Neuro-2a Hücre Hattı
Neuro-2a, sinirbilim araştırmalarında yaygın olarak kullanılan, fare kaynaklı bir sinir hücre hattıdır. Bu hücreler temel olarak sinir gelişimi, farklılaşma, nörotoksisite, hücre sinyal yolları ve aksonal büyümenin incelenmesi için kullanılır. Ayrıca, ilaç geliştirme ve tarama amaçları için de kullanılırlar.
Bu makale, Neuro-2a nöroblastom hücreleriyle çalışmaya başlamadan önce size yardımcı olabilecek önemli hususlara odaklanmaktadır. Makale başlıca şu konuları ele alacaktır:
- Neuro-2a hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
- Neuro-2a hücre hattının kültivasyon bilgileri
- Neuro-2a hücre hattının avantajları ve dezavantajları
- Neuro-2a hücre hattının araştırma uygulamaları
- Neuro-2a hücrelerini konu alan araştırma yayınları
- Neuro-2a Hücreleri için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Neuro-2a hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Makalenin bu bölümünde, Neuro-2a hücre hattıyla çalışmaya başlamadan önce bilinmesi gereken arka plan bilgileri ve temel özellikler ele alınacaktır. Burada şunları öğreneceksiniz: Neuro-2a hücre hattı nedir? Neuro-2a hücre hattının kökeni nedir? Neuro-2a hücre farklılaşması nedir? Bir Neuro-2a hücresinin boyutu nedir? Neuro-2a hücrelerinin morfolojisi nedir?
- Neuro-2a hücreleri, bir Albino farenin (A suşu) kendiliğinden gelişen tümöründen (nöroblastom) kaynaklanmıştır. Hücre hattı, R.J. Klebe ve F.H. Ruddle tarafından oluşturulmuştur.
- Neuro-2a nöroblastom hücreleri, nöronal ve amipoid kök hücre morfolojisi sergiler.
- Neuro-2a hücrelerinin boyu 12 mikrometredir [1].
- Neuro-2a hücrelerinin kromozom sayısı 59 ile 193 arasında değişebilir; modal sayı ise 95'tir. Bu nöroblastom hücrelerinin karyotipi, 94 ile 98 kromozom aralığında kararsızdır.
Neuro-2a hücre hattı kültürü bilgileri
Neuro-2a hücreleri, sinirbilim araştırma laboratuvarlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu hücrelerle çalışmaya başlamadan önce, aşağıda belirtilen zorunlu hücre kültürü bilgilerini öğrenmelisiniz. Bu, işinizi kolaylaştırmanıza yardımcı olabilir. Şunları öğreneceksiniz: Neuro-2a hücre kültürü besiyeri nedir? Neuro-2a hücreleri nasıl kültürlenir? Neuro-2a hücrelerinin ikiye katlanma süresi nedir? Neuro-2a hücrelerinin tohumlama yoğunluğu nedir? Neuro-2a hücre kültürü protokolü nedir? Neuro-2a hücre besiyeri nedir?
Neuro-2a Hücrelerini Kültüre Etmenin Önemli Noktaları
Çoğalma Süresi:
Neuro-2a hücrelerinin çoğalma süresi yaklaşık 70 saattir.
Yapışkan mı, Süspansiyon Halinde mi:
Neuro-2a, yapışkan bir hücre hattıdır.
Tohumlama Yoğunluğu:
Neuro-2a hücre hattı için optimize edilmiş hücre ekim yoğunluğu 1 x 104 hücre/cm²'dir. Ekim için hücreler, magnezyum ve kalsiyum içermeyen fosfat tamponlu salin (1x) ile yıkanır. Daha sonra, bir pasaj çözeltisi (Accutase) eklenir ve hücreler ortam sıcaklığında 8 ila 10 dakika süreyle inkübe edilir. Hücre ayrışmasından sonra taze besiyeri eklenir ve hücreler santrifüjlenir. Toplanan hücre peleti dikkatlice yeniden süspansiyona alınır ve hücreler büyüme için bir kültür kabına dökülür.
Büyüme Ortamı:
Neuro-2a hücrelerinin kültürlenmesi için EMEM kullanılır. İdeal hücre büyümesi için %10 FBS, 2 mM L-Glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM Sodyum piruvat ve NEAA içerir. Besiyeri haftada 1 ila 2 kez değiştirilmelidir.
Büyüme Koşulları:
Neuro-2a kültürleri, %5 CO₂ kaynağına bağlı, nemlendirilmiş 37°C'lik bir inkübatörde tutulur.
Saklama:
Hücreler, uzun süreli saklama için -150 °C'nin altındaki sıcaklıkta ultra düşük sıcaklıklı elektrikli dondurucuda veya sıvı azotun buhar fazında saklanmalıdır.
