NCI-H1299 Hücreleri: NCI-H1299 Akciğer Kanseri Hücrelerinin Araştırma ve Klinik Önemi

Kültürleme bilgileri

Bir hücre hattı kültürünü sürdürmek, aşağıdakiler dahil olmak üzere bu hücre hattı hakkındaki tüm önemli bilgileri öğrenene kadar kolay değildir: NCI-H1299'un ikiye katlanma süresi nedir? NCI-H1299'un tohumlama yoğunluğu nedir? NCI-H1299 hücre besiyeri nedir? NCI-H1299 hücre hatları nasıl kültürlenir? Bu bölüm, NCI-H1299 hücre kültürüyle ilgili tüm bu soruların yanıtlarını öğrenmenize yardımcı olacaktır.

NCI-H1299 Hücrelerinin Kültürü İçin Önemli Noktalar

Çiftlenme Süresi:

NCI-H1299'un ikiye katlanma süresi 22-30 saat arasındadır.

Yapışkan mı, Süspansiyon Halinde mi:

NCI-H1299, yapışkan bir hücre hattıdır.

Alt Kültür Oranı:

NCI-H1299 hücreleri, önerilen 1:3 ila 1:6 oranında alt kültürlenir. Ekim için, yapışkan hücreler 1x PBS ile yıkanır ve oda sıcaklığında 8 ila 10 dakika boyunca Accutase pasaj çözeltisi ile inkübe edilir. Ayrılan hücrelere taze kültür besiyeri eklenir ve santrifüjlenir. Hücre peleti daha sonra yeniden süspansiyona alınır ve hücreler, büyüme besiyeri içeren yeni şişelere dökülür.

Büyüme Ortamı:

RPM1 1640, NCI-H1299 hücreleri için ideal bir besiyeridir. Bu besiyerine %10 fetal sığır serumu, 4500 mg/L glikoz, 2,0 mM L-glutamin, 1 mM sodyum piruvat, 1500 mg/L NaHCO3 ve 10 mM HEPES eklenir. Besiyeri haftada 2 ila 3 kez yenilenmelidir.

Büyüme Koşulları:

NCI-H1299 akciğer kanseri hücre kültürleri, %5 CO₂ beslemesi ile 37°C'de nemlendirilmiş bir inkübatörde muhafaza edilir.

Saklama:

NCI-H1299 hücre hattı, uzun süreli saklama amacıyla sıvı azotun buhar fazında veya -150°C'nin altındaki ultra düşük sıcaklıklı dondurucularda saklanabilir.

Dondurma Süreci ve Ortamı:

CM-1 veya CM-ACF, NCI-H1299 hücreleri için dondurma ortamlarıdır. Hücrelerin canlılığını korumak amacıyla, sıcaklığın dakikada sadece 1 derece düşmesine izin veren yavaş dondurma işlemi kullanılarak hücreler dondurulur.

Çözme Süreci:

Dondurulmuş NCI-H1299 hücreleri, küçük bir buz parçası kalana kadar 37 derece Celsius'ta önceden ısıtılmış bir su banyosunda 40 ila 60 saniye boyunca hızlı bir şekilde çalkalanır. Çözülen hücrelere taze besiyeri eklenir ve bu hücreler doğrudan yeni şişelerde kültürlenebilir veya santrifüjlenebilir. İlk durumda, 24 saatlik inkübasyondan sonra besiyeri değiştirilmelidir. Santrifüjleme, dondurma besiyerindeki bileşenlerin uzaklaştırılmasına yardımcı olur. Ardından, hasat edilen hücreler taze besiyeri içinde yeniden süspansiyon haline getirilir ve kültürleme için yeni şişeye aktarılır.

Biyogüvenlik Seviyesi:

NCI-H1299 hücre kültürünün işlenmesi için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvarı gereklidir.

NCI-H1299 Hücre Hattını Satın Alın: Akciğer Kanseri Biyolojisini İncelemek İçin Yüksek Kaliteli Araştırma Araçları

NCI-H1299 hücrelerinin avantajları ve dezavantajları

Diğer insan kanser hücre hatları gibi, NCI-H1299 da belirli avantaj ve dezavantajlarla ilişkili bazı ayırt edici özelliklere sahiptir. Burada, bunlardan birkaç önemli olanını özetledik.

Avantajlar

NCI-H1299 küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:

• İn vitro akciğer kanseri modeli

  NCI-H1299 hücre hatları, akciğer karsinomunun lenf düğümü metastazından geliştirilmiştir ve bu nedenle nispeten benzer özelliklere sahiptir. Bu nedenle, bu hücreler akciğer kanseri biyolojisini, hücresel ve moleküler mekanizmaları araştırmak ve potansiyel tedavileri taramak ve test etmek için bir in vitro model olarak kullanılabilir.

• Kültürlenmesi kolay

  NCI-H1299 hücrelerinin araştırma laboratuvarında kültürü ve bakımı kolaydır. Karmaşık hücre kültürü gereksinimleri ve prosedürleri yoktur.

