Обем: 100 ml
Съхранение: ≤ –15°C
Стерилност: Стерилно филтриран
Стабилен глутаминов разтвор (L-аланил-L-глутамин, 200 mM) е високостабилна дипептидна форма на L-глутамин, предназначена като пряк заместител на конвенционалния L-глутамин в клетъчни културални среди. L-глутаминът е незаменима аминокиселина и основен източник на енергия за култивираните клетки, като играе критична роля в клетъчния растеж, метаболизма и синтеза на протеини.
Приложение и предимства
В стандартните течни среди L-глутаминът се разгражда относително бързо при 37 °C, което води до образуването на токсични странични продукти, като амониеви йони, които могат да повлияят негативно на жизнеспособността на клетките и резултатите от експериментите. Стабилният глутамин преодолява това ограничение, като осигурява неразграждаща се дипептидна форма, която остава непокътната в условия на култивиране.
Клетките ензимно разграждат дипептидната връзка, за да освободят L-глутамин според нуждите, като осигуряват непрекъснато свежо снабдяване и предотвратяват натрупването на вредни отпадни продукти. Това прави разтвора особено подходящ за дългосрочни клетъчни култури и системи за растеж с висока плътност.
Формулировка и употреба
Разтворът L-аланил-L-глутамин се приготвя във вода, подходяща за клетъчни култури, в концентрация 200 mM и се филтрира стерилно за приложения, чувствителни към замърсяване. Може да се разреди директно в пълни среди според експерименталните изисквания. Съхранявайте при ≤ –15 °C и избягвайте повтарящи се цикли на замразяване и размразяване, за да поддържате стабилността на продукта.
Само за изследователски цели. Не е предназначен за употреба в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
Обем: 100 ml
Съхранение: +2°C до +8°C
Стерилност: Стерилно филтриран
HEPES буферен разтвор (1 M), известен също като N-2-хидроксиетилпиперазин-N-2-етансулфонова киселина, е цвиттерионен органичен буферен агент, широко използван в среди за клетъчна култура. Той е предназначен за поддържане на стабилни pH условия във физиологичния диапазон от 6,7 до 8,6, подпомагайки оптималната клетъчна функция по време на ин витро приложения.
Приложение и предимства
HEPES осигурява надеждна буферна способност в системи за клетъчна култура, особено когато клетките се обработват извън CO₂ инкубатор. Добавянето на 10–25 mM HEPES към културалната среда осигурява подобрена pH стабилност по време на продължителни периоди на манипулация, което помага за поддържане на постоянни експериментални условия.
Този буфер е непроницаем за мембрани, има минимална интерференция с биохимичните реакции и демонстрира силна химична и ензимна стабилност. Тези свойства го правят подходящ за широк спектър от клетъчни култури и биохимични приложения.
Формулировка и употреба
Разтворът се доставя като 1 M концентрат, приготвен във вода, подходяща за клетъчни култури, и е стерилно филтриран за употреба в среди, чувствителни към замърсяване. Може да се разреди до желаната работна концентрация в зависимост от изискванията на приложението. Съхранявайте при +2°C до +8°C и боравете в асептични условия, за да запазите целостта на продукта.
Само за изследователски цели. Не е предназначен за употреба в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
Обем: 50 ml
Съхранение: +2°C до +8°C
Стерилност: Стерилно филтриран
D-(+)-глюкозен разтвор (декстрозен разтвор) е стерилна, готова за употреба добавка, съдържаща естествено срещащата се захар D-(+)-глюкоза, основен компонент на клетъчния метаболизъм. Глюкозата участва в основни биологични процеси като производството на енергия, гликозилирането и образуването на гликани, които допринасят за клетъчната структура и функция.
Приложение и ползи
Този разтвор на глюкоза се използва широко като добавка в среди за клетъчна култура и в многобройни приложения в клетъчната и молекулярната биология. Като основен източник на въглерод и енергия, глюкозата подпомага клетъчния растеж, пролиферацията и метаболитната активност. Участието ѝ в биосинтетичните пътища я прави критично важна за поддържането на нормалната клетъчна физиология и експерименталната последователност.
Състав и употреба
Разтворът се доставя с висока концентрация от 250 g/L глюкоза, което позволява гъвкаво разреждане в културални среди според експерименталните изисквания. Той е стерилно филтриран, за да се гарантира пригодността му за приложения, чувствителни към замърсяване. Съхранявайте при температура от +2°C до +8°C и боравете асептично, за да поддържате качеството и стабилността на продукта.
Само за изследователски цели. Не е предназначен за употреба в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
Обем: 10 мл
Съхранение: от +2°C до +8°C
Стерилност: Стерилно филтриран
Разтворът на инсулин-трансферин-селен (ITS) (100x) е химически дефинирана добавка, предназначена за широк спектър от приложения в клетъчните култури. Най-често се използва като добавка към базови среди за клетъчни култури, за да подпомогне клетъчния растеж при условия на намалено или липсващо серум.
Приложение и предимства
Нашата добавка ITS осигурява съставките, необходими за оптималното функциониране на безсерумните среди. Чрез добавяне на ITS към конвенционалните хранителни среди, необходимостта от фетално телешко серум (FBS) за рутинното поддържане на много клетъчни линии може да бъде значително намалена. Това помага за минимизиране на вариациите, свързани с употребата на серум, като същевременно се поддържа постоянен клетъчен растеж и жизнеспособност.
Инсулинът подпомага клетъчното усвояване и метаболизма на ключови хранителни вещества, трансферинът улеснява транспорта на желязо, а селенът допринася за антиоксидантната защита и ензимната активност. Заедно тези компоненти насърчават балансиран клетъчен метаболизъм и подобрена възпроизводимост в дефинирани културални системи.
Състав и употреба
Инсулин-трансферин-селен (ITS) се доставя като 100-кратно концентриран разтвор в балансиран солев разтвор на Earle (EBSS) без фенол червено. За стандартни приложения разредете в съотношение 1:100 в подходящата базова среда, за да постигнете препоръчителната работна концентрация. Съхранявайте при температура от +2 °C до +8 °C и боравете с продукта при асептични условия, за да поддържате стабилността и стерилността му.
Само за изследователски цели. Не се използва за диагностични или терапевтични процедури. Не се използва при хора или животни.
Обем: 5 мл
Съхранение: от +2 °C до +8 °C
Стерилност: стерилно филтриран
Разтворът от рекомбинантен човешки инсулин е химически дефинирана добавка, често използвана за култивиране на клетъчни линии от бозайници, включително клетки от яйчници на китайски хамстер (CHO). Този разтвор за клетъчни култури съдържа рекомбинантен човешки инсулин, експресиран в Saccharomyces cerevisiae, което гарантира висока чистота и постоянни резултати при изследователски приложения.
Приложение и предимства
Инсулинът се добавя рутинно към безсерумни и химически дефинирани среди, за да се стимулира клетъчният растеж и продуктивност. Като ключов регулаторен хормон, инсулинът подпомага клетъчното усвояване, използване и съхранение на глюкоза, аминокиселини и мастни киселини. Той също така инхибира разграждането на гликоген, протеини и липиди, като по този начин допринася за подобрена клетъчна жизненост и метаболитна стабилност в културни системи. Химически дефинираната формула подпомага възпроизводимостта и минимизира вариативността в чувствителните работни процеси при клетъчни култури.
