Клетки NCI-H1299: Изследвания и клинични последици от клетките на рак на белия дроб NCI-H1299
NCI-H1299 е имортализирана човешка клетъчна линия за недребноклетъчен рак на белия дроб, широко използвана в имунната онкология, рака и изследванията за откриване на лекарства. Освен това изследователите използват тези клетки за изследване на чувствителността към лекарства, основните сигнални пътища и молекулярни механизми, свързани с рака на белия дроб. Освен това тези клетки се използват за изследване на вирусни инфекции, като SARS-CoV-2.
Общи характеристики и произход на клетките NCI-H1299
Първото нещо, което трябва да знаете за дадена клетъчна линия, е нейният произход и общи характеристики, тъй като те ви помагат да измислите използването ѝ във вашите изследвания. Този раздел от статията ще ви помогне да научите някои важни сведения за произхода и характеристиките на NCI-H1299. Например, какво представляват клетките за рак на белия дроб NCI-H1299? Какъв тип клетка е NCI-H1299? Какъв е размерът на клетките NCI-H1299? Каква е разликата между A549 и NCI-H1299?
- Клетъчната линия NCI-H1299 произхожда от метастаза в лимфен възел на белия дроб на 43-годишен кавказки пациент с рак.
- Тези клетки притежават хомозиготна частична делеция на гена p53; по този начин те не експресират протеина p53. Липсата на експресия на белтъка p53 в NCI-H1299 допринася за пролиферативната тенденция на клетките на белодробен рак H1299.
- Освен p53, за тези имортализирани клетки се съобщава, че имат NCI-H1299 KRAS мутация, която е отговорна за техните свойства на растеж, пролиферация, миграция и инвазия.
- Кариотипът на NCI-H1299 е почти диплоиден.
- Клетките NCI-H1299 имат морфология, подобна на тази на епителните клетки.
- Тези клетки са сплескани и имат дебелина под 5 µm.
NCI-H1299 и A549
NCI-H1299 и A549 са клетъчни линии за недребен рак на белия дроб. Клетките NCI-H1299 са по-агресивни и чувствителни в сравнение с A549. И двете имат сравнително сходни мутации, като например KRAS. За разлика от клетките NCI-H1299 обаче клетките A549 експресират гена P53.
Информация за култивиране
Поддържането на култура на клетъчна линия не е лесно, докато не се запознаете с цялата ключова информация за нея, включително: Какво е времето за удвояване на NCI-H1299? Каква е гъстотата на засяване на NCI-H1299? Каква е клетъчната среда на NCI-H1299? Как се култивират клетъчни линии NCI-H1299? Този раздел ще ви помогне да научите отговорите на всички тези въпроси относно култивирането на клетки NCI-H1299.
Ключови моменти при култивирането на клетки NCI-H1299
|
Време за удвояване: |
Времето за удвояване на NCI-H1299 варира между 22 и 30 часа. |
|
Прилепнали или в суспензия: |
NCI-H1299 е адхезивна клетъчна линия. |
|
Съотношение на субкултивиране: |
Клетките NCI-H1299 се субкултивират в препоръчително съотношение от 1:3 до 1:6. За посявка адхезивните клетки се промиват с 1x PBS и се инкубират с разтвор за пасиране Accutase за 8 до 10 минути при стайна температура. Отделените клетки се добавят с прясна хранителна среда и се центрофугират. След това клетъчната пелета се ресуспендира и клетките се изсипват в нови колби, съдържащи среда за растеж. |
|
Растежна среда: |
RPM1 1640 е идеалната клетъчна среда за NCI-H1299. Тя е допълнена с 10% фетален говежди серум, 4500 mg/L глюкоза, 2,0 mM L-глутамин, 1 mM натриев пируват, 1500 mg/L NaHCO3 и 10 mM HEPES. Средата трябва да се подновява на всеки 2 до 3 пъти седмично. |
|
Условия за растеж: |
Клетъчните култури от рак на белия дроб NCI-H1299 се поддържат в овлажнен инкубатор при 37 °C с 5 % CO2. |
|
Съхранение: |
Клетъчната линия NCI-H1299 може да се съхранява дългосрочно в парната фаза на течен азот или в ултранискотемпературни фризери при температура под -150 °C. |
|
Процес на замразяване и среда: |
CM-1 или CM-ACF са средите за замразяване на клетки NCI-H1299. Клетките се замразяват чрез бавен процес на замразяване, който позволява намаляване на температурата само с 1 градус в минута, за да се защити жизнеспособността на клетките. |
