клетките наРамос са клетъчна линия от В лимфоцити, широко използвана в биомедицинските изследвания. По-специално те намират основно приложение в имунологията и изследванията на рака. Изследователите използват тези клетки за оценка на цитотоксични лекарства и за изучаване на повърхностните антигени на В клетките, мутациите и апоптотичните механизми.
Произход и общи характеристики на клетките на Рамос s
Разбирането на произхода и основните характеристики на дадена клетъчна линия играе решаваща роля при вземането на решение за нейната пригодност за вашите изследвания. Ето защо е препоръчително да прецените задълбочено тази информация, преди да започнете каквато и да е работа с нея. Този раздел обхваща следните често задавани въпроси: Какво представлява клетъчната линия за рак Ramos? Какво представлява клетъчната линия CD19 на Ramos? Какво представлява клетъчната линия CD20 на Ramos? Какъв е произходът на клетките Ramos? Какви са маркерите на клетъчната линия Ramos? Какъв е размерът на клетките Ramos? Каква е морфологията на клетъчната линия Ramos?
- Клетъчната линия Ramos е създадена през 1972 г. Тези клетки са получени от асцитната течност на 3-годишно момче от кавказки произход с американски тип лимфом на Буркит [1].
- Те експресират ключови маркери на В клетките, включително имуноглобулин М (IgM), CD19, CD20 и CD22.
- Клетките на Рамос са отрицателни за вируса на Епщайн Бар. Въпреки това те могат да бъдат трайно изместени към Епщайн-Барр вирус положителни клетки.
- Тези В лимфобластни клетки притежават морфология с кръгла форма.
Сини клетки на Рамос срещу В клетки на Рамос
Сините клетки на Рамос и В клетките на Рамос са човешки лимфомни клетки на Буркит. И двете са отрицателни за вируса на Епщайн Бар. Разликата между тези клетки се състои в това, че сините клетки на Рамос експресират NF-κB/AP-1-индуцируем репортерски ген, наречен SEAP (секретиран ембрионален алкален фосфат), докато белите клетки на Рамос не го експресират.
Култивиране на клетките на Рамос
Този раздел от статията е посветен на това да ви помогне да научите задължителна информация за клетъчното култивиране на клетките Рамос. Тук ще се запознаете с: Какво е времето за удвояване на клетъчните линии? Каква е препоръчителната среда? Как се култивират клетките Ramos?
Ключови моменти при култивирането на клетките на Рамос
|
Време за удвояване: |
Времето за удвояване на клетките Ramos е приблизително 20,4 ± 1,5 часа. То обаче може да се отклонява в зависимост от предоставените условия за култивиране на клетките. |
|
Прилепнали или в суспензия: |
Клетките Ramos растат в суспензия. |
|
Клетъчна плътност: |
Оптималната клетъчна плътност за клетъчната линия Ramos е 3 x105 клетки/ml . За субкултивиране суспендираните клетки се събират чрез центрофугиране. Клетките се добавят с прясна среда и се ресуспендират внимателно. След това клетките се преливат в нова колба с плътност от 3 до 9 x105 клетки/ml . |
|
Растежна среда: |
За култивиране на клетките на Ramos се използва RPMI 1640, допълнен с 10 % фетален говежди серум, 2,1 mM стабилен глутамин и 2,0 g/L NaHCO3. средата трябва да се сменя 2 пъти седмично. |
|
Условия за растеж: |
Човешката клетъчна линия Burkitt lymphoma (Ramos) се съхранява в овлажнен инкубатор при 5% CO2 и температура 37°C. |
|
Съхранение: |
Замразените клетки на Ramos се съхраняват при температура под -150 градуса по Целзий или в парната фаза на течен азот, за да се запази жизнеспособността на клетките за по-дълъг период от време. |
|
Процес на замразяване и среда: |
За клетките Ramos се препоръчва среда за замразяване CM-1 или CM-ACF. Използва се бавен процес на замразяване, който позволява постепенно намаляване на температурата с 1 градус по Целзий в минута. Това бавно замразяване предпазва клетките от шок и повишава тяхната жизнеспособност. |
|
Процес на размразяване: |
За размразяване замразените клеткисе държат на предварително затоплена водна баня при 37 °C за 40 до 60 секунди, докато остане малка ледена бучка. След това се добавя свежа среда и клетките се центрофугират, за да се отстранят елементите на замразяващата среда. Пелетата отново се ресуспендира и клетките се разпределят в нова колба, съдържаща хранителна среда. |
|
Ниво на биологична безопасност: |
Лабораторията с ниво на биологична безопасност 1 е от съществено значение за поддържането на отрицателни за вируса на Епщайн-Барр клетъчни култури на Рамос. Нивото на биологична безопасност обаче се променя на 2, когато клетките на Рамос се превърнат трайно в положителни за вируса на Епщайн-Барр. |
Рамос: Предимства и ограничения
Подобно на други клетъчни линии, клетките Ramos също имат различни предимства и ограничения. В този раздел ще бъдат разгледани някои от тях, които могат да окажат значително влияние върху използването им в научните изследвания.