Биологични свойства и употреба
Инсулинът е двуверижен полипептиден хормон, естествено произвеждан от β-клетките на панкреатичните островчета. Той има молекулно тегло от приблизително 5800 Da. α
- и β-веригите са свързани чрез две междуверижни дисулфидни връзки, а α-веригата съдържа една вътреверижна дисулфидна връзка. За приложения в клетъчни култури разтворът трябва да се борави при асептични условия и да се съхранява при температура от +2 °C до +8 °C, за да се поддържат стабилността и ефективността.
Само за изследователски цели. Не е предназначен за използване в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
Обем: 100 ml
Съхранение: +2°C до +8°C
Стерилност: Стерилно филтриран
Разтворът на натриев пируват (100 mM) е стерилна, готова за употреба добавка, предназначена да осигури допълнителен, лесно достъпен източник на енергия за клетъчни културални среди. Натриевият пируват играе ключова роля в клетъчния енергиен метаболизъм и подпомага растежа на метаболитно активни и бързо пролифериращи клетки, като например туморни клетки. Добавката може да повиши жизнеспособността на клетките и да спомогне за поддържането на метаболитна стабилност в културалните системи.
Приложение и предимства
Този разтвор се използва широко в рутинната клетъчна култура за обогатяване на средите с пируват и насърчаване на оптимални условия за растеж. Той подпомага производството на АТФ, може да спомогне за намаляване на оксидативния стрес и допринася за подобряване на метаболитната ефективност на култивираните клетки. Произведен във вода, подходяща за клетъчна култура, и стерилно филтриран, продуктът гарантира постоянна качество и възпроизводимост в изследователските работни процеси.
Употреба и съвместимост
Препоръчителната крайна концентрация за повечето приложения за клетъчна култура е 1 mM натриев пируват, постигана чрез разреждане на 100 mM запасен разтвор 1:100 в пълна културална среда. Разтворът е съвместим с широка гама от базови среди и клетъчни линии на бозайници. Съхранявайте при +2°C до +8°C и предпазвайте от замърсяване, за да поддържате стабилността на продукта.
Само за изследователски цели. Не е предназначен за употреба в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
Обем: 100 ml Съхранение: ≤-15°C Стерилност: Стерилно филтриран
Антибиотик/антимикотичен разтвор (100x ) е стерилен, готов за употреба концентрат, предназначен за намаляване на рисковете от микробно замърсяване в клетъчни култури и свързани с тях лабораторни приложения. Този разтвор 100x съдържа утвърдена комбинация от пеницилин, стрептомицин и амфотерицин В
- осигуряваща широк спектър на антимикробна активност срещу грам-положителни и грам-отрицателни бактерии, дрожди и нишковидни гъбички. Формулата е подходяща за използване в еукариотни клетъчни култури, бактериални среди и други чувствителни към замърсяване системи, като подпомага чистите и последователни лабораторни операции.
Приложение и предимства Оптимизиран за рутинни изследователски протоколи, този разтвор се използва широко за поддържане на асептични условия в работните процеси на клетъчни култури. То предлага надеждна работа в чувствителни към замърсяване среди, като помага на изследователите да намалят риска от свръхрастеж на микроорганизми, без да се компрометира здравето на клетките или възпроизводимостта на експериментите. Стерилно-филтрираният състав елиминира необходимостта от допълнителни етапи на разтваряне, като подпомага рационализираното приготвяне на среди и намалява променливостта в ежедневните лабораторни процедури.
Употреба и съвместимост За да постигнете стандартни работни концентрации, разредете разтвора в съотношение 1:100 в пълна хранителна среда. Продуктът е съвместим с широк спектър от клетъчни линии на бозайници и базови среди. С постоянната наличност на склад изследователите се възползват от надеждна непрекъснатост на доставките и опростено логистично планиране. За да се запази стабилността, разтворът трябва да се съхранява при ≤ -15 °C и да се предпазва от многократни цикли на замразяване и размразяване. Само за изследователска употреба. Не е предназначен за използване в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
Обем: 100 ml Съхранение: +Стерилност: 2°C до +8°C Стерилно филтриран
MEM Non-Essential Amino Acids (100x ) е стерилна добавка, предназначена да подобри клетъчния растеж и жизнеспособността в системи за клетъчни култури от бозайници. Формулата съответства на 100-кратен концентрат на неесенциалните аминокиселини, открити в стандартната минимална есенциална среда (MEM), което позволява директно добавяне на базови среди с минимална подготовка.
Приложение и предимства Тази добавка осигурява допълнителен аминокиселинен пул за бързо размножаващи се клетки или за клетъчни линии, които са загубили способността си да синтезират несъществени аминокиселини de novo. Чрез облекчаване на метаболитната тежест на биосинтезата тя подпомага подобрената кинетика на растежа, удължената жизнеспособност и по-голямата експериментална последователност
- особено при чувствителни към хранителни вещества култури или култури с висока плътност.
Състав и употреба Разтворът включва глицин, L-аланин, L-аспарагин, L-аспарагинова киселина, L-глутаминова киселина, L-пролин и L-серин. Съвместим е с MEM и повечето други стандартни среди. За да използвате, разредете 1:100 в крайната хранителна среда. Този продукт е стерилно филтриран и готов за употреба без допълнителни стъпки за обработка. Само за изследователска употреба. Не е предназначен за използване в диагностични или терапевтични процедури. Не е предназначен за употреба при хора или животни.
- щадяща алтернатива на трипсина
Accutase е разтвор за отделяне на клетки, който прави революция в производството на клетъчни култури. Това е смес от протеолитични и колагенолитични ензими, която имитира действието на трипсин и колагеназа. За разлика от трипсина Accutase не съдържа никакви бозайнически или бактериални компоненти и е много по-щадящ за клетките, което го прави идеално решение за рутинно отделяне на клетки от стандартни пластмасови съдове за тъканни култури и пластмасови съдове с адхезионно покритие. В тази публикация в блога ще разгледаме ползите и приложенията на Accutase и как тя променя правилата на играта в клетъчните култури.
Предимства на Accutase
Accutase има няколко предимства пред традиционните разтвори на трипсин. Първо, тя може да се използва винаги, когато е необходимо нежно и ефикасно отделяне на всяка адхезивна клетъчна линия, което я прави директен заместител на трипсина. Второ, Accutase работи изключително добре с ембрионални и невронни стволови клетки и е доказано, че запазва жизнеспособността на тези клетки след пасиране. Трето, Accutase запазва повечето епитопи за последващ анализ с поточна цитометрия, което я прави идеална за анализ на маркери на клетъчната повърхност.
Освен това Accutase не трябва да се неутрализира при пасиране на адхерентни клетки. Добавянето на повече среда след разделянето на клетките разрежда Accutase, така че тя вече не е в състояние да отдели клетките. Това елиминира нуждата от стъпка за инактивиране и спестява време на техниците, занимаващи се с клетъчни култури. И накрая, не е необходимо Accutase да се аликвотира, а една бутилка е стабилна в хладилника в продължение на 2 месеца.
Приложения на Accutase
Accutase е директен заместител на разтвора на трипсин и може да се използва за пасиране на клетъчни линии. Освен това Accutase се представя добре при отделяне на клетки за анализ на много маркери на клетъчната повърхност с помощта на поточна цитометрия и за сортиране на клетки. Други приложения надолу по веригата на обработка с Accutase включват анализ на маркери на клетъчната повърхност, анализ на растежа на вируси, клетъчна пролиферация, анализи на миграцията на туморни клетки, рутинно пасиране на клетки, увеличаване на производството (биореактор) и поточна цитометрия.
