خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
٨٠٠٫٠٠ €*
يتم شحن المنتجات مجمدة على ثلج جاف في أنابيب تبريد. يحتوي كل أنبوب تبريد عادةً على 3 × 10 6 خلايا للخطوط الملتصقة أو 5 × 106 خلايا للخطوط المعلقة (يرجى الرجوع إلى شهادة تحليل الدفعة للحصول على التفاصيل).
معلومات عامة
| الوصف | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 هو خط خلايا سرطانية عظمية بشرية معدلة جينومياً مشتقة من خلايا U2OS تم تعديل الجين SEH1L (SEH1) الداخلي فيها باستخدام تقنية CRISPR/Cas9 لترميز علامة SNAPf داخل الإطار. SEH1 هو أحد مكونات المركب Y (المعروف أيضًا باسم مركب NUP107-160)، وهو وحدة هيكلية أساسية لمركب المسام النووية (NPC) التي تساهم في تجميع واستقرار هيكل المسام. من خلال إدخال تسلسل ترميز SNAPf في الموقع الداخلي، يتم التعبير عن البروتين SEH1 الموسوم تحت التحكم التنظيمي الأصلي، مما يحافظ على مستويات التعبير الفسيولوجي ويقلل من الاضطرابات في تكوين المسام النووية. علامة SNAPf هي متغير هندسي سريع التفاعل من علامة SNAP يرتبط تساهميًا بركائز مترافقة مع البنزيلجوانين، مما يسمح بوضع علامات فلورية انتقائية ومستقرة في الخلايا الحية أو الثابتة. في خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1، يتركز البروتين المدمج في الغلاف النووي في نمط نقطي مميز لتوزيع NPC. نظرًا لأن التوسيم يحدث على مستويات البروتينات الداخلية، فإن هذا النظام مناسب تمامًا للمجهر الفلوري الكمي والتصوير فائق الدقة وتحليلات تتبع الجسيمات الفردية التي تهدف إلى تحليل تنظيم NPC والتوازن الكيميائي. تساعد الشكل المسطح والنوى الكبيرة لخلايا U2OS على تسهيل الرؤية عالية الدقة لهياكل الغلاف النووي. يشارك SEH1 في تكوين NPC، كما أنه متورط في العمليات المرتبطة بالكينتوكور أثناء الانقسام. وبناءً على ذلك، يوفر هذا الخط الخلوي منصة قوية لدراسة تجميع وتفكيك NPC المعتمد على دورة الخلية، والتنظيم المكاني لمركب Y داخل هيكل المسام، والأدوار المزدوجة المحتملة لـ SEH1 في الغلاف النووي والكينتوكور الانقسامي. يتيح U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 إجراء دراسات آلية لهيكل المسام النووية وديناميكياتها في ظل ظروف التعبير ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية. |
|---|---|
| كائن حي | الإنسان |
| الأنسجة | العظام |
| المرض | الساركوما العظمية العظمية |
الخصائص
| العمر | 15 سنة |
|---|---|
| الجنس | أنثى |
| العرق | قوقازي |
| علم الصرف | شبيه بالظهارة |
| خصائص النمو | ملتزم |
البيانات التنظيمية
| اقتباس | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (كتالوج سيتيون رقم 300664) |
|---|---|
| مستوى السلامة البيولوجية | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| المودع | مختبر إلينبرغ (EMBL) |
| حالة الكائنات المعدلة وراثيًا | GMO-S1: يحتوي سلالة خلايا الساركوما العظمية البشرية (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) على اندماج SNAPf-SEH1 بوساطة CRISPR الذي يسمح بوضع علامات انتقائية على نيوكليوبورين SEH1. التعديل موجود بثبات. ينطبق هذا التصنيف داخل ألمانيا فقط وقد يختلف في أماكن أخرى. |
البيانات الجزيئية الحيوية
| التعبير البروتيني | SEH1, SNAPF-tag |
|---|
المناولة
| الوسط الثقافي | مكويز 5 أ، ث: 3.0 جم/لتر جلوكوز، ث: جلوتامين مستقر، ث: 2.0 ملي مولار بيروفات الصوديوم، ث: 2.2 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820200 أ) |
|---|---|
| المكملات الغذائية | أضف إلى الوسط 10٪ FBS، و3.0 جم/لتر جلوكوز، وغلوتامين مستقر، و2.0 ملي مولار من بيروفات الصوديوم، و2.2 جم/لتر NaHCO3، و1٪ NEAA |
| كاشف التفكك | أكوتاس |
| الاستزراع الفرعي | قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد. |
| وسيط التجميد | كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد. |
| إذابة الخلايا وزراعتها |
|
| أجواء الاحتضان | 37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب. |
| طلاء القارورة | للحصول على التعلق الأمثل والصلاحية المثلى بعد الذوبان، نوصي باستخدام قوارير أو أطباق مغطاة بالكولاجين. |
| إجراء التجميد | يتم شحن سلالات الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب. |
| شروط الشحن | يتم شحن سلالات الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب. |
| ظروف التخزين | للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في مرحلة البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل. |
مراقبة الجودة / الملف الوراثي / HLA
| العقم | يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على الإنارة. ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي. |
|---|