Yayın tarihi: 17 Ekim 2023 | Son güncelleme tarihi: Mayıs 2026
A431 Hücreleri: Kökeni, Kültür Koşulları ve Araştırma Uygulamaları
A431, 85 yaşındaki bir kadın hastanın derisinden elde edilen bir insan epidermoid karsinom hücre hattıdır. Biyomedikal araştırmalarda, özellikle kanser biyolojisi, immüno-onkoloji, dermatoloji ve ilaç keşfi alanlarında en yaygın olarak kullanılan hücre hatlarından biridir. A431 hücreleri, epidermal büyüme faktörü reseptörünü (EGFR) aşırı eksprese eder — hücre başına yaklaşık 2–3 milyon reseptör taşır, bu da normal epitel hücrelerinden yaklaşık 20–50 kat daha fazladır — bu da onları EGFR sinyal çalışmaları ve setuksimab ve erlotinib gibi EGFR hedefli tedavilerin test edilmesi için altın standart in vitro model haline getirir. A431 hücreleri, bağımsız Avrupa hücre bankanız Cytion'dan temin edilebilir.
- Tür / Köken
İnsan (kadın, 85 yaşında) - Doku
Deri epidermisi (epidermoid karsinom) - Morfoloji
Epitel, yapışık - Çiftleşme Süresi
80–100 saat - Büyüme Ortamı
DMEM + %10 FBS - Biyogüvenlik Seviyesi
BSL-1 - Ana Özellik
EGFR aşırı ekspresyonu (~2–3 milyon reseptör/hücre) - Anahtar Biyobelirteçler
EGFR (amplifiye), TP53 (mutant), KRAS (vahşi tip), PTEN (eksprese) - Ürün Numarası
300112 — Cytion'dan A431 Hücreleri Sipariş Edin
- A431 hücreleri: Genel özellikler ve köken
- A431 hücre hattı: Kültüre alma bilgileri
- A431 hücre hattının avantajları ve dezavantajları
- A431 hücrelerinin araştırma uygulamaları
- A431 ve diğer cilt kanseri hücre hatları
- A431 hücrelerini konu alan araştırma yayınları
- Kaynaklar, protokoller ve videolar
- Sıkça sorulan sorular
A431 hücreleri: Genel özellikler ve köken
Bu bölüm, A431 hücre hattının kökeni, morfolojisi, karyotipi ve onu araştırma açısından benzersiz bir şekilde değerli kılan EGFR aşırı ekspresyonu dahil olmak üzere temel biyolojik özelliklerini ele almaktadır.
A431 Hücre Hattının Kökeni ve Tarihçesi
- Bir insan cilt kanseri hücre hattı olan A431, 85 yaşındaki bir kadın epidermoid karsinom hastasının epidermisinden elde edilmiştir [1]. Bu hücre hattı, katı tümörlerden birkaç başka hücre hattı geliştiren D.J. Giard ve arkadaşları tarafından oluşturulmuştur.
- Hücre hattı, Cytion dahil olmak üzere dünya çapındaki bağımsız hücre bankaları tarafından güvenilir ve tekrarlanabilir bir araştırma modeli olarak yaygın bir şekilde dağıtılmış ve onaylanmıştır.
A431 Morfolojisi ve Karyotipi
- A-431 hücreleri epitelyal morfolojiye sahiptir. Standart kültür koşulları altında bir araya gelerek hücre kümeleri oluştururlar.
- A431 cilt kanseri hücre hattı hipertriploiddir. Modal kromozom sayısı 74'tür ve hücrelerin yaklaşık %36'sında görülür. Hücre popülasyonunun yaklaşık %1'inde daha yüksek ploidiler de mevcuttur.
