NIH-3T3 Hücreleri: Fibroblast Araştırmalarının Geliştirilmesi ve NIH-3T3’ün Uygulamaları
1962 yılında New York Üniversitesi Tıp Fakültesi'nden Howard Green ve George Todaro tarafından 17 günlük bir İsviçre Albino fare embriyosunun dokusundan oluşturulan NIH-3T3 hücre hattı, biyomedikal araştırmalarda temel bir kaynak haline gelmiştir. Lösemi virüsü ve sarkom virüsünün odak oluşumuna karşı yüksek duyarlılığıyla tanınan NIH-3T3 hücreleri, viral onkoloji çalışmaları, gen ekspresyonu analizi ve hücresel büyüme dinamiklerinin araştırılması dahil olmak üzere çok sayıda bilimsel araştırmada kritik bir araç olarak hizmet etmektedir. "3T3" isimlendirmesi, hücre kültürü yöntemini yansıtmaktadır; bu isim, başlangıç tohumlama yoğunluğunun 3 × 10^5 hücre olduğu ve "3 günlük transfer" aralığını ifade ederek, bu hücrelerin ilk kez kültürlendiği ve çoğaltıldığı standart koşulları vurgulamaktadır.
- Büyüme Ortamı
- Ürün sayfasına bakın
- İkiye Katlanma Süresi
- Ürün sayfasına bakın
- Büyüme Tipi
- Yapışkan
- Biyogüvenlik Seviyesi
- BSL-1
- Satış Yeri
- Cytion — NIH-3T3 Siparişi
NIH-3T3 Hücrelerinin Çeşitli Morfolojileri ve Uygulamaları
NIH-3T3 hücrelerinin en belirgin özelliklerinden biri, kültür yoğunluğuna göre önemli ölçüde değişen morfolojik uyarlanabilirlikleridir. Düşük yoğunluklarda bu fibroblastlar iğ şeklinde, tekil bir hücre yapısı sergilerken, popülasyon yoğunluğa ulaştıkça yoğun, girdaplı desenlere dönüşürler. Ortalama çapı yaklaşık 18 μm olan NIH-3T3 hücreleri, doku onarım mekanizmalarından hücre döngüsü düzenlemesinin karmaşık yolaklarına kadar uzanan derinlemesine hücre biyolojisi çalışmaları için çok yönlü bir model sunar.
Kültürleme bilgileri
Önemli Yetiştirme Bilgileri:
Popülasyon İkiye Katlanma Süresi: Yaklaşık 20 saat.
Büyüme Türü: Yapışkan kültürler.
Tohumlama Yoğunluğu: Önerilen: 3 ila 4 x 10^4 hücre/cm^2.
Büyüme ortamı: %5 FBS ve 2,5 mM L-glutamin ile takviye edilmiş DMEM veya Ham's F12.
Büyüme Koşulları: %5 CO₂ içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 °C'de muhafaza edin.
Saklama: Sıvı azotun buhar fazında -195 °C'nin altındaki sıcaklıklarda saklayın.
Dondurma Yöntemi: CM-1 veya CM-ACF besiyeri kullanın; yavaş dondurma yöntemi (1°C sıcaklık düşüşü) uygulayın.
Çözme Protokolü: 37 °C'lik su banyosunda hızlı ısıtma, ardından dondurma besiyerini uzaklaştırmak için santrifüjleme ve son olarak büyüme besiyerinde yeniden süspansiyon haline getirme.
Biyogüvenlik Seviyesi: Kültürleme için biyogüvenlik seviyesi 1 ortamı gereklidir.
Bir laboratuvarda bulunan İsviçreli albino fare.
NIH 3T3 Hücrelerinin Kullanımının Artıları ve Eksileri
Avantajlar
Transfeksiyon Verimliliği: Yüksek transfeksiyon oranlarıyla bilinen NIH-3T3 hücreleri, çeşitli transfeksiyon tekniklerine uyum sağlayarak hem geçici hem de kararlı gen ekspresyonu çalışmaları için mükemmeldir.
Besleyici Katman Kullanımı: Bu hücreler, ortak kültürdeki hücrelerin büyümesini destekleyen büyüme faktörlerini salgılamaları sayesinde, keratinositler ve kök hücreler gibi hücrelerle yapılan ortak kültürlerde genellikle destekleyici bir besleyici katman görevi görür.
