B16 細胞——腫瘤學研究中 B16 黑色素瘤細胞的基礎指南
B16 是一種源自小鼠的皮膚癌（黑色素瘤）細胞系。此細胞系是研究人類皮膚癌的有效體外模型，常被用於探究實體腫瘤的形成及癌細胞的轉移。
- 培養基
- B16 細胞在含有 10% 胎牛血清（FBS）的 EMEM（Eagle 最小必需培養基）中培養。培養基應每週更換 2-3 次。
- 倍增時間
- B16 細胞的平均細胞數倍增時間估計為 24 小時。
- 生長型態
- B16 細胞為貼壁細胞，並以單層形式生長。
- 生物安全等級
- BSL-1
- 可向以下機構取得
- Cytion — 訂購 B16
本文將協助您了解 B16 黑色素瘤細胞系的基本知識。具體而言，內容將涵蓋以下幾點：
B16 細胞系的一般特性與來源
本文此部分將介紹 B16 黑色素瘤細胞系的特徵。您將在此找到以下常見問題的解答，例如：什麼是 B16 癌細胞系？B16 細胞源自何處？B16 細胞的大小為何？
- B16 細胞系建立於 1954 年。這些細胞源自緬因州傑克遜實驗室（Jackson Laboratories）中，皮膚自發性出現腫瘤的 C57BL/6J 小鼠。
- 這些是具有黑色素生成能力的上皮細胞，能夠轉移至脾臟、肝臟和肺部。
- B16黑色素瘤細胞以單層形式生長，並呈現上皮樣及紡錘形的細胞形態。
- B16細胞系的大小約為15.4微米。
- B16 細胞有幾個明顯的亞克隆，包括 B16GMCSF、B164A5、B16FLT3 和 B16F10。這些亞系與親代 B16 細胞不同，並保留了一些特定特徵。 例如，它們在形態、細胞大小及其他特性上均有所不同。B16F10 具有較高的肺轉移能力，而相較於 B16F10、B16-GMCSF 及 B16FLT3，B164A5 則是最具侵襲性的皮膚癌細胞系 [1]。
B16 細胞系的培養資訊
在維護或培養細胞系之前，您可能會想了解有關倍增時間、細胞類型、生長培養基、培養條件等關鍵資訊。本節包含培養 B16 細胞所需的所有必要資訊。
B16 細胞培養要點
細胞倍增時間：
B16 細胞的平均細胞倍增時間估計為 24 小時。
貼壁或懸浮培養：
B16 細胞為貼壁型，並以單層形式生長。
接種密度：
建議 B16 細胞的接種密度為 1 至 2 × 10⁴ 細胞/cm²。將附著的 B16 細胞以 1×PBS 沖洗，並使用 Accutase 溶液使其從表面剝離。將細胞離心後，將細胞沉澱物重新懸浮於生長培養基中。 隨後將這些細胞分裝至新的培養瓶中進行培養。
培養基：
B16 細胞應於含 10% 胎牛血清（FBS）的 EMEM（Eagle's Minimum Essential Medium）培養基中培養。培養基應每週更換 2 至 3 次。
培養條件：
B16細胞系的培養需使用配備5% CO₂供應及37 °C溫度的加濕培養箱。
儲存：
為維持細胞存活率，這些細胞應儲存於低於 -150 °C 的溫度下，或置於液態氮的氣相中。
冷凍程序與培養基：
採用 CM-1 或 CM-ACF 冷凍培養基，並以緩慢冷凍法冷凍 B16 細胞。
解凍程序：
冷凍的 B16 細胞需置於含有抗菌劑的水浴中，於 37 °C 進行解凍。解凍後的細胞可直接分注至含有生長培養基的培養瓶中進行培養。此外，亦可將這些細胞離心以去除冷凍培養基成分，再於新的培養基中進行培養。
生物安全等級：
B16 細胞株應於生物安全等級一的實驗室中進行操作或維護。
B16 細胞系：優點與缺點
與其他細胞系一樣，B16 兼具獨特的優點與缺點。本節將列出此黑色素瘤細胞系的一些顯著優點與缺點。
優點
憑藉其獨特優勢，B16 成為首個廣泛應用於轉移研究且成效顯著的小鼠模型。此皮膚癌細胞系的部分優點包括：
易於培養
B16 細胞系在研究實驗室中容易培養，廣泛應用於研究癌細胞生物學、訊號傳導路徑等領域。
生長迅速
B16 黑色素瘤細胞系具有高增殖率，使其適合用於研究細胞分裂與生長過程。
致瘤性
B16 是一種具致瘤性的細胞系，具備侵襲、遷移及增殖等類似腫瘤的特性，對於研究腫瘤的形成、進展及轉移具有重要價值。
缺點
B16 細胞系相關的缺點包括：
缺乏與人類相關性
由於 B16 屬於小鼠黑色素瘤細胞系，可能無法準確反映人類皮膚癌的生物學特性，從而限制了研究成果的臨床轉化性。
異質性
B16 細胞具有異質性，在同一培養系統中會呈現多樣的遺傳與表型特徵。這可能影響實驗結果的可靠性與可重複性。
B16 細胞的應用
B16 細胞系在研究中被廣泛應用。該細胞系的一些有前景的應用包括：
- 腫瘤生物學：此小鼠皮膚癌細胞系具有致瘤性，廣泛用於探究腫瘤生物學。 已有數項研究利用 B16 細胞，探討腫瘤細胞生長、增殖及轉移背後的細胞機制。一項於 2020 年進行的研究，利用 B16 細胞探究長非編碼 RNA（LncRNA MEG3）在黑色素瘤形成、生長及轉移中的作用。 該研究發現，這種非編碼RNA會透過調控miRNA-21/E-Cadherin軸來刺激上述細胞事件[2]。同樣地，亦有研究利用B16細胞探討Notch1訊號傳導在腫瘤誘導性免疫抑制中的潛在作用[3]。