Състав на Accutase
Accutase не съдържа компоненти от бозайници или бактерии и представлява естествена ензимна смес с протеолитична и колагенолитична ензимна активност. Тя е формулирана в много по-ниска концентрация от трипсина и колагеназата, което я прави по-малко токсична и по-нежна, но също толкова ефективна.
Ефективност на Accutase
Доказано е, че Accutase е ефективна при отделянето на първични и стволови клетки и поддържането на висока клетъчна жизнеспособност в сравнение с ензими от животински произход, като трипсин. 100 % от клетките се възстановяват след 10 минути и няма вреда от оставянето на клетките в Accutase до 45 минути, благодарение на авторазграждането на Accutase.
В обобщение
В заключение, Accutase е мощно решение, което променя правилата на играта в клетъчните култури. Със своята щадяща природа, ефективност и гъвкавост Accutase е идеалната алтернатива на трипсина. Ако търсите надеждно и ефикасно решение за отделяне на клетки, Accutase е решението за вас.
Какво се съдържа в ЕМЕМ?
EMEM е модифицирана версия на минималната основна среда на Eagle, съдържаща балансиран солен разтвор на Earle, неесенциални аминокиселини, L-глутамин, натриев пируват и натриев бикарбонат. Важно е да се отбележи, че това ниво на натриев бикарбонат е предназначено за употреба при 5% CO2 във въздуха. За да се запази ефективността ѝ, се препоръчва средата да се съхранява на тъмно при температура от 2°C до 8°C, когато не се използва.
За какво се използва ЕМЕМ?
Минималната есенциална среда на Eagle (EMEM) е среда за клетъчни култури, която може да поддържа клетки в тъканни култури. Средата съдържа по-високи концентрации на аминокиселини, което позволява по-точно доближаване до протеиновия състав на култивираните клетки на бозайници. EMEM може да се използва за култивиране на различни клетки, включително фибробласти, клетки от клетъчна линия на човешки рак на черния дроб (HepG2) и клетки от астроцити, получени от човешки фетален мозъчен прогенитор (PDA). Обикновено се използва в присъствието на фетален говежди серум (FBS), телешки или конски серум.
По какво се различава ЕМЕМ от другите среди за клетъчни култури?
Въпреки че ЕМЕМ и модифицираната среда на Dulbecco's Eagle's medium (DMEM) имат някои сходства, те също така се различават. И в двете среди липсват протеини и те съдържат аминокиселини, соли, глюкоза и витамини, необходими за осигуряване на енергия на клетките и за поддържането им в тъканна култура. Съставът на DMEM обаче е модифициран така, че да съдържа до четири пъти повече витамини и аминокиселини и от два до четири пъти повече глюкоза, отколкото EMEM. Струва си да се отбележи, че ЕМЕМ също се различава от оригиналната формулировка на МЕМ.
Контрол на качеството
Стерилно филтриран
Съхранение и срок на годност
Съхранявайте при температура от +2°C до +8°C, защитена от светлина.
След отваряне съхранявайте при 4°C и използвайте в рамките на 6-8 седмици.
Условия за транспортиране
Температура на околната среда
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.
Състав
Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)
Аминокиселини
L-аргинин HCl
126.00
L-цистин 2 HCl
31.30
L-глутамин
292.00
L-Histidine HClH2O
42.00
L-изолевцин
52.00
L-Leucine
52.00
L-лизин HCl
72.50
L-метионин
15.00
L-фенилаланин
32.00
L-треонин
48.00
L-триптофан
10.00
L-тирозин 2 Na 2H2O
51.90
L-Valine
46.00
Витамини
Холин хлорид
1.00
Витамини
D-калциев пантотенат
1.00
Фолиева киселина
1.00
мио-Инозитол
2.00
Никотинамид
1.00
Пиридоксал HCl
1.00
Рибофлавин
0.10
Тиамин HCl
1.00
Неорганични соли
CaCl2 2H2O
265.00
Неорганични соли
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Други компоненти
D-глюкоза
1000.00
Други компоненти
Фенолно червено натриева сол
11.00
Основните характеристики на Freeze Medium CM-1 включват:
Широка съвместимост: Ефективна за широк спектър от клетъчни типове, включително първични клетки, стволови клетки и установени клетъчни линии.
Висока жизнеспособност: Оптимизирана за максимално възстановяване на клетките след размразяването им и тяхната жизнеспособност, което гарантира надеждни експериментални резултати.
Готов за употреба: Удобно подготвени и стерилизирани за незабавно приложение, което намалява времето за подготовка и риска от замърсяване.
Повишена стабилност: Поддържа постоянна производителност при стандартни условия на криоконсервация, като осигурява възпроизводими резултати.
Дълъг срок на съхранение: CM-1 е готова за употреба среда за криоконсервация, съдържаща серум, която може да се съхранява в хладилник до една година.
Използване на CM-1 за замразяване на клетки
За да използвате CM-1 за замразяване на адхезивни и суспензионни клетки, следвайте следните стъпки
За адхерентни клетки ги измийте и ги отделете от субстрата за култивиране. За суспензионни клетки преминете директно към следващата стъпка.
Пребройте клетките, за да се уверите, че те са с подходяща концентрация.
Центрофугирайте клетките, за да ги пелетирате, след което ги ресуспендирайте в среда за замразяване CM-1.
Прехвърлете ресуспендираните клетки в криовиали.
Използвайте метод за бавно замразяване, преди да прехвърлите клетките за дългосрочно съхранение
Метод
Описание
Стъпки
❄️
Ръчно замразяване
Метод, включващ постепенно намаляване на температурата, за да се осигури жизнеспособността на клетките
1️⃣ Поставете клетките в среда за замразяване във фризер с температура 4 °C за 40 минути.
2️⃣ Прехвърлете във фризер с температура -80°C за 24 часа.
3️⃣ Съхранявайте клетките в течен азот за дългосрочно запазване
❄️
Използване на Mr. Frosty
Удобно устройство, което позволява контролирана скорост на замразяване без електрическо захранване
1️⃣ Подгответе клетките в криовиали със замразяваща среда.
2️⃣ Поставете криовиолите в контейнера на Mr. Frosty.
3️⃣ Съхранявайте при -80 °C за 24 часа, преди да прехвърлите в течен азот
❄️
Фризер с контролирана скорост
Високопрецизен фризер на Thermo Fisher или на други производители, предназначен за контролирано намаляване на температурата
1️⃣ Програмирайте устройството за постепенно намаляване на температурата.
2️⃣ Поставете подготвените клетки във фризера.
3️⃣ След цикъла на замразяване прехвърлете клетките в течен азот
Съхранявайте криовиолите при температури под -130 °C или в течен азот за дългосрочно съхранение.
Съставки
Съдържа FBS, DMSO, глюкоза, соли
Буфериращ капацитет: pH = 7,2 до 7,6
Средата за замразяване CM-1 на Cytion предлага надеждно решение за криоконсервация, като осигурява висока клетъчна жизнеспособност и функционалност след размразяване за широк спектър от изследователски приложения.
