خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

‏٨٠٠٫٠٠ €*

يتم شحن المنتجات مجمدة على ثلج جاف في أنابيب تبريد. يحتوي كل أنبوب تبريد عادةً على 3 × 10 ⁶ خلايا للخطوط الملتصقة أو 5 × 10⁶ خلايا للخطوط المعلقة (يرجى الرجوع إلى شهادة تحليل الدفعة للحصول على التفاصيل).

الأسعار لا تشمل الضرائب بالإضافة إلى تكاليف الشحن

cryovial

رقم المنتج: 300666

صحيفة بيانات السلامة

ورقة المنتج

شهادة التحليل (CoA)

اتفاقية الطرف الثالث

الوصف	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 هو خط خلايا سرطانية عظمية بشرية معدلة وراثيًا مشتق من خلفية U2OS الأصلية، حيث تم تعديل موضع NUP133 الداخلي باستخدام تحرير الجينوم بواسطة CRISPR/Cas9 لترميز علامة SNAPf الطرفية C. NUP133 هو مكون أساسي في مركب Y (مركب NUP107-160)، وهو مركب فرعي هيكلي ضروري لتجميع مركب المسام النووية (NPC) وصيانته. من خلال إدخال تسلسل ترميز SNAPf في الإطار في الموقع الداخلي، يتم التعبير عن البروتين المدمج تحت التحكم التنظيمي الأصلي، مما يحافظ على مستويات التعبير الفسيولوجي والتوطين تحت الخلوي. علامة SNAPf هي متغير سريع التسمية لعلامة SNAP، وهو O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase مهندس يتفاعل تساهميًا مع ركائز مقترنة بالبنزيلغوانين. وهذا يتيح تسمية فلورية عالية التحديد ومتعددة الاستخدامات لـ Nup133 في الخلايا الحية أو الثابتة باستخدام ركائز SNAP قابلة للنفاذ أو غير قابلة للنفاذ. في خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133، يتوطّن البروتين المدمج في الغلاف النووي بنمط نقطي مميز لمجمعات المسام النووية. ونظرًا لأن التوسيم يحدث في الموقع الداخلي، فإن التوازن الكيميائي والبنية الهندسية لمجمعات المسام النووية تتأثران بشكل طفيف، مما يجعل هذا النموذج مناسبًا للمجهر الكمي فائق الدقة، وتتبع الجزيء الواحد، والتحليلات الحركية لتجميع مجمعات المسام النووية وتجددها. يوفر هذا الخط الخلوي منصة قوية لدراسة النقل النووي، وديناميكيات النقل النووي-السيتوبلازمي، وتكوين NPC خلال الطور البيني وإعادة التجميع النووي بعد الانقسام، والتنظيم الهيكلي لمركب Y داخل هيكل المسام. توفر خلفية U2OS شكلًا مسطحًا ونوى كبيرة، مما يسهل التصوير عالي الدقة. تعد خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 مناسبة بشكل خاص لتجارب وضع العلامات باستخدام تقنية pulse-chase، والمجهر الضوئي والإلكتروني الترابطي، وأساليب التصوير متعدد الألوان بالاقتران مع نوكليوبورينات أو عوامل نقل إضافية موصومة داخليًا.
كائن حي	الإنسان
الأنسجة	العظام
المرض	الساركوما العظمية العظمية

العمر	15 سنة
الجنس	أنثى
العرق	قوقازي
علم الصرف	شبيه بالظهارة
خصائص النمو	ملتزم

اقتباس	U2OS-CRISPR-SNAPF-Nup133 (كتالوج سيتيون رقم 300666)
مستوى السلامة البيولوجية	1
NCBI_TaxID	9606
المودع	مختبر إلينبرغ (EMBL)
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا	GMO-S1: يحتوي هذا الخط الخلوي للساركوما العظمية البشرية (U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133) على اندماج SNAPf-Nup133 المُدخَل بواسطة CRISPR، مما يتيح وضع علامات فلورية على نيوكليوبورين Nup133. الإدخال موجود بثبات. ينطبق هذا التصنيف داخل ألمانيا فقط وقد يختلف في أماكن أخرى.