Dondurma Süreci ve Besiyeri:
Neuro-2a hücrelerini dondurmak için CM-1 veya CM-ACF besiyerleri kullanılır. Hücreler, dakikada sadece 1 °C'lik bir düşüşe izin veren yavaş bir dondurma işlemiyle dondurulur. Bu, hücreleri şoktan korur ve canlılıklarını korur.
Çözme Süreci:
Dondurulmuş kültürleri çözmek için, şişe, sadece küçük bir buz topakçığı kalana kadar 40 ila 60 saniye boyunca 37 °C'lik bir su banyosuna yerleştirilir. Ardından, kültür ortamı eklenir ve hücreler santrifüj işlemine tabi tutulur. Bu adım, dondurma ortamı bileşenlerinin uzaklaştırılmasına yardımcı olur. Hücre peleti daha sonra yeniden süspansiyona alınır ve hücreler, kültür ortamı ile doldurulmuş yeni bir şişeye aktarılır. Daha sonra, hücreler en az 24 saat süreyle 37 °C'lik bir inkübatöre yerleştirilir.
Biyogüvenlik Seviyesi:
Neuro-2a kültürlerinin işlenmesi ve muhafaza edilmesi için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvar koşulları zorunludur.
- Neuro-2a hücre hattının avantajları ve dezavantajları
- Neuro-2a hücre hattının araştırma uygulamaları
- Neuro-2a hücre hattının kültürleme bilgileri
- Neuro-2a hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
- 5. Neuro-2a hücrelerini konu alan araştırma yayınları
- Neuro-2a Hücreleri için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
- Sıkça sorulan sorular
Neuro-2a hücre hattının avantajları ve dezavantajları
Neuro-2a hücreleri, diğer nöronal hücre hatlarından ayıran bazı avantaj ve dezavantajlara sahiptir. Bu hücrelerin öne çıkan bazı artıları ve eksileri burada listelenmiştir.
Avantajlar
Neuro-2a fare nöroblastom hücre hattının avantajları şunlardır:
-
Bakımı Kolay:
Neuro-2a hücre hattı, karmaşık veya zorlu hücre kültürü prosedürleri gerektirmez. Araştırma laboratuvarlarında kültürü ve bakımı kolaydır.
-
İn Vitro Nöronal Hücre Modeli:
Neuro-2a, nöron gelişimi ve farklılaşması çalışmalarında araştırmacılar tarafından yaygın olarak kullanılan kullanışlı bir nöronal hücre modelidir.
Dezavantajlar
Neuro-2a hücrelerinin dezavantajları şunlardır:
-
Fare Kökenli Olması:
Neuro-2a, fare kökenlidir ve fare ile insan biyolojisi arasında önemli farklılıklar olabileceğinden, araştırmacılar fare temelli çalışmalardan elde edilen sonuçları insan sağlığı ve hastalıklarına genellerken dikkatli olmalıdır.
Neuro-2a hücre hattının araştırma uygulamaları
Neuro-2a hücreleri, sinirbilim araştırma alanında birçok uygulama imkanı sunar. Bu hücre hattının gelecek vaat eden bazı kullanım alanları burada ele alınmaktadır:
- Sinirsel gelişim: Neuro-2a, sinirsel gelişimi ve farklılaşma, aksonal büyüme ve sinaps oluşumu gibi ilgili süreçleri incelemek için yaygın olarak kullanılan bir in vitro nöronal hücre modelidir. 2020 yılında yapılan bir çalışmada, retinoik asit kaynaklı nöronal hücre farklılaşmasında mikroRNA-124'ün rolünü araştırmak için Neuro-2a hücreleri kullanılmıştır [2]. Başka bir çalışmada ise nöroblastom hücre hattında (N2A) Neuro-2a retinoik asit reseptörü gama (RARG) ve miRNA-124 ekspresyonu incelenmiştir. Bu çalışma, RARG'nin miR-124 tarafından hedef alındığını ve nörit uzamasını bastırdığını öne sürmüştür [3].
- Nörotoksisite: Neuro-2a, ilaçların, kimyasalların veya çevresel faktörlerin sinir hücreleri üzerindeki toksik etkilerini değerlendirmek için de kullanılır. Örneğin, Zhihong Yin ve meslektaşları tarafından yürütülen bir çalışmada, Neuro-2a hücreleri kullanılarak çevresel bir kimyasal olan bisfenol A'nın (BPA) nörotoksisitesi araştırılmıştır. Araştırmacılar, BPA'nın nöronal hücrelerin hücresel ve sinaptik bütünlüğünü bozarak bu hücrelerin farklılaşmasını ve çoğalmasını engellediğini gözlemlemiştir [4].