Средата Ham's F-12K (Kaighn's) е внимателно формулирана, за да оптимизира условията за клетъчно култивиране. Тя се отличава с обогатен състав, осигуряващ повишени нива на основни компоненти като аминокиселини и натриев пируват, както и допълнителни елементи, включително путресцин, тимидин, хипоксантин и цинк. Тези добавки дават възможност на изследователите да допълват средата с минимално количество серум или определени компоненти за специфични клетъчни типове, което улеснява прецизните експериментални условия.
Забележително е, че средата Ham's F-12K (Kaighn's) не съдържа протеини или растежни фактори. Следователно често е необходимо добавяне на растежни фактори и фетален говежди серум (FBS), което позволява на изследователите да адаптират средата към изискванията на техните специфични клетъчни линии. За оптимална ефективност концентрацията на FBS трябва да бъде внимателно оптимизирана за всяка клетъчна линия, като се гарантира оптимален растеж и функционалност.
За поддържане на физиологично рН в средата Ham's F-12K (Kaighn's) се използва буферна система от натриев бикарбонат (2,5 g/L), което налага контролирана среда от 5-10 % CO2 по време на култивирането. Това гарантира, че рН на средата остава в идеалния диапазон за клетъчен растеж и жизнеспособност
Контрол на качеството
pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Всяка партида е тествана за стерилност и липса на микоплазма и бактерии.
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник на тъмно при температура от +2°C до +8°C. Замразяването, както и затоплянето до +37°C намаляват до минимум качеството на продукта.
Не нагрявайте средата до повече от 37°C и не използвайте неконтролируеми източници на топлина (напр. микровълнови уреди).
Ако трябва да се използва само част от средата, извадете това количество от бутилката и го загрейте на стайна температура.
Срокът на годност на всяка среда, с изключение на основната среда, е 8 седмици от датата на производство.
Състав
Компоненти
mg/L
Неорганични соли
Калциев хлорид x 2H2O
135,24
Меден(II) сулфат x 5H2O
0,00
Железен (II) сулфат x 7H2O
0,83
Магнезиев хлорид x 6H2O
105,72
Магнезиев сулфат x 7H2O
394,49
Калиев хлорид
283,29
Калиев дихидрогенфосфат
58,52
Натриев хлорид
7597,20
натриев хидрогенфосфатбезводен
115,02
Цинков сулфат x 7H2O
0,14
Други компоненти
D(+)-глюкоза, безводна
1260,00
Хипоксантин
4,08
DL-α-липоева киселина
0,21
Червен фенол
3,00
Путресцин x 2HCl
0,32
Натриев пируват
220,00
NaHCO3
2500,00
Тимидин
0,73
Аминокиселини
L-аланин
17,82
L-аргинин х HCl
421,40
L-аспарагин x H2O
30,02
L-аспарагинова киселина
26,62
L-цистеин x HCl x H2O
70,24
L-глутамин
292,20
L-глутаминова киселина
29,42
Глицин
15,01
L-хистидин х HCl х H2O
41,92
L-изолевцин
7,87
L-Leucine
26,24
L-лизин x HCl
73,04
L-метионин
8,95
L-фенилаланин
9,91
L-пролин
69,06
L-серин
21,02
L-треонин
23,82
L-триптофан
4,08
L-тирозин
10,87
L-Valine
23,42
Витамини
D(+)-Биотин
0,07
D-калциев пантотенат
0,48
Холин хлорид
13,96
Фолиева киселина
1,32
мио-инозитол
18,02
Никотинамид
0,04
Пиридоксин x HCl
0,06
Рибофлавин
0,04
Тиамин x HCl
0,34
Витамин В12
1,36
Фосфатно-буферираният физиологичен разтвор (PBS) е широко използван буферен разтвор в биологичните и химичните изследвания. Той играе решаваща роля за поддържане на pH баланса и осмоларността по време на различни експериментални процедури, включително обработка на тъкани и клетъчни култури. Нашият разтвор на PBS е щателно формулиран с висококачествени съставки, за да се гарантира стабилност и надеждност при всеки експеримент. Осмоларността и концентрацията на йони в нашия разтвор PBS са близки до тези в човешкото тяло, което го прави изотоничен и нетоксичен за повечето клетки.
Състав на нашия разтвор на PBS
Нашият разтвор на PBS е смес от свръхчисти фосфатни буфери и физиологични разтвори с коригирано pH. В работна концентрация 1Х той съдържа:
8000 mg/L Натриев хлорид (NaCl)
200 mg/L Калиев хлорид (KCl)
1150 mg/L Натриев фосфат двуосновен безводен (Na2HPO4)
200 mg/L Калиев фосфат монобазичен безводен (KH2PO4)
Този състав осигурява оптимално рН и йонно равновесие, подходящи за широк спектър от биологични приложения.
Приложения на нашия разтвор на PBS
Нашият разтвор на PBS е идеален за различни приложения в биологичните изследвания. Неговите изотонични и нетоксични свойства го правят подходящ за разреждане на вещества и за изплакване на клетъчни контейнери. Разтворите PBS, съдържащи EDTA, са ефективни за отделяне на прикрепени и слепени клетки. Въпреки това към PBS не трябва да се добавят двувалентни метали, като например цинк, тъй като това може да доведе до утаяване. В такива случаи се препоръчват буферите на Good's. Освен това нашият разтвор на PBS е приемлива алтернатива на вирусната транспортна среда за транспортиране и съхранение на РНК вируси, включително SARS-CoV-2.
Контрол на качеството
Стерилно филтриран
Съхранение и срок на годност
Съхранявайте при температура от +2°C до +25°C, защитени от светлина.
След отваряне съхранявайте при 2°C до 25°C и използвайте в рамките на 24 месеца.
Условия за транспортиране
Температура на околната среда
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.
Състав
Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)
Соли
Калиев хлорид
200
Калиев фосфат монобазичен безводен
200
Натриев хлорид
8000
Натриев фосфат двуосновен безводен
1150
Първоначално създадена за поддържане на растежа на човешки левкемични клетки в суспензионни и монослойни култури, средата RPMI 1640 еволюира чрез модификации от изследователи и търговски доставчици, за да стане подходяща за разнообразни клетки на бозайници. Тя е изключително съвместима с клетъчни линии като HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, астроцити и карциноми.
Средата RPMI 1640 се отличава от другите среди за клетъчни култури поради уникалния си състав. Тя съдържа значително количество фосфати, аминокиселини и витамини. По-специално, тя включва биотин, витамин В12 и PABA, които отсъстват в Eagle's Minimal Essential Medium или Dulbecco's Modified Eagle Medium. Освен това средата RPMI 1640 показва значително повишени концентрации на витамините инозитол и холин. Тя обаче не съдържа протеини, липиди или растежни фактори. Поради това обикновено се налага добавяне на 10% фетален говежди серум (FBS), за да се осигурят оптимални условия за клетъчен растеж.
Буферната система на средата RPMI 1640 разчита на натриев бикарбонат и изисква 5-10% CO2 среда, за да се поддържа физиологично подходящо pH. Включването на редуциращия агент глутатион допълнително отличава тази среда от останалите.
Контрол на качеството
Стерилно филтрирани
Съхранение и срок на годност
Съхранявайте при температура от +2°C до +8°C, защитена от светлина.
След отваряне съхранявайте при 4°C и използвайте в рамките на 6-8 седмици.
Условия за транспортиране
Температура на околната среда
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.