- 藥物開發：B16 細胞被用於驗證及測試候選藥物的潛在治療效果。 一項研究利用 B16 細胞系評估了天然化合物「新甘博酸」的抗腫瘤效果。研究結果顯示，該化合物透過調控 PI3K/Akt/mTOR 訊號傳導路徑，促使癌細胞凋亡 [4]。 另一項研究則利用 B16 細胞系，探討皂苷「人參皂苷 Rg3」對黑色素瘤的抗腫瘤效果。該研究提出，這種天然化合物是透過下調 ERK 和 Akt 途徑來發揮抗腫瘤活性的 [5]。
5. 以 B16 細胞為主題的研究論文
以下是一些以 B16 黑色素瘤細胞系為主題的重要研究論文。
長非編碼RNA MEG3 透過調控 miR-21/E-cadherin 軸，促進黑色素瘤的生長、轉移與形成
這篇發表於《Cancer Cell International》期刊（2020年）的論文提出，長非編碼RNA MEG3 透過調控 miR-21/E-Cadherin 軸，促進 B16 黑色素瘤細胞的形成、生長與轉移。
一種新型補骨脂素衍生物——MPFC 透過活化 B16 細胞中的 p38 MAPK 與 PKA 訊號傳導路徑，促進黑色素生成
這篇論文於2018年發表於《國際分子醫學期刊》（International Journal of Molecular Medicine）。本研究探討了補骨脂素衍生物——4-甲基-6-苯基-2H-呋喃[3,2-g]吡喃-2-酮（MPFC）在B16細胞中的黑色素生成作用及其作用機制。 研究提出，該衍生物是透過刺激 PKA 和 p38 MAPK 細胞訊號傳導來促進黑色素生成。
黑色素瘤細胞中的 Notch1 訊號傳導透過上調 TGF-β1 促進腫瘤誘導的免疫抑制
這項研究於 2018 年發表於《實驗與臨床癌症研究期刊》（Journal of Experimental & Clinical Cancer Research）。研究結果顯示，B16 細胞中 Notch1 訊號傳導的活化，可能會透過上調 TGF-β1 基因的表達，從而抑制抗腫瘤免疫反應。
新甘博酸透過 PI3K/Akt/mTOR 訊號傳導路徑誘導黑色素瘤 B16 細胞凋亡
這項研究由吳春蘭及其同事於2020年進行，並發表於《波蘭生物化學雜誌》（Acta Biochimica Polonica）。研究指出，天然化合物新檀香酸可透過調控PI3K/Akt/mTOR訊號傳導級聯反應，促使B16黑色素瘤細胞凋亡。
一種具強效抗癌活性的銥（III）配合物，透過抑制AKT/mTOR通路在B16細胞中誘導凋亡與自噬
這篇研究論文於2018年發表於《歐洲醫藥化學期刊》（European Journal of Medicinal Chemistry）。在此研究中，研究人員利用B16黑色素瘤細胞，探討了一種名為銥（III）配合物的化合物所具有的抗癌活性。
阿蘭酮可誘導黑色素瘤 B16 和 A375 細胞發生細胞週期停滯與凋亡
本研究提出，植物生物活性物質「阿蘭通」具有抗癌潛力，因其能誘導 B16 和 A375 黑色素瘤細胞發生凋亡及細胞週期停滯。該論文於 2019 年發表於《生物分子》（Biomolecules）期刊。
B16 細胞系相關資源：操作手冊、影片及其他
目前關於 B16 細胞系的資源有限，其中解釋其培養與轉染操作手冊的內容亦不多。
- 黑色素瘤細胞培養：此影片提供了培養黑色素瘤細胞系的寶貴建議。
- 細胞系的傳代：此影片說明細胞系的一般傳代操作流程。
- B16F10 細胞系的轉染：此影片說明 B16 黑色素瘤細胞亞系的轉染操作流程，可協助您優化 B16 細胞的轉染流程。
以下是針對 B16 細胞的一些細胞培養操作流程。
- B16 細胞培養：本網站包含培養 B16 細胞所需的所有必要資訊，包括生長培養基、傳代、解凍及冷凍細胞等。
參考文獻
- Danciu, C. 等，四種不同 B16 小鼠黑色素瘤細胞亞系的行為：C57 BL/6J 皮膚。《國際實驗病理學雜誌》，2015 年，96(2)：第 73-80 頁。
- Wu, L. 等，長鏈非編碼RNA MEG3 透過調控 miR-21/E-cadherin 軸促進黑色素瘤的生長、轉移與腫瘤形成。《國際癌症細胞期刊》，2020，20：第 1-14 頁。
- 楊，Z.等人，黑色素瘤細胞中的Notch1訊號傳導透過上調TGF-β1促進腫瘤誘導的免疫抑制。《實驗與臨床癌症研究期刊》，2018年，37(1)：第1-13頁。
- 吳，C.等人，新甘博酸透過PI3K/Akt/mTOR訊號傳導路徑誘導黑色素瘤B16細胞凋亡。《波蘭生物化學雜誌》，2020年，67(2)：第197-202頁。
- 孟，L.等人，人參皂苷Rg3透過下調ERK和Akt途徑在黑色素瘤中展現抗腫瘤活性。《國際腫瘤學雜誌》，2019年，54(6)：第2069-2079頁。