التعبير البروتيني	Nup133، SNAPf-tagag

الوسط الثقافي	مكويز 5 أ، ث: 3.0 جم/لتر جلوكوز، ث: جلوتامين مستقر، ث: 2.0 ملي مولار بيروفات الصوديوم، ث: 2.2 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820200 أ)
المكملات الغذائية	أضف إلى الوسط 10٪ FBS، و3.0 جم/لتر جلوكوز، وغلوتامين مستقر، و2.0 ملي مولار من بيروفات الصوديوم، و2.2 جم/لتر NaHCO3، و1٪ NEAA
كاشف التفكك	أكوتاس
الاستزراع الفرعي	قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
وسيط التجميد	كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
إذابة الخلايا وزراعتها	تأكد من بقاء القارورة مجمدة بعمق عند التسليم، حيث يتم شحن الخلايا على ثلج جاف للحفاظ على درجات الحرارة المثلى أثناء النقل. عند الاستلام، إما تخزين القارورة المبردة على الفور في درجة حرارة أقل من -150 درجة مئوية لضمان الحفاظ على سلامة الخلايا، أو الانتقال إلى الخطوة 3 إذا كانت الزراعة الفورية مطلوبة. للاستزراع الفوري، قم بإذابة القارورة بسرعة عن طريق غمرها في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية بماء نظيف وعامل مضاد للميكروبات، مع التحريك برفق لمدة 40-60 ثانية حتى تبقى كتلة ثلج صغيرة. إجراء جميع الخطوات اللاحقة في ظروف معقمة في غطاء تدفق، مع تطهير القارورة المبردة بنسبة 70% من الإيثانول قبل فتحها. افتح القارورة المعقمة بعناية وانقل معلق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل يحتوي على 8 مل من وسط المستنبت بدرجة حرارة الغرفة مع الخلط برفق. اطرد الخليط بالطرد المركزي عند 300 × جم لمدة 3 دقائق لفصل الخلايا وتخلص بعناية من المادة الطافية التي تحتوي على وسط التجميد المتبقي. يُعاد ترسيب كريات الخلية برفق في 10 مل من وسط مزرعة جديد. بالنسبة للخلايا الملتصقة، قم بتقسيم المعلق بين قارورتي مزرعة T25؛ أما بالنسبة لمزارع التعليق، انقل كل الوسط إلى قارورة T25 واحدة لتعزيز تفاعل الخلايا ونموها بشكل فعال. الالتزام ببروتوكولات الاستزراع الفرعي المعمول بها لاستمرار نمو خط الخلية والحفاظ عليه، مما يضمن نتائج تجريبية موثوقة.
أجواء الاحتضان	37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.
طلاء القارورة	للحصول على التعلق الأمثل والصلاحية المثلى بعد الذوبان، نوصي باستخدام قوارير أو أطباق مغطاة بالكولاجين.
إجراء التجميد	يتم شحن سلالات الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.
شروط الشحن	يتم شحن سلالات الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.
ظروف التخزين	للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في مرحلة البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

العقم	يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على الإنارة. ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

رقم القطعة	نوع الشهادة	التاريخ	رقم الكتالوج
300666-101225	شهادة التحليل	22. Jan. 2026	300666

يُرجى ملاحظة أن هذا الخط الخلوي غير متاح بموجب اتفاقية سايتون MTA القياسية، حيث يتطلب اتفاقية طرف ثالث و/أو يخضع للتفاوض مع المرخص الأصلي.

خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

معلومات عامة

الخصائص

البيانات التنظيمية

البيانات الجزيئية الحيوية

المناولة

مراقبة الجودة / الملف الوراثي / HLA

شهادة التحليل (CoA)

اتفاقية الطرف الثالث