Състав
Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)
Аминокиселини
Глицин
10.00
L-аланил-L-глутамин
434.40
L-аргинин
200.00
L-аспарагинH2O
56.82
L-аспарагинова киселина
20.00
L-цистин 2HCl
65.20
L-глутаминова киселина
20.00
L-Histidine HClH2O
20.27
L-хидрокси-L-пролин
20.00
L-изолевцин
50.00
L-Leucine
50.00
L-лизин HCl
40.00
L-метионин
15.00
L-фенилаланин
15.00
L-пролин
20.00
L-серин
30.00
L-Threonine
20.00
L-триптофан
5.00
L-тирозин 2Na 2H2O
28.83
L-Valine
20.00
Витамини
р-аминобензоена киселина
1.00
D-биотин
0.20
Холин хлорид
3.00
D-калциев пантотенат
0.25
Фолиева киселина
1.00
мио-Инозитол
35.00
Никотинамид
1.00
Пиридоксин HCl
1.00
Рибофлавин
0.20
Тиамин HCl
1.00
Витамин В12
0.005
Неорганични соли
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Други компоненти
D-глюкоза
2000.00
L-глутатион, редуциран
1.00
Фенол червено натриева сол
5.30
Тази уникална формула съчетава модифицирана среда на Дюлбеко (DMEM) и Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) в точно съотношение 1:1. Добавянето на L-глутамин допълнително подобрява нейния състав.
DMEM, получена от Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), предлага повишена концентрация на аминокиселини и витамини в сравнение с предшественика си. За разлика от нея, Ham's F-12 се основава на средата Ham's F-10, като осигурява допълнителен набор от основни компоненти.
За да се поддържа оптимален клетъчен растеж, обичайната практика е DMEM:Ham's F12 да се допълва с FBS с типична концентрация от 5-10 %. Тази добавка е необходима, тъй като в средата липсват хормони на растежа, липиди и протеини, които са от решаващо значение за клетъчното развитие.
DMEM:Ham's F12 включва pH буферна система и често се допълва с фенолово червено, индикатор за pH. Култивирането на клетки в DMEM:Ham's F12 или всяка друга среда, използваща бикарбонатна буферна система, изисква контролирана среда от 5-10 % CO2, за да се поддържат подходящи нива на рН.
Контрол на качеството
Стерилно филтриран
Съхранение и срок на годност
Съхранявайте при температура от +2°C до +8°C, защитени от светлина.
След отваряне съхранявайте при 4°C и използвайте в рамките на 6-8 седмици.
Условия за транспортиране
Температура на околната среда
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно. Избягвайте замразяването и честото затопляне до +37°C, тъй като това намалява качеството на продукта.
Не нагрявайте средата над 37°C и не използвайте неконтролирани източници на топлина, като например микровълнови уреди.
Ако трябва да се използва само част от средата, отстранете необходимото количество и го загрейте до стайна температура преди употреба.
Състав
Категория
Компоненти
Концентрация (mg/L)
Аминокиселини
Глицин
18.75
L-аланин
4.45
L-аргинин HCl
147.50
L-аспарагин H₂O
7.50
L-аспарагинова киселина
6.65
L-цистеин HCl H₂O
17.56
L-цистин 2 HCl
31.29
L-глутаминова киселина
7.35
L-глутамин
365.00
L-Histidine HCl H₂O
31.48
L-изолевцин
54.47
L-Leucine
59.05
L-лизин HCl
91.25
L-метионин
17.24
L-фенилаланин
35.48
L-пролин
17.25
L-серин
26.25
L-треонин
53.45
L-триптофан
9.02
L-тирозин динатриева сол
48.10
L-валин
52.85
Витамини
D-биотин
0.0035
Холин хлорид
8.98
D-калциев пантотенат
2.24
Фолиева киселина
2.66
мио-инозитол
12.60
Никотинамид
2.02
Пиридоксин HCl
0.031
Пиридоксал HCl
2.00
Рибофлавин
0.219
Тиамин HCl
2.17
Витамин В12
0.68
Неорганични соли
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Други компоненти
D-глюкоза
3151.00
Хипоксантин
2.40
HEPES
3574.50
Линолова киселина
0.042
Липоева киселина
0.105
Фенол червено натриева сол
8.63
Путресцин 2 HCl
0.081
Натриев пируват
55.00
Тимидин
0.365
- 0,02 при 20-25 °C. Всяка партида е тествана за стерилност и отсъствие на микоплазма и бактерии. Съхранение Съхранявайте в хладилник при температура от +2°C до +8°C на тъмно място. Замразяването и затоплянето до +37°C намаляват качеството на продукта. Не загрявайте средата до повече от 37°C и не използвайте неконтролируеми източници на топлина (например микровълнови уреди). Ако ще се използва само част от средата, извадете това количество от бутилката и го затоплете до стайна температура. Срокът на годност за всички среди, с изключение на основната среда, е 6 до 8 седмици от датата на отваряне. Състав Съставки mg/L Неорганични солиКалциев хлорид x 2H2O132,00 Магнезиев сулфат97,67 Калиев хлорид400 Натриев хлорид6460 Динатриев хидроген фосфат (безводен)504 Други компонентиD(+)-глюкоза (безводен)3 000 Глутатион (редуциран)0 Месен пептон600 Фенол червена натриева сол11 АминокиселиниL-аланин13 L-аргинин x HCl42,14 L-аспарагин x H2O45,03 L-аспарагинова киселина19,97 L-цистеин x HCl x H2O31,75 L-глутамин (стабилен)219,15 L-глутаминова киселина22 Глицин7 L-хистидин x HCl x H2O20,96 L-хидроксипролин19,67 L-изолевцин39,3 L-левцин39,36 L-лизин x HCl36,54 L-метионин14,92 L-фенилаланин16,52 L-пролин17,27 L-серин26,28 L-треонин17,87 L-триптофан3,06 L-тирозин динатриева сол26,10 L-валин17,57 Витаминиp-Аминобензоена киселина1 Аскорбинова киселина0,56 D(+)-Биотин0,20 D-калциев пантотенат0,20 Холин хлорид5 Фолиева киселина10 Мио-инозитол36 Никотинамид0 Никотинова киселина0,5 Пиридоксал HCl0,5 Пиридоксин HCl0,50 Рибофлавин0,20 Тиамин HCl0 Витамин В122
Среда 199 предлага редица приложения в областта. Тя може ефективно да поддържа комплекса кумулус-оцит (COC) и да подпомага ин витро съзряването на яйцеклетки. Освен това тя се използва при промиване на аспирационни линии по време на събиране на яйцеклетки от немски крави от породата Холщайн. Освен това среда 199 служи като отлична среда за култивиране на сърдечни ендотелни клетки, получени от плъхове. Тези приложения демонстрират гъвкавостта и приспособимостта на среда 199 към различни експериментални нужди.
История
Разработването на среда 199 през 50-те години на миналия век бележи значителен напредък в областта на средите за тъканни култури. Преди нейното въвеждане много среди за култивиране са разчитали на продукти от животински произход и тъканни екстракти. Морган и колегите му обаче правят революция в тази област, като формулират напълно определен хранителен източник за клетъчни култури. Чрез своите експерименти, включващи различни комбинации от витамини, аминокиселини и други фактори, те откриват изключителните свойства на среда 199, стимулираща растежа.
Контрол на качеството
pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Всяка партида е тествана за стерилност и липса на микоплазма и бактерии.
