Клетки P19 - Изследване на ембрионален карцином с използване на клетки P19
P19 е клетъчна линия на миши ембрионален карцином. Тя се използва широко в биомедицинските изследвания, главно за изучаване на биологията на развитието, биологията на стволовите клетки, клетъчната диференциация и скрининга на лекарства. Тъй като клетките P19 имат способност за диференциране, те могат да бъдат полезни при изследване на сложни биологични процеси, като например формиране на тъкани и ранно ембрионално развитие. В тази статия ще обсъдим основите на клетките P19, получени от мишки.
Общи характеристики и произход на клетките P19
Познаването на общите характеристики и произхода на дадена клетъчна линия е от съществено значение, преди да започнете работа с нея. В този раздел ще разгледаме следното: Какво представлява клетъчната линия P19? Какъв е размерът на клетката P19? Какъв е произходът на клетките P19?
- P19 е вид плурипотентни ембрионални карциномни клетки, първоначално получени от тератокарцином, развит в мишка C3H/He. Клетъчната линия е създадена за пръв път през 1982 г. от McBurney и Rogers.
- Клетките P19 могат да растат непрекъснато в среда за култивиране, допълнена със серум. Те могат да се диференцират в други клетъчни типове, когато са изложени на нетоксични лекарства като ретинолова киселина и диметилсулфоксид (DMSO) [1].
- Тези миши карциномни клетки притежават епителиална морфология.
- Клетъчната линия P19 има еуплоиден мъжки кариотип (n=40; XY).
Информация за култивирането на клетките P19
Клетъчната линия P19 е широко разпространена в изследователските лаборатории поради уникалните си характеристики. Култивирането ѝ е лесно и лесно за управление. В този раздел е спомената цялата ключова информация, която ви е необходима за поддържане и отглеждане на клетъчна култура P19. Ще знаем: Какво е времето за удвояване на клетките P19? Как се култивира клетъчна линия P19? Клетъчната линия P19 адхезивна ли е?
Ключови точки за култивиране на клетки P19
|
Време на удвояване: |
Времето за удвояване, отчетено за клетъчната линия P19, е приблизително 2 до 3 дни. |
|
Прилепнали или в суспензия: |
Клетъчната линия на ембрионален карцином P19 е адхезивна. |
|
Съотношение на субкултивиране: |
Клетките P19 трябва да се субкултивират на всеки 48 часа, като за тези клетки трябва да се поддържа съотношение на разделяне 1:10. Адхезивните клетки се промиват с 1 X фосфатен буферен физиологичен разтвор и се инкубират с Accutase, докато клетките се дисоциират. Клетките се добавят към хранителната среда и се събират чрез центрофугиране. Събраните клетки се ресуспендират внимателно и се разпределят в нови колби. |
|
Растежна среда: |
За култивиране на клетките P19 се използва среда DMEM/Ham's F12, съдържаща 5% фетален говежди серум, 3,1 g/L глюкоза, 1,6 mM L-глутамин, 1,0 mM натриев пируват, 15 mM HEPES и 1,2 g/L NaHCO3. |
|
Условия за растеж: |
За отглеждането и култивирането на клетъчната линия на ембрионалния карцином P19 е необходим овлажнен инкубатор при температура 37 °C и 5 % CO2. |
|
Съхранение: |
Замразените флакони с клетки P19 трябва да се съхраняват при температура под -150 °C във фризер или в парната фаза на течен азот, за да се запази жизнеспособността на клетките за по-дълго време. |
|
Процес на замразяване и среда: |
За замразяване на клетките P19 може да се използва среда CM-1 или CM-ACF, като се използва метод на бавно замразяване, който предпазва клетките от шок и запазва тяхната жизнеспособност. |
|
Процес на размразяване: |
Замразените клетки P19 могат да бъдат размразени на водна баня при 37 °C чрез бързо разбъркване на флакона в продължение на 40 до 60 секунди. Клетките се добавят с прясна среда и се центрофугират, за да се отстранят елементите на замразяващата среда. Клетъчната палитра отново се ресуспендира и клетките се изсипват в нова колба за растеж. |
|
Ниво на биологична безопасност: |
За клетъчната линия P19 са необходими лабораторни условия от ниво на биологична безопасност 1. |
Клетъчна линия P19: Предимства и недостатъци
В този раздел ще бъдат разгледани предимствата и недостатъците на клетъчната линия P19.