A431 Hücrelerinde EGFR Ekspresyonu
EGFR aşırı ekspresyonu, A431 hücrelerinin belirleyici özelliğidir ve yaygın olarak kullanılmalarının başlıca nedenidir. A431 hücreleri, EGFR gen lokusunun genomik amplifikasyonunu taşır ve bu da hücre başına yaklaşık 2–3 milyon EGFR reseptörü ile sonuçlanır — bu, normal epitel hücrelerinden 20 ila 50 kat daha yüksektir. Bu, A431'i aşağıdakiler için altın standart pozitif kontrol haline getirir:
- Western blot, akış sitometrisi ve immünofloresans ile EGFR antikoru validasyonu
- Setuksimab ve panitumumab gibi EGFR'yi hedef alan monoklonal antikorların test edilmesi
- Erlotinib, gefitinib ve afatinib gibi EGFR tirozin kinaz inhibitörlerinin (TKI'lar) değerlendirilmesi
- PI3K/AKT/mTOR ve RAS/MAPK/ERK dahil olmak üzere aşağı akış sinyal yolaklarının incelenmesi
A431 hücre hattı: Kültüre alma bilgileri
Bir hücre hattının kültürleme gereksinimlerini bilmek, işlemeyi sorunsuz hale getirir. Bu bölüm, A431 hücre hattı için ikiye katlanma süresi, büyüme ortamı, pasajlama, kriyoprezervasyon ve biyogüvenlik gereksinimlerini ele almaktadır.
A431 Hücrelerinin Kültürü İçin Önemli Noktalar
Çoğalma Süresi:
A431 hücrelerinin popülasyon ikiye katlanma süresi 80 ila 100 saat arasında değişmektedir.
Yapışkan veya Süspansiyon Halinde:
A431, yapışkan bir hücre hattıdır.
Tohumlama Yoğunluğu:
1 x 104 hücre/cm2, A431 hücre hattı için idealdir. Hücreler bu yoğunlukta yaklaşık 4 günde konfluansa ulaşır. Yapışkan hücreler PBS (1×) ile yıkanır ve Accutase pasaj çözeltisi ile inkübe edilir, ardından kültür ortamında yeniden süspansiyon haline getirilir, santrifüjlenir ve yeni şişelere dağıtılır.
Büyüme Ortamı:
%10 fetal sığır serumu (FBS), 4,5 g/L glikoz, 1,0 mM sodyum piruvat, 1,5 g/L NaHCO3 ve 4 mM L-glutamin ile takviye edilmiş DMEM besiyeri. Besiyeri her 2–3 günde bir değiştirilmelidir.
Büyüme Koşulları:
A431 kanser hücreleri, 37°C'de %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde büyütülür.
Saklama:
Hücre canlılığını korumak için elektrikli dondurucuda veya −150°C'nin altındaki sıvı azot buhar fazında saklayın.
Dondurma Süreci ve Ortamı:
CM-1 veya CM-ACF, A431 hücreleri için önerilen dondurma ortamlarıdır. Kontrollü hızda yavaş dondurma yöntemi (-1°C/dk) kullanın.
Çözme Süreci:
Dondurulmuş A431 hücrelerini 37°C su banyosunda hızlı bir şekilde çözdürün (40–60 saniye). Küçük bir buz parçası kaldığında, kültür ortamı ekleyin ve santrifüjleyin. Toplanan hücreleri yeniden süspansiyon haline getirin ve kültür şişelerine aktarın.
Biyogüvenlik Seviyesi:
A431 kültürlerinin işlenmesi için Biyogüvenlik Seviyesi 1 (BSL-1) önerilir.
A431 hücre hattının avantajları ve dezavantajları
A431 hücre hattı, onu hem son derece kullanışlı hem de bağlamsal olarak sınırlı kılan ayırt edici özelliklere sahiptir. İşte dengeli bir özet.
Avantajlar
A431 kanser hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
EGFR aşırı ekspresyonu
A431 hücreleri, hücre başına 2–3 milyon reseptör ile EGFR'yi aşırı eksprese eder ve EGFR sinyal iletim çalışmaları ile anti-EGFR ilaçların (cetuximab, erlotinib, gefitinib) doğrulanması için altın standart pozitif kontrol görevi görür.
Tümörijeniklik
A431 hücreleri tümörjeniktir ve bağışıklık sistemi zayıflamış farelerde kolayca tümör oluştururlar; bu da onları, tümör büyüme dinamiklerini incelemek ve yeni kanser tedavilerini in vivo olarak değerlendirmek için ksenograft kanser modelleri için güvenilir bir araç haline getirir.