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник на тъмно при температура от +2°C до +8°C. Замразяването и затоплянето до +37°С намаляват до минимум качеството на продукта.
Не нагрявайте средата до повече от 37°С и не използвайте неконтролируеми източници на топлина (напр. микровълнови уреди).
Ако трябва да се използва само част от средата, извадете това количество от бутилката и го загрейте на стайна температура.
Срокът на годност на всяка среда, с изключение на основната среда, е 8 седмици от датата на производство.
Състав
Компоненти
mg/L
Неорганични соли
Калциев хлорид x 2H2O
264,92
Железен (III) нитрат x 9H2O
0,72
Магнезиев сулфат
97,67
Калиев хлорид
400,00
Натриев ацетат x 3H2O
82,95
Натриев хлорид
6,800.00
Натриев дихидрогенфосфат x H2O
140,00
Други компоненти
Аденин сулфат
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Холестерол
0,20
2'-дезоксирибоза
0,50
D(+)-глюкоза, безводна
1,000.00
Глутатион (червен)
0,05
Гуанин х HCl
0,30
Хипоксантин
0,30
Фенол червено
10,00
D-рибоза
0,50
Тимин
0,30
Tween 80
4,90
Урацил
0,30
Ксантин
0,30
NaHCO3
2,200.00
Аминокиселини
L-аланин
25,00
L-аргинин x HCl
70,00
L-аспарагинова киселина
30,00
L-цистеин x HCl x H2O
0,10
L-цистин
20,00
Стабилен L-глутамин
149,00
L-глутаминова киселина
67,00
Глицин
50,00
L-хистидин x HCl x H2O
21,88
L-хидроксипролин
10,00
L-изолевцин
20,00
L-Leucine
60,00
L-лизин x HCl
70,00
L-метионин
15,00
L-фенилаланин
25,00
L-пролин
40,00
L-серин
25,00
L-треонин
30,00
L-триптофан
10,00
L-тирозин
40,00
L-валин
25,00
Витамини
4-аминобензоена киселина
0,05
Аскорбинова киселина
0,05
D(+)-Биотин
0,01
Калциферол
0,10
D-калциев пантотенат
0,01
Холин хлорид
0,50
Фолиева киселина
0,01
мио-Инозитол
0,05
Менадион
0,01
Никотинова киселина
0.025
Никотинамид
0.025
Пиридоксал х HCl
0.025
Пиридоксол х HCl
0.025
Рибофлавин
0,01
DL-α-токоферол фосфат динатриева сол
0,01
Тиамин х HCl
0,01
Витамин А ацетат
0,14
IMDM е подходящ за бързо пролифериращи клетъчни култури с висока плътност, включително Jurkat, COS-7 и макрофаги. Различните модификации на IMDM, налични за редица приложения за клетъчни култури, могат да бъдат намерени с помощта на инструмента за избор на среди. Течните среди осигуряват основни хранителни вещества за всички приложения за клетъчни култури. Всяка от нашите висококачествени среди за клетъчни култури се произвежда в съответствие с първоначално публикуваната формула или модификации, необходими за постоянното функциониране и стабилност на средата за култура.
IMDM срещу DMEM
IMDM съдържа калиев нитрат вместо железен нитрат и HEPES и натриев пируват. Допълнителните компоненти в IMDM я правят по-подходяща за специализирани клетъчни типове и специфични приложения, отколкото DMEM.
IMDM срещу RPMI
IMDM и RPMI имат различни формули, които могат да бъдат от значение за стимулирането с PMA/йономицин. Една от съществените разлики е концентрацията на Ca2+. Докато RPMI съдържа 0,42 mM Ca2+, IMDM съдържа 1,49 mM.
Контрол на качеството
pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Всяка партида е тествана за стерилност и липса на микоплазма и бактерии.
Поддръжка
Съхранявайте в хладилник на тъмно при температура от +2°C до +8°C. Замразяването и затоплянето до +37°С намаляват до минимум качеството на продукта.
Не нагрявайте средата до повече от 37°С и не използвайте неконтролируеми източници на топлина (напр. микровълнови уреди).
Ако трябва да се използва само част от средата, извадете това количество от бутилката и го загрейте на стайна температура.
Срокът на годност на всяка среда, с изключение на основната среда, е 8 седмици от датата на производство.
Състав
Компоненти
mg/L
Неорганични соли
Калциев хлорид x 2 H2O
219,00
Калиев хлорид
330,00
Калиев нитрат
0.076
Магнезиев сулфат, безводен
97,73
Натриев хлорид
4,505.00
Натриев дихидрогенфосфат, безводен
109,00
Натриев селенит
0,02
Други компоненти
D(+)-глюкоза, безводна
4,500.00
HEPES
5,958.00
Натриев пируват
110,00
Фенол червено
15,00
Аминокиселини
L-аланин
25,00
L-аргинин x HCl
84,00
L-аспарагин x H2O
25,00
L-аспарагинова киселина
30,00
L-цистин х 2HCl
91,24
L-глутамин
584,00
L-глутаминова киселина
75,00
Глицин
30,00
L-хистидин x HCl x H2O
42,00
L-изолевцин
104,80
L-Leucine
104,80
L-лизин x HCl
146,20
L-метионин
30,00
L-фенилаланин
66,00
L-пролин
40,00
L-серин
42,00
L-треонин
95,20
L-триптофан
16,00
L-тирозин x 2Na
104,20
L-Valine
93,60
Витамини
D(+)-Биотин
0.013
D-калциев пантотенат
4,00
Холин хлорид
4,00
Фолиева киселина
4,00
мио-инозитол
7,20
Среда за клетъчни култури: Преглед
В областта на науките за живота една от най-важните методологии е клетъчната култура. С израза "клетъчна култура" се означава вземането на клетки, тъкани или органи от животно или растение и последващото имплантиране на тези клетки, тъкани или органи в изкуствена среда, която е благоприятна за тяхното оцеляване и/или растеж Основните нужди на околната среда за оптимално развитие на клетките са контролирана температура, субстрат за прикрепване на клетките, подходяща среда за растеж и инкубатор, който поддържа оптимално рН и осмолалност. Клетките трябва да разполагат с тези условия, за да могат да развият пълния си потенциал.
Изборът на подходяща хранителна среда за ин витро култивиране е етапът в клетъчната култура, който е едновременно най-критичен и най-важен. Растежната среда, известна също като хранителна среда, е течност или гел, формулирана така, че да насърчава развитието на организмите в микроскопичен, клетъчен или растителен мащаб. Средата, използвана за култивиране на клетки, често съдържа достатъчен запас от енергия и вещества, които контролират клетъчния цикъл. Основните компоненти на средата за култивиране включват аминокиселини, витамини, неорганични соли, глюкоза и серум. Серумът се добавя към средата, защото действа като източник на растежни фактори, хормони и фактори на прикрепване. В допълнение към осигуряването на хранителни вещества, средата допринася и за поддържането на нивата на рН и осмолалност.
Видове среди, използвани в клетъчните култури
Както човешките, така и животинските клетки имат възможност да бъдат отглеждани в изкуствена или синтетична среда или в изцяло естествена среда, която е допълнена с природни елементи. По-долу ще ви представим преглед на различните налични в момента видове среди.