Предимства
- Потенциал за диференциация: Клетките P19 могат да се диференцират в различни клетъчни типове, включително кардиомиоцити, неврони и микроглиални клетки. За диференцирането им са необходими нетоксични лекарства, като например ретиноева киселина и диметилсулфоксид (DMSO). Ретиновата киселина предизвиква развитието на неврони, микроглия и астроглия, докато DMSO инициира развитието на биещи кардиомиоцити и гладкомускулни клетки. По този начин клетките P19 са полезни за изучаване на клетъчната диференциация и процесите на развитие
- Моделна система: Плурипотентната клетъчна линия на ембрионален карцином P19 е ценен модел за изучаване на ранното ембрионално развитие. Изследователите използват клетките P19, за да изяснят пътищата на клетъчните сигнали и клетъчните и молекулярните механизми, участващи в тези процеси
Недостатъци
- Произход от мишки: P19 е клетъчна линия на миши ембрионален карцином. Следователно резултатите от изследванията, в които се използват тези клетки, може да не се пренесат напълно в човешката биология и процеси
Изследователски приложения на клетките P19
Клетките P19 имат няколко изследователски приложения поради способността им за диференциране и значението им за биологията на развитието и изследванията на стволовите клетки. Някои от важните изследователски приложения на клетките от ембрионален карцином P19 включват:
- Изследвания на клетъчната диференциация: Както е известно, клетките P19 могат да се диференцират в неврони, микроглиални клетки, гладкомускулни клетки и кардиомиоцити; по този начин те се използват широко за изследване на процесите на клетъчна диференциация. Освен това те помагат за изследване на невронното и сърдечното развитие и на основните механизми. Проучване, проведено през 2018 г., установи, че реактивните кислородни видове (ROS) насочват диференциацията на клетките P19 в специфични клетъчни типове и предотвратяват индуцирането на други [3]. Друго проучване изследва процеса на невронна диференциация, медииран от ретиноевата киселина, и установява участието на сигналния път PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Биология на развитието: Клетките P19 са безценен модел за изучаване на ранното ембрионално развитие. Те помагат на изследователите да разберат сложните биологични процеси, като например формирането на тъкани по време на развитието на ембриона. В изследването са използвани клетки P19 и са проучени допринасящите молекулярни фактори за формирането на камерния септален дефект (КСД). Резултатите разкриват, че дългата некодираща РНК SNHG6 допринася за VSD чрез отрицателно регулиране на miRNA-101 и активиране на пътя Wnt/β-катенин [5].
- Тестване на лекарства: Клетъчната линия на ембрионален карцином на мишка P19 се използва и за скрининг на потенциални кандидати за лекарства. В едно проучване са използвани диференцирани клетъчни неврони P19 и са изследвани невропротективните ацетилхолинестеразни инхибиращи ефекти на синтетичен L-Dopa и воден екстракт от семена на Mucuna pruriens. Резултатите показват, че растителният екстракт показва обещаващи резултати в сравнение с L-Dopa [6].
Закупете вашата клетъчна линия P19 днес
Клетки P19: Научни публикации
В този раздел ще бъдат разгледани няколко интересни научни публикации за клетките P19.
Тази статия е публикувана в Oncology Reports през 2017 г. В проучването се предлага хипофизните полови хормони да управляват адхезията, пролиферацията и миграцията на тератокарциномни клетъчни линии, включително клетките P19.
Дългите некодиращи РНК uc. 4 влияе върху клетъчната диференциация чрез сигналния път TGF-beta
В тази публикация в списание Experimental & Molecular Medicine (2018 г.) са използвани клетки P19 и е изследвана функцията на дългата некодираща РНК uc.4. Резултатите разкриват, че uc.4 влияе върху клетъчната диференциация чрез модулиране на сигналния път TGF beta.
Тази научна статия е публикувана през 2018 г. в Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Проучването установява, че естественият екстракт от мозъчна тъкан и триизмерната клетъчна култура могат да ускорят диференциацията на ембрионалните карциномни клетки P19 в невронни клетки.
Това проучване е публикувано в Journal of Ethnopharmacology през 2020 г. В проучването се предлага, че екстрактът от листа на Cichorium intybus L. може да индуцира диференциация в ембрионални карциномни клетки P19 в инсулин-продуциращи β клетки на панкреаса.
Това изследване е публикувано в Molecules (2022). В това проучване са изследвани невропротективните и ацетилхолинестеразните инхибиращи ефекти на екстракт от семена на Mucuna pruriens върху клетъчни неврони P19.
Ресурси за клетъчната линия P19: Протоколи, видеоклипове и др
По-долу са изброени няколко ресурса за клетките P19.
- Протокол за невронна диференциация на клетки P19: Тази статия съдържа протокол за невронна диференциация на клетки P19 и друга полезна информация за диференциацията на клетки P19.
- Трансфекция на клетки P19: Този линк ще ви помогне да научите протокола за трансфекция на клетки P19.
Следващият линк съдържа протокола за култивиране на клетки P19.
- Клетки P19: Този уебсайт съдържа цялата полезна информация за клетъчната линия P19, включително условията за нейното култивиране, клетъчните среди P19, разделянето на клетките и много други.
Изследване на клетъчната линия P19: Често задавани въпроси
Препратки
- McBurney, M.W., Ембрионални карциномни клетки P19. Int J Dev Biol, 1993 г. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 Embryonal Carcinoma Cell Line (Клетъчна линия за ембрионален карцином P19): A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: стр. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey, and G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells (Митохондриалните ROS направляват диференциацията на миши плурипотентни клетки P19). Stem Cell Research, 2018 г. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinoid acid induces the differentiation of P19 cells into neurons involved in the PI3K/Akt/GSK3β signaling pathway. Списание за клетъчна биохимия, 2020 г. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al. дълги некодиращи РНК SNHG6 допринасят за формирането на камерни септални дефекти чрез отрицателна регулация на miR-101 и активиране на пътя Wnt/β-катенин. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens seed aqueous extract improved neuroprotective and acetylcholinesterase inhibitory effects compared with synthetic L-dopa. Молекули, 2022 г. 27(10): p. 3131.