Kök Hücre Araştırması: NIH-3T3 hücreleri, genetik modifikasyon olmaksızın pluripotensi indüklemek ve kök hücre farklılaşması için elverişli bir ortam sağlamak amacıyla kök hücre araştırmalarında tercih edilen bir seçenektir.
Kültür kararlılığı: NIH-3T3 hücreleri, kararlılıkları ve spontan transformasyon sıklığının düşük olmasıyla bilinir. Ancak, belirli koşullar altında veya belirli onkojenlere ya da mutajenlere maruz kaldıktan sonra, NIH-3T3 hücreleri spontan transformasyona uğrayabilir. Bu transformasyon, kontrolsüz büyüme, temas inhibisyonunun kaybı ve duyarlı konaklara enjekte edildiğinde tümör oluşturma yeteneği gibi kanserli özelliklerin kazanılmasına yol açabilir.
Dezavantajlar
Tutarsız Hücre Boyutu: NIH-3T3 hücrelerinin uzamış, iğ benzeri morfolojisi değişiklik gösterebilir ve bu da testlerdeki görüntü analizlerini zorlaştırır.
Enfeksiyona Yatkınlık: Bu hücreler, sıkı aseptik koşullar altında muhafaza edilmedikleri takdirde bakteriyel ve mikoplazma enfeksiyonlarına yatkındır; bu durum, deneylerin bütünlüğünü olumsuz etkileyebilir.
NIH-3T3 Hücrelerinin Araştırma Uygulamaları
DNA Transfeksiyon Çalışmaları: NIH-3T3 hücrelerinin dayanıklılığı, çeşitli genlerin eklenmesi ve işlevlerinin incelenmesi için ideal olmasını sağlar; bu durum, NAB2-STAT6 gibi proteinleri ve bunların hücresel süreçlerdeki rollerini inceleyen araştırmalarda kanıtlanmıştır.
Hücre Tabanlı Testler: Bu hücrelerin güvenilirliği, canlılık, apoptoz ve odak oluşumu testleri dahil olmak üzere çeşitli testlere uzanır ve farklı deney koşulları altında hücresel tepkiler hakkında içgörüler sunar.
Hücre Döngüsü Araştırmaları: Hücre hattının serum seviyeleri yoluyla kolayca manipüle edilebilen hücre döngüsü, onu hücre döngüsü düzenlemesini ve hastalık bağlamındaki sapmalarını incelemek için güçlü bir model haline getirir.
NIH-3T3 Hücreleriyle Araştırmalarınızı Bir Üst Düzeye Taşıyın
NIH 3T3 fibroblast hücre hattını içeren önemli çalışmaların öne çıkarılması
NIH-3T3 hücre hattı, hücre biyolojisinin çeşitli yönlerini kapsayan çok sayıda araştırma projesinde kilit bir rol oynamıştır. Aşağıda, bu hücrelerin kullanıldığı bazı önemli çalışmalar yer almaktadır:
- NAB2-STAT6 Füzyon Proteininin İncelenmesi: Biochemical and Biophysical Research Communications dergisinde yayınlanan bu çalışma, NAB2-STAT6 füzyon proteininin NIH-3T3 hücrelerini nasıl etkilediğini, özellikle de EGR-1 regülasyonu yoluyla hücre büyümesini ve göçünü artırmadaki rolünü derinlemesine incelemektedir.
- APOBEC3 ve Murin Lösemi Virüsünün İncelenmesi: Virology dergisinde yer alan bu araştırma, fare APOBEC3 genini eksprese eden NIH-3T3 hücrelerinde AKV murin lösemi virüsünün hipermutasyonunu incelemektedir.
- Epigenetik İlaçların Antimetastatik Potansiyelinin Değerlendirilmesi: Oncotargets and Therapy dergisinde yayınlanan bu çalışma, hidralazin ve valproik asidin RAS ile transform edilmiş NIH-3T3 hücreleri üzerindeki antimetastatik etkilerini değerlendirmektedir.
- Baicalein'in NIH-3T3 Proliferasyonu ve Kollajen Sentezi Üzerindeki Etkisi: Bu araştırma, NIH-3T3 hücrelerini kullanarak Baicalein'in miR-9/insülin benzeri büyüme faktörü-1 ekseni modülasyonu yoluyla hücre proliferasyonunu ve kollajen üretimini nasıl etkilediğini araştırmaktadır.