Предимства
- Клетъчен модел на лимфом на Бъркит: Клетките Ramos са разработени от пациент с лимфом на Burkitt, което ги прави подходящ клетъчен модел за изследване на лимфоидни злокачествени заболявания
- Лесно култивиране: Клетките Рамос са лесни за култивиране и поддържане в лабораторията. Изискванията и условията за култивиране на клетките са лесни
Ограничения
- Ин витро модел: Клетките на Рамос може да не представят напълно генетичната сложност на туморите на пациентите, което ограничава тяхната приложимост. Освен това резултатите от експерименти, при които се използва клетъчната линия Ramos, може да не отразяват напълно условията in vivo, което потенциално може да доведе до предизвикателства при прилагането
приложения на клетките Рамос в научните изследвания
Ramos предлага обещаващи приложения в областта на биомедицината. Някои от наложителните научноизследователски приложения на клетките на Рамос включват:
- Биология на лимфомите: Клетките на Рамос се използват широко за изследване на биологията на лимфома. Те се използват за изследване на генетичните и молекулярните фактори, които са в основата на лимфоидните злокачествени заболявания. Освен това изследователите придобиват представа за началото, прогресията и хетерогенността на заболяването, използвайки тези клетки на Burkitt лимфом. Изследват се и генетични мутации и сигнални пътища, което потенциално може да доведе до разработването на по-прецизни диагностични и терапевтични подходи. Проучване, проведено през 2019 г., установява, че инхибирането на GCN5 (General control non-depressible 5) хистон ацетилтрансфераза намалява туморогенността на човешки лимфомни клетки на Burkitt (Ramos) чрез нарушаване на BCR сигнализацията. Поради това GCN5 се предлага като възможна мишена за разработване на лекарствена терапия на лимфом [2].
- Скрининг и изпитване на лекарства: Клетъчната линия Ramos се използва широко за целите на скрининга и изпитването на лекарства. Изследователите оценяват ефикасността на потенциални терапевтични съединения при инхибиране на клетъчната пролиферация и растеж и предизвикване на клетъчна смърт в лимфомни клетки. Това помага да се идентифицират обещаващи кандидати за лекарства, като по този начин се улеснява разработването на целенасочено лечение за пациенти с лимфом. Такива изследвания показват, че метаноловият екстракт от кожата, пулпата и семената на плодовете на Annona оказва умерено, докато екстрактът в хлороформ проявява силно въздействие върху пролиферацията на клетките на Ramos. По този начин изследването предлага плодовете на Annona да се окажат ефективни при превенцията и лечението на лимфом [3].
Клетки на Рамос за вашите изследвания
Публикации с участието на клетките Ramos
В този раздел на статията са изброени няколко интересни научни публикации с участието на клетъчната линия Ramos:
Това изследване е публикувано в списание The EMBO през 2018 г. Проучването установява, че за своята пригодност и конкурентен растеж B клетките на Ramos се нуждаят от експресия на маркерите CD19 и CD79b (BCR сигнален компонент Igβ).
В това проучване, публикувано в Neoplasia (2021), са използвани клетки Ramos и е предложено, че домейнът на киназата на смесените линии (MLKL) е епигенетично регулиран в клетките на лимфома на Буркит (Ramos). По този начин той е обещаващ прогностичен маркер за успеха на лечението на терапии, свързани с некроптоза.
Фосфорилирането на PBK/TOPK Tyr74 от JAK2 насърчава растежа на тумори при лимфом на Буркит
Тази научна статия в Cancer Letters (2022) предполага, че сигналната ос JAK2/TOPK/histone H3 играе решаваща роля за пролиферацията на клетъчни линии на B лимфом in vitro.
Тази статия е публикувана през 2020 г. в списание Toxins. В изследването се предлага, че третирането с веротоксин-1 предизвиква стрес на ендоплазмения ретикулум (ER) в Рамовите B клетки. Това води до иницииране на апоптотични сигнали или сигнали за оцеляване в лимфомни клетъчни линии.
В това проучване в Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) се съобщава, че природно съединение, силимарин, потиска експресията на TLR8 (Toll-like receptor 8) и апоптозата в клетъчната линия Ramos.
Ресурси за клетъчната линия Ramos: Протоколи, видеоклипове и др
По-долу са изброени няколко онлайн ресурса за клетките на Ramos:
- Клетъчна трансфекция на Ramos: Този документ ще ви помогне да научите протокола за трансфекция на клетъчната линия Ramos.
Следният линк съдържа протокола за култивиране на клетките Ramos:
- Клетки Ramos: Този уебсайт съдържа основна информация за клетъчната линия Ramos. Той съдържа и протокол за субкултивиране на клетките Ramos и работа с пролифериращи и криоконсервирани култури. Освен това е налична и информация относно хранителните среди за клетките Ramos, времето за удвояване и клетъчната плътност.
Основни познания за клетките на Рамос: Често задавани въпроси
Препратки
- Kerntke, C.G., Анализ на организацията и сигналната способност на мембранния IgE по време на взаимодействието му с CD19 и CD23 в В лимфоцитите. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., Инхибирането на GCN5 HAT намалява преживяемостта на човешките лимфомни клетки на Burkitt чрез намаляване на експресията на гените-мишени на MYC и възпрепятстване на сигналните пътища на BCR. Oncotarget, 2019 г. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Phytochemical profile and antioxidation activity of annona fruit and its effect on lymphoma cell proliferation (Фитохимичен профил и антиоксидантна активност на плод от аннона и ефектът му върху пролиферацията на лимфомни клетки). Хранителна наука и хранене, 2020. 8(1): p. 58-68.