- İlaç Taraması: Neuro-2a hücreleri, çeşitli ilaçların, bileşiklerin ve doğal ürünlerin terapötik etkilerini değerlendirmek için de kullanılır. Örneğin, bir çalışmada Neuro-2a hücreleri kullanılarak Ginkgo biloba bitki özütünün antioksidan potansiyeli incelenmiştir. Ayrıca, bu araştırma, söz konusu özütün Aβ agregasyonunda bir azalmaya yol açtığını ve Alzheimer hastalığı için potansiyel bir tedavi yöntemi olabileceğini ortaya koymuştur [5].
5. Neuro-2a hücrelerini konu alan araştırma yayınları
İşte Neuro-2a hücre hattını konu alan bazı ilginç araştırma makaleleri.
2018 yılında Journal of Natural Medicines dergisinde yayınlanan bu çalışma, beyaz biberden (P. nigrum) izole edilen alkamidlerin Neuro-2a nöronal hücreleri üzerindeki terapötik etkilerini araştırmıştır.
Nkx2.1'in aşağı regülasyonu, aşırı retinoik asidin neden olduğu beyin anormalliklerinde rol oynar
2020 yılında Acta Biochimica et Biophysica Sinica dergisinde yayınlanan bu araştırma, Nkx2.1 geninin Shh sinyal kaskadını düzenleyerek fare beyin gelişiminde önemli bir rol oynadığını öne sürmüştür.
Toxicology and Industrial Health (2023) dergisinde yayınlanan bu makale, çevresel bir kimyasal olan bisfenol A'nın Neuro-2a hücrelerinde nörotoksisiteyi tetiklediğini ve bu hücrelerin sinaptik ve sitoskeletal işlev bozukluklarına yol açtığını öne sürmüştür.
Pharmaceuticals (2021) dergisinde yayınlanan bu makale, heksarelin adlı ilacın nöroblastom hücrelerinde (Neuro-2a) PI3K/AKT ve MAPK kaskadını modüle ettiğini ve hidrojen peroksitin neden olduğu Neuro-2a hücrelerinde apoptozu engellediğini öne sürmüştür.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine dergisinde (2021) yayınlanan bu araştırma makalesi, Emblica officinalis meyve özütünün Neuro-2a hücrelerinde nöroinflamasyonu bastırdığını ve bu nedenle nöroinflamatuar hastalıklar için faydalı olabileceğini öne sürmüştür.
Neuro-2a Hücreleri İçin Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Aşağıda, Neuro-2a hücreleri hakkında mevcut çevrimiçi kaynaklar yer almaktadır. Bunlar arasında Neuro-2a hücre kültürü ve transfeksiyon protokolü bulunmaktadır.
- Neuro-2a transfeksiyon protokolü: Neuro-2a, uygun bir transfeksiyon konakçısıdır. Bu bağlantı, hücre hattının transfeksiyon protokolü hakkında size rehberlik edecektir. Neuro-2a transfeksiyon verimliliği, reaktiften reaktifine değişiklik gösterir.
Aşağıdaki bağlantı, Neuro-2a hücre kültürü protokolünü içermektedir.
- Neuro-2a hücre kültürü protokolü: Bu bağlantı, Neuro-2a hücrelerinin alt kültürleme protokolünü öğrenmenize yardımcı olacaktır.
- Neuro-2a hücreleri: Bu web sitesi, Neuro-2a hücre besiyerleri, tohumlama yoğunluğu ve kriyoprezervatif ve proliferatif kültürlerin alt kültürleme ve işlenmesine ilişkin protokoller hakkında kapsamlı bilgiler içerir.
Kaynakça
- Lulevich, V. ve ark., Tek hücre mekaniği, amiloid-beta peptidi ile nöronal hücre etkileşimlerini incelemek için hassas ve kantitatif bir yöntem sunar. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872-7.
- You, Q. ve ark., Retinoik asit ile indüklenen Neuro-2A hücre farklılaşmasının düzenlenmesinde miR-124’ün rolü. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133-1139.
- Su, X. ve ark., Retinoik asit reseptörü gama, mikroRNA-124 tarafından hedef alınır ve nörit uzamasını engeller. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z. ve ark., Bisfenol-A maruziyeti, Neuro-2a hücrelerinde sinaps ve hücre iskeleti ile ilişkili nörotoksisiteye yol açmıştır. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L. ve ark., Ginkgo biloba özütü (EGb), APPsw'yi aşırı eksprese eden Neuro-2A hücrelerinde oksidatif stresi inhibe eder. BioMed Research International, 2019. 2019.