- Riboflavin Eksikliği ve Tümör Oluşumu Üzerine Çalışma: Bu çalışma, NIH-3T3 hücrelerindeki riboflavin eksikliğinin, hücre çoğalmasını teşvik ederek ve hücre döngüsü genlerinin düzenini bozarak tümör oluşumuna nasıl katkıda bulunduğuna dair bulguları sunmaktadır.
NIH-3T3 Hücre Araştırmaları için Temel Kaynaklar
NIH-3T3 hücreleri ile çalışmak isteyen araştırmacılar için, hücre kültürü ve deney protokollerine rehberlik edecek çeşitli kaynaklar mevcuttur:
- NIH-3T3 Hücrelerinde Sferoid Oluşumu: Bu video, NIH-3T3 hücrelerini kümeler halinde bir araya getiren ve çalışmalar için fizyolojik açıdan daha uygun bir model sunan bir 3D hücre kültürü tekniği olan sferoid oluşumunun ayrıntılı bir adım adım açıklamasını sunmaktadır.
- NIH-3T3 Hücre Büyümesinin İzlenmesi: JuLI Br canlı hücre görüntüleme sistemi aracılığıyla çekilen bu video, 65 saat boyunca NIH-3T3 hücrelerinin büyüme dinamiklerini yakalayarak gerçek zamanlı hücre çoğalmasını göstermektedir.
Bu kaynaklar, NIH-3T3 hücreleri ile yürüttüğünüz araştırma çalışmalarınızı desteklemeyi amaçlamakta ve başarılı deneyler ile keşifler için bir temel oluşturmaktadır.
NIH-3T3 hücreleri hakkında Sıkça Sorulan Sorular
Kaynakça
- Rahimi, A.M., M. Cai ve S. Hoyer-Fender, NIH3T3 Fibroblast Hücre Hattının Heterojenliği. Cells, 2022. 11(17): s. 2677.
- Leibiger, C. ve ark., Murin çok renkli bantlama yöntemi ile NIH 3T3 hücre hattının ilk moleküler sitogenetik yüksek çözünürlüklü karakterizasyonu. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): s. 306-312.
- Wang, H.-X. ve ark., Tavşan limbal kök hücrelerinin kültürü için 3T3 fibroblastlarla farklı besleyici tabakaların karşılaştırmalı analizi. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): s. 1021.
- Wang, Z. ve ark., Tanımlanmış koşullar altında NIH/3T3 fibroblastlarından nöronal hücrelerin farklılaşması. Gelişim, büyüme ve farklılaşma, 2011. 53(3): s. 357-365.
- Park, Y.-S. ve ark., NAB2-STAT6 füzyon proteini, EGR-1 regülasyonu yoluyla hücre proliferasyonuna ve onkojenik ilerlemeye aracılık eder. Biyokimyasal ve Biyofiziksel Araştırma İletişimi, 2020. 526(2): s. 287-292.
- Mattsson, M., NIH/3T3 Hücrelerinde Sloppymerase™ Ekspresyonu: Hata Yapmaya Meyilli Bir Füzyon Polimerazın Çok Yönlülüğünün Keşfi. 2021.
- Sahinturk, V. ve ark., Akrilamid, NIH/3T3 fibroblast hücrelerinde apoptoz yoluyla sitotoksik etkisini gösterir. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): s. 481-489.
- Lusi, E.A. ve F. Caicci, İlk İnsan Retro-Dev Virüsünün Keşfi: Morfolojisi, retroviral kinazı ve farelerde tümör indükleme yeteneğinin tanımı. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M. ve ark., E2F1-Ror2 sinyal yolu, bFGF ile uyarılmış NIH/3T3 fibroblastlarında G1/S faz geçişini teşvik etmek üzere koordineli transkripsiyonel regülasyona aracılık eder. The FASEB Journal, 2020. 34(2): s. 3413-3428.
- Long, L. ve ark., Riboflavin Eksikliği, HEK293T ve NIH3T3 Hücrelerinde Hücre Proliferasyonunu Sürdürerek ve Hücre Döngüsüyle İlgili Gen Transkripsiyonunu Düzenleyerek Tümör Oluşumunu Teşvik Ediyor. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): s. 834-843.