|
Процес на размразяване: |
Замразените клетки NCI-H1299 се разбъркват бързо в предварително загрята водна баня при 37 градуса по Целзий за 40 до 60 секунди, докато остане малко парче лед. Размразените клетки се добавят с прясна среда и могат да се култивират директно в нови колби или да се центрофугират. В първия случай средата трябва да се замени след 24 часа инкубация. Центрофугирането помага за отстраняване на замръзващите елементи на средата. След това събраните клетки се ресуспендират в прясна среда и се разпределят в нова колба за култивиране. |
|
Ниво на биологична безопасност: |
За работа с клетъчната култура NCI-H1299 се изисква лаборатория с ниво на биологична безопасност 1. |
Закупуване на клетъчна линия NCI-H1299: висококачествени изследователски инструменти за изследване на биологията на рака на белия дроб
Предимства и недостатъци на клетките NCI-H1299
Подобно на други човешки ракови клетъчни линии, NCI-H1299 също притежава някои отличителни характеристики, свързани със специфични предимства и недостатъци. Тук сме обобщили няколко важни от тях.
Предимства
Основните предимства на клетъчната линия за недребноклетъчен рак на белия дроб NCI-H1299 са:
-
Ин витро модел на рак на белия дроб
Клетъчните линии NCI-H1299 са разработени от метастази в лимфните възли на белодробен карцином и по този начин притежават относително сходни свойства. Поради това тези клетки могат да служат като in vitro модел за изследване на биологията на рака на белия дроб, клетъчните и молекулярните механизми, както и за скрининг и изпитване на потенциални терапевтични средства.
-
Лесни за култивиране
Клетките NCI-H1299 са лесни за култивиране и поддържане в изследователска лаборатория. Не съществуват сложни изисквания и процедури за култивиране на клетки.
-
NCI-H1299 P53 и NCI-H1299 KRAS мутация
В клетките NCI-H1299 липсва експресия на гена p53, което позволява на клетките да се размножават интензивно. Освен това те притежават мутация KRAS, която допринася за клетъчния растеж, пролиферация, инвазия и миграция. Предвид това изследователите използват клетките H1299 за изследване на молекулярните механизми, свързани с мутациите KRAS и P53.
Недостатъци
Недостатъците на клетките NCI-H1299 са:
-
Тъканна специфичност
NCI-H1299 произхождат от белодробна тъкан. Поради това нейната приложимост е ограничена главно до изследвания на белодробен карцином. Възможно е да не представя напълно хетерогенността и общите характеристики на други видове рак.
Изследователски приложения на клетките NCI-H1299
Клетъчната линия NCI-H1299 се използва широко в изследванията на рака на белия дроб. Тук са посочени няколко обещаващи приложения на тази клетъчна линия.
- Ракова биология: Клетките NCI-H1299 служат като чудесен изследователски инструмент за проучване на развитието на рака, прогресията му и свързаните с него клетъчни и молекулярни механизми. Тези клетки са снабдени с определени мутации, което позволява на изследователите да изследват свързаното с тях поведение на раковите клетки, сигналните пътища и профилите на генната експресия. Няколко проучвания са използвали клетъчната линия за недребноклетъчен белодробен карцином NCI-H1299 за изследване на биологията на рака на белия дроб. Например в проучване, проведено през 2018 г., е изследван сигналният път, участващ в апоптозата на белодробни ракови клетки, като са използвани клетки NCI-H1299. Изследователите са установили, че пътят PI3K/AKT допринася за клетъчната пролиферация, а инхибирането му може да доведе до смърт на раковите клетки [1]. По подобен начин в друго изследване са изследвани механизмите, участващи в епително-мезенхимния преход (ЕМТ) на NCI-H1299. В това проучване се предлага, че извънклетъчният протеин SPARC (секретиран кисел и богат на цистеин протеин) допринася за EMT и миграцията на NCI-H1299, като по този начин насърчава туморогенезата в клетките - протеинът SPARC действа като медиатор на сигнализацията на TGF-β1 [2].
