Клітини U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
800,00 EUR*
Продукти відправляються в замороженому вигляді на сухому льоді в кріопробірках. Кожна кріопробірка зазвичай містить 3 × 10 6 клітин для адгезивних ліній або 5 × 106 клітин для суспензійних ліній (детальніше див. сертифікат аналізу партії).
Загальна інформація
| Опис | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 — це лінія клітин остеосаркоми людини з редагованим геномом, отримана з клітин U2OS, в яких ендогенний ген SEH1L (SEH1) було модифіковано за допомогою технології CRISPR/Cas9 для кодування вбудованого тегу SNAPf. SEH1 є компонентом Y-комплексу (також відомого як комплекс NUP107-160), основного структурного модуля ядерного пористого комплексу (NPC), який сприяє збірці та стабільності пористої структури. Шляхом вставки кодуючої послідовності SNAPf в ендогенний локус, мічений білок SEH1 експресується під нативним регуляторним контролем, зберігаючи фізіологічні рівні експресії та мінімізуючи порушення складу ядерних пор. Мітка SNAPf — це інженерний, швидкодіючий варіант мітки SNAP, який ковалентно зв'язує субстрати, кон'юговані з бензилгуаніном, що дозволяє здійснювати селективне і стабільне флуоресцентне маркування в живих або фіксованих клітинах. У клітинах U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 фузійний білок локалізується в ядерній оболонці у вигляді крапчастих плям, характерних для розподілу NPC. Оскільки мічення відбувається на рівні ендогенних білків, ця система добре підходить для кількісної флуоресцентної мікроскопії, надвисокої роздільної здатності зображення та аналізу відстеження окремих частинок, спрямованих на розкладання організації та стехіометрії NPC. Плоска морфологія та великі ядра клітин U2OS ще більше полегшують візуалізацію структур ядерної оболонки з високою роздільною здатністю. SEH1 бере участь у біогенезі NPC, а також бере участь у процесах, пов'язаних з кінетохорами під час мітозу. Відповідно, ця клітинна лінія забезпечує надійну платформу для дослідження залежного від клітинного циклу складання та розкладання NPC, просторової організації Y-комплексу в пористій структурі та потенційної подвійної ролі SEH1 у ядерній оболонці та мітотичних кінетохорах. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 дозволяє проводити механістичні дослідження архітектури та динаміки ядерних пор у фізіологічно релевантних умовах експресії. |
|---|---|
| Організм | Людина |
| Тканина | Кость |
| Хвороба | Остеосаркома |
Характеристики
| Вік | 15 років |
|---|---|
| Стать | Жінка |
| Етнічна приналежність | Кавказець |
| Морфологія | Епітеліальноподібні |
| Ростові властивості | Адепт |
Нормативні дані
| Цитування | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (номер за каталогом Cytion 300664) |
|---|---|
| Рівень біобезпеки | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Вкладник | Лабораторія Елленберга (EMBL) |
| Статус ГМО | ГМО-S1: Ця лінія клітин остеосаркоми людини (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) містить злиття SNAPf-SEH1, опосередковане CRISPR, що дозволяє селективне мічення нуклеопорину SEH1. Модифікація стабільно присутня. Ця класифікація застосовується лише в Німеччині і може відрізнятися в інших країнах. |
Біомолекулярні дані
| Експресія білків | SEH1, SNAPf-тег |
|---|
Обробка
| Поживне середовище | McCoys 5a, w: 3,0 г/л Глюкоза, w: стабільна Глютамін, w: 2,0 мМ Піруват натрію, w: 2,2 г/л NaHCO3 (Cytion article number 820200a) |
|---|---|
| Додатки | Додайте до середовища 10% FBS, 3,0 г/л глюкози, стабільний глютамін, 2,0 мМ пірувату натрію, 2,2 г/л NaHCO3, 1% NEAA |
| Реагент для дисоціації | Аккутаза |
| Субкультура | Видаліть старе середовище з прилиплих клітин і промийте їх PBS, в якому бракує кальцію і магнію. Для колб T25 використовуйте 3-5 мл PBS, а для колб T75 - 5-10 мл. Потім повністю покрийте клітини аккутазою, використовуючи 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75. Залиште клітини інкубуватися при кімнатній температурі протягом 8-10 хвилин, щоб відокремити їх. Після інкубації обережно змішайте клітини з 10 мл середовища, щоб ресуспендувати їх, а потім центрифугуйте при 300xg протягом 3 хвилин. Викиньте надосадову рідину, ресуспендуйте клітини у свіжому середовищі та перенесіть їх у нові колби, які вже містять свіже середовище. |
| Заморожуюче середовище | Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу. |
| Розморожування та культивування клітин |
|
| Інкубаційна атмосфера | 37°C, 5% CO2, волога атмосфера. |
| Покриття колби | Для оптимального прикріплення та життєздатності після розморожування ми рекомендуємо використовувати колби або пластини з колагеновим покриттям. |
| Процедура заморожування | Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і негайно перемістіть віали у відповідне місце для зберігання. |
| Умови доставки | Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і негайно перемістіть віали у відповідне місце для зберігання. |
| Умови зберігання | Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот. |
Контроль якості / Генетичний профіль / HLA
| Стерильність | Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми. Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю. |
|---|