İyi karakterize
On yıllardır yayınlanan araştırmalar, A431 hücrelerinin genomik, proteomik ve fenotipik düzeyde kapsamlı bir şekilde karakterize edildiğini ve deneysel tasarım için sağlam bir bilimsel temel sağladığını göstermektedir.
3D sferoid oluşumu
A431 hücreleri, ultra düşük bağlanma koşulları altında kolayca kompakt 3D sferoidler oluşturur; bu da onları, ilaç penetrasyonu ve etkinlik çalışmaları için modern organoid ve sferoid tarama platformlarıyla uyumlu hale getirir.
Dezavantajlar
A431 hücrelerinin dezavantajları şunlardır:
Genetik anormallikler
A431, birikmiş genetik mutasyonlara ve kromozomal değişikliklere (hipertriploid, modal sayı 74) sahip bir kanser hücre hattıdır ve orijinal tümör özelliklerini tam olarak yansıtmayabilir.
Mikrobiyal kontaminasyon riski
A431, bakteriyel kontaminasyona yatkındır. Güvenilir sonuçlar elde etmek için sıkı aseptik tekniklerin uygulanması ve rutin mikoplazma testlerinin yapılması şarttır.
Tüm EGFR tümörlerini temsil etmemesi
A431'deki EGFR ekspresyonu, (akciğer kanserinde olduğu gibi) mutasyondan ziyade gen amplifikasyonu tarafından yönlendirildiğinden, bulgular küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC) gibi EGFR mutasyonlu tümör bağlamlarına doğrudan uygulanamayabilir.
A431 hücrelerinin araştırma alanlarındaki kullanımları
A431 hücre hattı, birçok araştırma disiplininde yaygın olarak kullanılmaktadır. Benzersiz EGFR biyolojisi, tümör oluşturma özelliği ve iyi karakterize edilmiş genomu, onu mevcut en çok yönlü insan kanser hücre hatlarından biri haline getirmektedir.
- Kanser biyolojisi: A431, kanser büyümesini, metastazını ve invazyonunu tetikleyen hücresel ve moleküler mekanizmaları araştırmak için güçlü bir araçtır. Çalışmalar, bu hücre hattında PI3K/AKT/mTOR ve RAS/MAPK/ERK sinyal yollarını haritalandırmış ve inhibisyonun A431 cilt tümör hücrelerinde apoptozu indüklediği gösterilmiştir [2, 3].
- EGFR hedefli tedavi testleri: A431 hücreleri, anti-EGFR terapötiklerinin — monoklonal antikorlar (setuksimab, panitumumab) ve küçük moleküllü TKI'lar (erlotinib, gefitinib, afatinib, osimertinib) — değerlendirilmesinde referans standardıdır.
- İlaç testi ve değerlendirmesi: A431 hücreleri, yeni anti-kanser ilaç adaylarını değerlendirmek için kullanılır. Rahim ve ark. tarafından 2022 yılında yapılan bir çalışma, Alstonia angustiloba'dan biyojenik olarak sentezlenen gümüş nanopartiküllerin A431 hücreleri üzerinde güçlü antiproliferatif etkileri olduğunu göstermiştir [4].
- Tümör ksenograft modelleri: A431 hücreleri, immün yetmezliği olan farelerde tümör oluşturur ve bu da in vivo etkinlik çalışmaları için subkutan ve ortotopik ksenograft modellerine olanak tanır. Lim ve ark. (2022), ekzojen EGF'nin radyosensitize edici etkilerini in vivo olarak değerlendirmek için A431 kaynaklı ksenograftlar kullanmıştır [5].
- Deri toksisitesi ve dermatoloji araştırmaları: A431 hücreleri, dermal toksisiteyi, deri penetrasyonunu ve topikal olarak uygulanan bileşiklerin güvenlik profillerini değerlendirmek için ilaç ve kozmetik şirketleri tarafından yaygın olarak kullanılmaktadır.
- 3D sferoid ve organoid modelleri: A431 hücreleri, ultra düşük bağlanma veya asılı damla koşulları altında kompakt 3D sferoidler oluşturur ve bu da fizyolojik olarak daha ilgili ilaç penetrasyonu ve direnç çalışmalarına olanak tanır.