• NCI-H1299 P53 ve NCI-H1299 KRAS mutasyonu

  NCI-H1299 hücrelerinde p53 gen ekspresyonu bulunmamaktadır; bu da hücrelerin yoğun bir şekilde çoğalmasına olanak tanır. Ayrıca, bu hücreler hücre büyümesi, çoğalması, istilası ve göçüne katkıda bulunan KRAS mutasyonuna sahiptir. Bu nedenlerle araştırmacılar, KRAS ve P53 mutasyonlarıyla ilgili moleküler mekanizmaları araştırmak için H1299 hücrelerini kullanmaktadır.

Dezavantajlar

NCI-H1299 hücrelerinin dezavantajları şunlardır:

• Doku özgüllüğü

  NCI-H1299, akciğer dokusundan elde edilmiştir. Bu nedenle, uygulanabilirliği çoğunlukla akciğer karsinomu araştırmalarıyla sınırlıdır. Diğer kanser türlerinin heterojenliğini ve genel özelliklerini tam olarak temsil etmeyebilir.

NCI-H1299 hücrelerinin araştırma uygulamaları

NCI-H1299 hücre hattı, akciğer kanseri araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu hücre hattının umut vaat eden birkaç uygulaması burada belirtilmiştir.

• Kanser biyolojisi: NCI-H1299 hücreleri, kanserin gelişimi, ilerlemesi ve ilgili hücresel ve moleküler mekanizmaları araştırmak için mükemmel bir araştırma aracıdır. Bu hücreler belirli mutasyonlara sahiptir; bu da araştırmacıların ilgili kanser hücresi davranışlarını, sinyal yolaklarını ve gen ekspresyon profillerini incelemelerine olanak tanır. Birçok çalışmada, akciğer kanseri biyolojisini incelemek için NCI-H1299 küçük hücreli dışı akciğer karsinomu hücre hattı kullanılmıştır. Örneğin, 2018 yılında yapılan bir çalışmada, NCI-H1299 hücreleri kullanılarak akciğer kanseri hücrelerinin apoptozunda rol oynayan sinyal yolu araştırılmıştır. Araştırmacılar, PI3K/AKT yolunun hücre çoğalmasına katkıda bulunduğunu ve bu yolun inhibisyonunun kanser hücresi ölümüne yol açabileceğini tespit etmişlerdir [1]. Benzer şekilde, başka bir araştırmada NCI-H1299'da epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT) sürecinde rol oynayan mekanizmalar incelenmiştir. Bu çalışma, hücre dışı bir protein olan SPARC’ın (asidik ve sistein açısından zengin salgılanan protein) NCI-H1299’daki EMT ve göç sürecine katkıda bulunduğunu ve dolayısıyla hücrelerde tümör oluşumunu teşvik ettiğini öne sürmüştür; SPARC proteini, TGF-β1 sinyal yolunun bir aracısı olarak işlev görür [2]. 

• İlaç keşfi ve taraması: Bir insan akciğer kanseri hücre hattı olan NCI-H1299, potansiyel ilaçların toksisitesini ve etkinliğini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca, araştırmacılar tarafından antitümör ilaçların etki mekanizmasını araştırmak için de kullanılmaktadır. Çalışmalarda bu hücreler, olası ilaç hedeflerini ve direnç mekanizmalarını belirlemek için de kullanılmıştır. Örneğin, Xiao-Yun Shen ve meslektaşları tarafından yürütülen bir araştırmada, doğal bileşik brucein D’nin (BD) anti-kanser potansiyeli incelenmiştir. Bulgular, BD’nin NCI-H1299 hücrelerinin çoğalmasını, istilasını ve göçünü önemli ölçüde engellediğini ortaya koymuştur. Bu nedenle, BD, küçük hücreli dışı akciğer karsinomunun tedavisi için potansiyel bir adjuvan tedavi olarak değerlendirilebilir [3]. Benzer şekilde, bir çalışmada, ksantohumolün tek başına ve sisplatin kemoterapi ilacı ile kombinasyon halinde NCI-H1299 akciğer kanseri hücreleri üzerindeki sitotoksik etkileri değerlendirilmiştir [4].

NCI-H1299 Hücre Hattı Hakkında Sıkça Sorulan Sorular

Kaynakça

1. Gu, J. ve ark., PI3K/Akt sinyal yolunu inhibe ederek akciğer kanseri hücrelerinde EGCG'nin indüklediği apoptoz üzerine bir çalışma. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557-4563.
2. Sun, W. ve ark., SPARC, A549 ve H1299 akciğer kanseri hücrelerinde epitelyal-mezenkimal geçişi teşvik etmede TGF-β1'in aracısı olarak işlev görür. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453-464.
3. Shen, X.-Y. ve ark., Küçük hücreli dışı akciğer kanseri H1299 hücrelerinin tedavisinde brucein D'nin mekanizmasına ilişkin bir çalışma. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
4. Long, B. ve ark., Ksantohumolün ve Sisplatin ile Kombinasyonunun İnsan Metastatik Akciğer Kanseri H1299 Hücreleri Üzerindeki Sitotoksik Etkileri. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1-15.