Естествени среди
В естествените среди могат да се намират само биологични течности, които съществуват в естественото си състояние. Естествените среди са много полезни и лесни за култивиране на голямо разнообразие от животински клетъчни типове. Липсата на разбиране за точните компоненти, които съставляват естествените среди, е основният фактор, допринасящ за ниската повторяемост на резултатите, получени при използване на естествени среди.
Изкуствени среди
Приготвянето на изкуствени или синтетични среди включва добавянето на хранителни вещества (органични и неорганични), серумни протеини, въглехидрати, кофактори, витамини и соли, както и газови фази O2 и CO2 [1].
Разработени са различни видове изкуствени среди, за да изпълняват една или повече от следните функции: 1) Незабавно оцеляване (балансиран солен разтвор с точно определено рН и осмотично налягане). 2) Продължително оцеляване (балансиран солен разтвор, допълнен с различни формулировки на органични химикали и/или серум). 3) Неограничено развитие. 4) Специализирани функции.
Съществуват четири различни класификации за изкуствените среди:
Среда, съдържаща серум
Най-честият вид добавка, която се среща в среда, използвана за отглеждане на животински клетки, е фетален говежди серум. Той се добавя към средата за култивиране като евтина добавка, за да се постигнат възможно най-добрите условия за растеж. Освен че действа като преносител или хелатор за хранителни вещества, които са нестабилни или неразтворими във вода, хормони и растежни фактори, протеазни инхибитори и други вещества, серумът също така свързва и неутрализира вредни молекули.
Среда без серум
Наличието на серум в средата има редица недостатъци и е в състояние да доведе до сериозни грешки в интерпретацията при имунологичните изследвания [2, 3]. Създадени са множество различни безсерумни среди [4, 5]. Тези среди обикновено са специално разработени за поддържане на култивирането на един тип клетки, като например Knockout Serum Replacement и Knockout DMEM на Thermo Fisher Scientific и mTESR среда на Stem Cell Technologies [6], за стволови клетки [7].
Освен това тези среди включват определени количества пречистени растежни фактори, липопротеини и други протеини, които иначе обикновено се осигуряват от серума [8]. Тези среди често се наричат "дефинирани културни среди", тъй като компонентите, които ги изграждат, са добре познати.
Химически определени среди
Тези среди включват свръхчисти неорганични и органични компоненти, които не са били замърсени от какъвто и да е вид замърсяване. Те могат да включват и чисти протеинови добавки, като например растежни фактори.
генетичната модификация на бактерии или дрожди, заедно с добавянето на определени мастни киселини, витамини, холестерол и аминокиселини, води до производството на техните съставни части [9].
Среда без протеини
Безпротеинови среди са тези, които не включват никакви протеини, а вместо това включват само непротеинови елементи. В сравнение с хранителните среди с добавен серум, използването на хранителни среди без добавен протеин насърчава по-голямо разпространение на клетките и експресия на протеини и улеснява пречистването на всеки продукт, получен в процеса надолу по веригата [10-12]. Протеинът не е включен в състави като MEM и RPMI-1640. Въпреки това, ако е необходимо, може да се прилага протеинова добавка.
Културна среда и нейните основни компоненти
Търговската хранителна среда за култивиране може да бъде закупена като прах или течност и често включва различни хранителни вещества, като аминокиселини, глюкоза, соли, витамини и други хранителни добавки.
Нуждите от тези компоненти са различни за всяка клетъчна линия и тези вариации са причина за големия брой различни формулировки на средите. Всеки компонент отговаря за определена функция, която ще бъде описана в следващите параграфи:
Буферни системи
За да се поддържат оптимални условия на отглеждане, трябва да се контролира рН, което често се прави чрез една от двете буферни системи:
Естествена буферна система
Съотношението CO2/H2CO3 в атмосферата е равно на това в средата, което създава естествен буферен механизъм. За да се запази естественият буферен механизъм, културите трябва да се държат във въздушна среда с 5-10 % CO2, което често се постига чрез използване на инкубатор с CO2. Едно от най-хубавите неща при използването на естествен буфер е колко евтин и безопасен е той.
HEPES
Химическото буфериране с помощта на цвитериона HEPES има по-голяма буферна способност в диапазона на рН 7,2-7,4 и не се нуждае от регулирана газова среда. За определени типове клетки по-голяма доза HEPES може да бъде вредна. Средите, съдържащи HEPES, също така са много по-чувствителни към фототоксичните ефекти на флуоресцентната светлина [13].
Фенолово червено
Индикаторът за рН фенол червено често се включва в наличните в търговската мрежа среди за култивиране, което позволява непрекъснат мониторинг на рН. При разширяване на клетките произведените от тях метаболити предизвикват промяна в рН и следователно промяна в цвета на средата. Феноловото червено има двоен ефект върху цвета на средата, като я оцветява в жълто при киселинно рН и в лилаво при алкално рН. рН 7,4, оптималната стойност за клетъчна култура, предизвиква появата на флуоресцентно червено в средата.
Но феноловото червено има няколко недостатъка: Първо, феноловото червено е в състояние да симулира действието на редица стероидни хормони, най-вече на естрогена [14]. Ето защо, когато се изследват чувствителни към естрогени клетки като тъканта на гърдата, се препоръчва среда, която не съдържа фенолово червено. Натриево-калиевият баланс се нарушава от наличието на фенолово червено в няколко безсерумни формулировки. Добавянето на серум или хормон на хипофизата на едрия рогат добитък към средата може да неутрализира този ефект [15]. На трето място, наличието на фенолово червено затруднява откриването при флоуцитометрични експерименти.
Неорганични соли
Средата, съдържаща неорганични соли, като натриеви, калиеви и калциеви йони, подпомага поддържането на осмотичното равновесие и регулира мембранния потенциал.
Аминокиселини
Тъй като аминокиселините са основните компоненти на белтъчините, те са основен компонент на всяка една среда за клетъчен растеж, която някога е била създадена. Тъй като клетките не са в състояние сами да произвеждат някои аминокиселини, е важно хранителната среда да включва незаменими аминокиселини. Те са необходими за размножаването на клетките и концентрацията, в която присъстват, определя максималната клетъчна плътност, която може да бъде постигната. Особено важен е L-глутаминът, който е незаменима аминокиселина.
L-глутаминът функционира като вторичен източник на енергия за метаболизма и допринася за производството на азот от NAD, NADPH и нуклеотиди. Поради факта, че L-глутаминът е нестабилна аминокиселина, която с времето се променя във форма, която клетките не могат да използват, той трябва да се дава в средата.
Освен това в средата могат да се доставят неесенциални аминокиселини, за да се попълнят тези, които са били използвани в процеса на растеж. Растежът на клетките се ускорява и тяхната жизнеспособност се увеличава, когато растежната среда се допълва с неесенциални аминокиселини.
Въглехидрати
Въглехидратите под формата на захари са основният източник на енергия. Много от хранителните среди включват и малтоза и фруктоза в допълнение към по-често срещаните захари - глюкоза и галактоза.
Протеини и пептиди
Албуминът, трансферинът и фибронектинът са най-често използваните белтъци и пептиди. Те са особено важни в средите, които не включват серум. Албуминът, трансферинът, апротининът, фетуинът и фибронектинът са някои от протеините, които могат да бъдат открити в серума, който е богат източник на протеини.
Албуминът е основният белтък, който се намира в кръвта, и неговата функция е да свързва и пренася различни вещества, включително вода, соли, свободни мастни киселини, хормони и витамини, между различни органи и клетки. Способността на албумина да се свързва с химикали го прави ефективен кандидат за отстраняване на вредни съединения от средата, в която се култивират клетките.