- EGFR antikoru validasyonu: A431 hücreleri, aşırı EGFR yoğunlukları nedeniyle Western blot, immünofloresan, IHC ve akış sitometrisinde anti-EGFR antikorlarını doğrulamak için standart pozitif kontrol olarak kullanılır.
A431 ve diğer cilt kanseri hücre hatları
Doğru hücre hattını seçmek, deneysel geçerlilik açısından çok önemlidir. A431'in diğer yaygın olarak kullanılan cilt ve skuamöz kanser hücre hatlarıyla karşılaştırması aşağıdaki gibidir:
| Özellik | A431 | A375 (Melanom) | SCC-25 (Oral SCC) | HaCaT (Keratinosit) |
|---|---|---|---|---|
| Kanser türü | Epidermoid karsinom | Malign melanom | Oral skuamöz hücreli karsinom | Ölümsüzleştirilmiş keratinosit |
| EGFR ekspresyonu | +++ (~2–3M/hücre) | + (düşük) | ++ (orta) | ++ (orta) |
| Tümörijeniklik | Evet | Evet | Evet | Hayır |
| Morfoloji | Epitel, yapışık | İğ şeklinde, yapışkan | Epitel, yapışkan | Epitel, yapışkan |
| BSL | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Birincil kullanım | EGFR araştırması, kanser ilacı testleri | Melanom biyolojisi, BRAF inhibitörleri | Baş ve boyun kanseri, radyasyon çalışmaları | Deri biyolojisi, bariyer fonksiyonu |
A431 Hücrelerini İçeren Araştırma Yayınları
A431 cilt karsinomu hücre hattını içeren bazı önemli hakemli yayınlar aşağıda verilmiştir.
Materials Today Communications (2020) dergisinde yayınlanmıştır. Poli-ε-kaprolakton kurkumin yüklü nanofiberlerin ve polivinil alkol-AuNP'lerin A431 kanser hücrelerine karşı antikanser potansiyeli değerlendirilmiştir.
miRNA-221, PTEN'i hedef alarak kutanöz skuamöz hücreli karsinomun ilerlemesini teşvik eder
Cellular & Molecular Biology Letters (2019) dergisinde yayınlanmıştır. MikroRNA-221'in, PTEN tümör baskılayıcı genini hedef alarak kutanöz skuamöz hücreli karsinomda onkojenik bir rol oynadığı öne sürülmüştür.
BMC Complementary Medicine and Therapies (2016) dergisinde yayınlanmıştır. Eutypella spp–CrP14 mantarından elde edilen vinkristinin, A431 hücrelerinde apoptozu indüklediği gösterilmiştir.
Cells dergisinde (2019) yayınlanmıştır. CDC42SE1'in cilt kanseri ilerlemesinin potansiyel bir biyobelirteci olduğu ve bu genin aşağı regülasyonunun A431 hücrelerinde tümör oluşumunu kolaylaştırdığı belirlenmiştir.
Metformin, PI3K/Akt sinyal yolunu modüle ederek A431 hücrelerinin proliferasyonunu inhibe eder
Experimental and Therapeutic Medicine (2015) dergisinde yayınlanmıştır. Metforminin, PI3K/Akt sinyal yolunu düzenleyerek A431 proliferasyonunu bastırdığı gösterilmiştir.
A431 Hücre Hattı için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Aşağıdaki kaynaklar, laboratuvarda A431 hücreleriyle çalışmak için pratik rehberlik sağlar.
- A-431 hücrelerinin transfeksiyonu — A431 kanser hücrelerinin transfeksiyonu için adım adım video kılavuzu.
- A431 kanser hücre hattı — Cytion ürün sayfası — Tam hücre kültürü bilgileri: büyüme ortamı, tohumlama yoğunluğu, pasajlama, kriyoprezervasyon ve kalite sertifikaları.
- A431 hücre kültürü protokolü — Bio-Protocol'dan A431 hücre hattını kültürlemek için kısa ve öz bir harici protokol.
- Cytion'un tüm cilt kanseri hücre hatlarını inceleyin — Cytion'da bulunan tüm cilt kanseri hücre hatlarını keşfedin.