- Откриване и скрининг на лекарства: NCI-H1299, човешка клетъчна линия за рак на белия дроб, се използва широко за оценка на токсичността и ефикасността на потенциални лекарства. Освен това тя се използва от изследователите за проучване на механизма на действие на противотуморни лекарства. Проучванията използват тези клетки и за идентифициране на възможни лекарствени цели и механизми на резистентност. Например в изследванията, проведени от Xiao-Yun Shen и колегите му, е проучен противораковият потенциал на естественото съединение бруцеин D (BD). Резултатите разкриват, че BD значително възпрепятства пролиферацията, инвазията и миграцията на клетките NCI-H1299. Следователно той може да се счита за потенциална адювантна терапия за лечение на недребноклетъчен белодробен карцином [3]. По подобен начин едно проучване оценява цитотоксичните ефекти на ксантохумол самостоятелно и в комбинация с химиотерапевтичното лекарство цисплатин върху клетките на белодробен карцином NCI-H1299 [4].
Научни публикации с участието на клетки NCI-H1299
Някои важни и най-цитирани научни публикации за клетъчната линия за белодробен карцином NCI-H1299 са тук.
Тази статия е публикувана в списание Human and Experimental Toxicology (2021 г.). В проучването се предлага индол-3-карбинолът да индуцира апоптоза в H1299 чрез повишаване на нивата на реактивните кислородни видове (ROS).
Това изследване е публикувано през 2018 г. в списание Cellular Physiology and Biochemistry. Резултатите от изследването разкриват, че комбинацията от кофеинова киселина и паклитаксел оказва синергичен противораков ефект при клетъчна линия на недребноклетъчен рак на белия дроб NCI-H1299.
Тази научна статия е публикувана в Molecular Medicine Reports (2018). В проучването е оценен антитуморният ефект на тубеймозид-1, тритерпеноиден сапонин, и основните механизми при клетъчната линия NCI-H1299.
В тази статия, публикувана в Journal of Cancer (2020 г.), се предлага пристимеринът, природно съединение, да потиска пролиферацията и миграцията на клетките NCI-H1299.
Механизъм на регулиране на гена VIPR1 в клетките на човешкия белодробен аденокарцином H1299
Това проучване в Medical Oncology (2019) изследва потенциалните ефекти на свръхекспресията на VIPR1 гена върху клетъчната линия на аденокарцинома NCI-H1299.
Ресурси за клетъчната линия NCI-H1299: Х12Н: протоколи, видеоклипове и други
Ето някои онлайн ресурси, включващи клетките NCI-H1299.
- Трансфекция на NCI-H1299: Този видеоклип обяснява протокола за преходна трансфекция за клетъчни линии NCI-H1299.
- Субкултивиране на адхерентна клетъчна линия: Това видео ще ви помогне да научите общата процедура за субкултивиране на адхерентна клетъчна линия.
Следната връзка съдържа информация за клетъчни култури за клетките NCI-H1299.
- Клетъчна линия NCI-H1299: Този линк може да ви помогне да се запознаете с протокола за пасиране и трансфекция на клетки NCI-H1299.
Често задавани въпроси относно клетъчната линия NCI-H1299
Препратки
- Gu, J., и др., Изследване на апоптозата, предизвикана от EGCG, в клетките на белодробния рак чрез инхибиране на сигналния път PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018 г. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC действа като медиатор на TGF-β1 при насърчаване на епително-мезенхимния преход в клетките на белодробен рак A549 и H1299. Biofactors, 2018 г. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., A study on the mechanism of bruceine D in the treatment of non-small cell lung cancer H1299 cells (Проучване на механизма на бруцеин D при лечение на недребноклетъчен рак на белия дроб H1299 ). World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020 г. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoxic Effects of Xanthohumol and Its Combination with Cisplatin on Human Metastatic Lung Cancer H1299 Cells (Цитотоксични ефекти на ксантохумол и комбинацията му с цисплатин върху човешки метастатичен рак на белия дроб H1299 клетки). Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019 г. 30(9): p. 1-15.