Апротининът е защитен агент в системите за клетъчни култури, тъй като е стабилен при неутрално и киселинно рН, както и устойчив на високи температури и разрушения, които могат да бъдат причинени от протеолитични ензими. Той е способен да инхибира редица серинови протеази, включително трипсин, наред с други.
Фетуинът е гликопротеин, който може да бъде открит в по-големи количества в серума на плода и новородените животни в сравнение със серума на възрастните. Освен това той действа като инхибитор на серинови протеази. Протеинът фибронектин е съществен компонент в процеса на клетъчна адхезия. Трансферинът е белтък, който пренася желязо и отговаря за доставянето му до мембраните на клетките.
Мастни киселини и липиди
Те играят решаваща роля в безсерумната среда, когато липсва серум.
Витамини
Многобройни витамини са необходими за развитието и пролиферацията на клетките. Витамините не могат да се произвеждат в достатъчни количества от клетките и затова са от съществено значение в тъканните култури като хранителни добавки.
При клетъчните култури серумът е основният източник на витамини; въпреки това средите също се обработват с различни витамини, за да се направят подходящи за определен тип клетки. Най-често за стимулиране на растежа се използват витамините от група В.
Микроелементи
Химични елементи като мед, цинк, селен и междинни продукти на трикарбоксилната киселина са известни като микроелементи. Микроелементите често се добавят към среди, които не включват серум, за да заместят тези, които обикновено присъстват в серума. Тези елементи са важни химични компоненти, които са необходими за здравословното развитие на клетките. Много биохимични реакции зависят от определени микроелементи, като например активността на ензимите.
Добавки към средата
Пълната среда за растеж, предложена за определени клетъчни линии, се нуждае от допълнителни компоненти, които отсъстват в изходната среда и серума. Тези хранителни добавки подпомагат клетъчния растеж и подходящата метаболитна функция.
Въпреки че хормоните, растежните фактори и сигналните молекули са от съществено значение за подходящото размножаване на определени клетъчни линии, винаги трябва да се вземат следните предпазни мерки: Тъй като добавянето на добавки може да промени осмолалитета на пълната среда за растеж, което може да потисне развитието на клетките, винаги е препоръчително да се проверява осмолалитетът след добавянето на добавки. За повечето клетъчни линии оптималният осмолалитет варира между 260 и 320 mOSM/kg.
Антибиотици
Антибиотиците често се използват за потискане на развитието на бактериални и гъбични замърсители [16], въпреки че те не са от съществено значение за клетъчния растеж. Тъй като антибиотиците могат да скрият замърсяване с микоплазма и резистентни бактерии, рутинната им употреба не се предлага за клетъчни култури [17, 18].
Освен това антибиотиците могат да нарушат метаболизма на свръхчувствителните клетки. Често се използват комбинациите от пеницилин и стрептомицин, произвеждани от MilliporeSigma и Life Technologies. Плазмоцинът е използван при култивирането на глиомни клетъчни линии TS603, TS516 и BT260 [19] и е доказано, че е ефективен за отстраняване на замърсяването с микоплазма (20).
Серум
В серума се съдържат албумини, растежни фактори и инхибитори на растежа. Серумът е един от най-значимите компоненти на средата за клетъчни култури, тъй като осигурява аминокиселини, протеини, витамини (особено мастноразтворими витамини като А, D, Е и К), въглехидрати, липиди, хормони, растежни фактори, минерали и микроелементи.
Серумът от ембрионални и телешки източници често се използва за насърчаване на развитието на култивираните клетки. Феталният серум е изобилен източник на растежни фактори и е подходящ за клониране на клетки и развитие на чувствителни клетки. Поради намалените си възможности за стимулиране на растежа телешкият серум се използва при експерименти за контактно инхибиране. Нормалните среди за растеж често включват от 2 до 10 % серум. Добавянето на серум към хранителната среда служи за следните цели [21]:
-
Серумът доставя основните хранителни вещества за клетките (както в разтвор, така и прикрепени към протеините).
-
Няколко растежни фактора и хормони, участващи в насърчаването на растежа и специализираната клетъчна активност, са включени в серума.
-
Той предлага много свързващи протеини, като албумин и трансферин, които пренасят други химикали в клетката. Например албуминът доставя мазнини, витамини, хормони и др. в клетките.
-
Той осигурява и протеини, като фибронектин, които увеличават адхезията на клетките към субстрата. Освен това произвежда разпръскващи се елементи, които подпомагат разширяването на клетките преди делене.
-
Той доставя инхибитори на протеазите, които предотвратяват протеолизата в клетките.
-
Съдържа и минерали като Na+, K+, Zn2+ и Fe2+.
-
Той повишава вискозитета на средата, като по този начин предпазва клетките от механично нараняване по време на разбъркването на суспензионните култури.
-
Той също така е буфер.
Препратки
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrition of animal cells in tissue culture; initial studies on a synthetic medium (Хранене на животински клетки в тъканни култури; първоначални изследвания на синтетична среда). Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapid adsorption of a foetal calf serum component by mammalian cells in culture (Бърза адсорбция на компонент от фетален телешки серум от клетки на бозайници в култура). Потенциален източник на артефакти при изследвания на антисеруми към клетъчно-специфични антигени. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Добавяне на серум към средата, използвана за приготвяне на клетъчни суспензии, като възможен източник на артефакти при клетъчно-медиирани реакции, изследвани чрез теста на поплитеалния лимфен възел. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Търговски среди без серум: растеж на хибридоми и производство на моноклонални антитела. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Methods for growth of cultured cells in serum-free medium (Методи за растеж на култивирани клетки в безсерумна среда). Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNA-free TDP-43 into anisotropic intranuclear liquid spherical shells. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-syndrome-induced senescence disrupts nuclear architecture of neural progenitors. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Пълно заместване на серума с албумин, трансферин и соев липид в култури от липополизахарид-реактивни В лимфоцити. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematic improvement of a chemically-defined protein-free medium for hybridoma growth and monoclonal antibody production (Системно подобряване на химически дефинирана среда без протеини за растеж на хибридоми и производство на моноклонални антитела). J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. A protein-free medium for the growth of hybridom and other cells of the immune system (Среда без белтъци за растеж на хибридоми и други клетки на имунната система). In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serum-free cell culture: a unifying approach (Безсерумна клетъчна култура: обединяващ подход). Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Clonal growth of chinese hamster cell lines in protein-free media (Клоналният растеж на клетъчни линии от китайски хамстер в безпротеинови среди). In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium (Анализ на цитотоксичните ефекти на HEPES-съдържаща хранителна среда, изложена на светлина). In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Development of serum free media (Разработване на безсерумни среди). In: Master JRW, редактор. Животински клетъчни култури, 3-то издание. Оксфорд: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Use of antibiotics in cell culture media (Използване на антибиотици в среди за клетъчни култури). Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Spread and control of mycoplasmal infection of cell cultures (Разпространение и контрол на микоплазмена инфекция на клетъчни култури). In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Changing medium and passaging cell lines (Смяна на средата и пасиране на клетъчни линии). Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histone demethylase KDM6A directly senses oxygen to control chromatin and cell fate. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Цитотехнология. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin (Молекулярни аспекти на свързването на лиганди със серумния албумин). Pharmacol Rev. 1981;33:17-53