Jurkat E6.1 Hücre Hattı

JurkatE6.1, periferik kandan elde edilen ölümsüzleştirilmiş bir insan T-lenfosit hücre hattı olan Jurkat hücre hattının bir klonudur. İlk olarak 1977 yılında kurulmuş olup, T-hücresi reseptör sinyalizasyonu, kansere karşı T-hücresi ve diğer lenfosit adoptif tedavileri, kanla ilişkili proto-onkogen araştırmaları, hücre sağkalımı ve hücre farklılaşması ile ilgili araştırmalarda kullanılmaktadır.

Bu makalede, Jurkat E6.1 klonlanmış hücre hatları üzerinde çalışmaya başlamadan önce anlamanız gereken tüm bilgileri ve ön koşulları içereceğiz:

1. Kökeni, Tarihçesi ve Genel Bilgiler
2. Hücre Kültürü Özellikleri
3. Jurkat E6.1 Hücre Hatlarının Uygulamaları
4. Araştırma Yayınları
5. Avantajlar ve Sınırlamalar
6. Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası

1. Kökeni, Tarihçesi ve Genel Bilgiler

Jurkat E6.1 hücre hattının tarihçesi, kökeni, genel özellikleri ve hücre kültüründe kullanımı ile ilgili gerekli tüm bilgiler burada yer almaktadır.

• Jurkat E6.1, ölümsüzleştirilmiş bir insan T-lenfosit hücre hattıdır. Bu klonlanmış hücre hattı, 1976 yılında akut lenfoblastik lösemiden muzdarip 14 yaşındaki bir çocuğun periferik kanından elde edilen Jurkat hücre hattının bir türevidir. Kandan izole edildikten sonra, JM ve Jurkat bu hücre hatlarının aynı hastadan izole edildiğini gösterdiğinden, bu hücre hattı başlangıçta JM olarak adlandırılmıştır. Jurkat E6.1 hücre hattı Jurkat-FHCRC olarak bilinen hücre türevlerinden klonlanmıştır.
• E6.1 hücre hatları lösemiden türetilmiştir; bu hücre hatları monoklonal antikorlar veya lektin ile simülasyon yoluyla IL-2 ekspresyonunu artırmak için kullanılır. T-hücresi antijen reseptörlerini ifade ederler; bu nedenle, bu hücre hatları bağışıklık sistemi bozuklukları ve immün-onkoloji araştırmalarında kullanılabilir.
• Jurkat E6.1 hücrelerinin Hücre Morfolojisi: Jurkat E6.1 hücreleri bir lösemi hastasından izole edilmiştir ve T-Lenfositlere kıyasla değişmiş morfolojiye sahip olmaları onları ölümsüz hücre hatları haline getirmektedir. Lenfoblast hücresi, naif lenfositler antijen sunan hücreler tarafından antijen sunumu ile aktive edildiğinde oluşur. Bu da çekirdek, sitoplazma, mRNA ve proteinlerde büyüme ile sonuçlanır.
• Hücre boyutu: Jurkat E6.1 hücre hatları, daha yaygın olarak çapı 10-16 μm arasında değişen (çap süspansiyon tipine göre değişebilir) klonlanmış ölümsüzleştirilmiş hücrelerdir. Bu hücre hatları oldukça küresel bir hücre şekline sahiptir.
• Genom ve Kromozom sayısı: Bu hücre hatları, model kromozomu 46 olan insan T-lenfositlerinin psödodiploid hücre hatlarıdır. Bunlar aynı zamanda modal kromozomun yaklaşık %74'ünde bulunduğunu ve yaklaşık %5,3'lük bir poliploidi oranı gösterdiğini ortaya koymaktadır. Karyotip çalışmaları 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2) ile bir karyotip göstermiştir. X ve Y kromozomları çoğu hücre hattında tipik olarak düzenli bir kopyaya sahiptir.
• Jurkat hücre hatları vs E6.1 Jurkat Hücre hatları: Jurkat hücre hatları ilk olarak akut lenfoblastik lösemi hastasından izole edilen birincil ana hücre hatlarıdır. Bununla birlikte, E6.1 Jurkat hücre hatları Jurkat-FHCRC hücre hatlarının klonlanmış türevidir.

3. jurkat E6.1 Hücre Hatlarının Uygulamaları

Jurkat E6.1 hücre hattı, bağışıklık sistemi ve ilişkili kanserler ile bağlantılı bozuklukların araştırılması ve incelenmesinde en belirgin şekilde kullanılmaktadır. Ayrıca, CD4 T hücresi reseptörü retroviral giriş için gerekli olduğundan HIV enfeksiyonu ile ilgili bazı karmaşıklıkların incelenmesi için de uygundur.

Bu hücre hatlarının kullanıldığı bazı temel alanlar aşağıda tartışılmaktadır:

T Hücresi Sinyalizasyon ve Apoptotik Yollar için Model Sistem: Bu T hücreli lösemi türevi hücre hattı, TCR sinyalizasyon kaskadını içeren araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Jurkat E6.1, daha sonra T-Hücresi aktivasyonuna yardımcı olan ve enflamatuar yolları tetikleyen daha fazla IL-2 ve IL-8 salgılar. Bu hücre hattı aynı zamanda hiperfosforile Pyk2 ve T hücrelerinde aktin hücre iskeletinin yeniden düzenlenmesini önemli ölçüde etkileyen Vav1'in artan üretimi ile bilinir. Jurkat E6-1 hücre hattında TCR segregasyonu, LFA-1'in güçlü bir şekilde ifade edilmesiyle de geliştirilebilir ve bu da sonuç olarak TCR sinyalini ve IL-2 ifadesini artırır . Jurkat E6.1 hücre hatlarında hücre proliferasyonu ve hücre döngüsü çalışmaları da yapılmaktadır. Deniz ve bitki kaynaklarından elde edilen bileşiklerin apoptotik yolları ve DNA hasarı indüksiyonunu incelemek için tercih edilmişlerdir. 2013 yılında yapılan bir çalışmada, bu hücre hatları kullanılarak köpekbalığı epigonal şartlandırılmış ortamının insan hücreleri üzerindekietkisi değerlendirilmiştir. Benzer şekilde, bitki kaynaklı hirsutinin hücre proliferasyonu üzerindeki baskılayıcı etkisi Jurkat E6.1 hücre hatlarında incelenmiştir. Genellikle antikanser çalışmaları da seçilen hedeflerini değerlendirmek için Jurkat E6.1'i kullanmaktadır. Brevetoksinler (PbTx) gibi deniz nörotoksinlerinin etkisi de bu hücre hatlarında incelenmiştir.

HIV Çalışmaları: Jurkat E6.1 hücre hatlarının en önemli uygulamalarından biri, TCA'yı indükleyen farklı sinyal olaylarını seçme özellikleri nedeniyle HIV çalışmaları için uygun bir model olarak hizmet etme yetenekleridir. Jurkat E6.1 hücre hatları sadece HIV aktivasyonunun anlaşılmasında değil, aynı zamanda HIV latensinin arkasındaki mekanizmaların incelenmesinde de kullanılmıştır. 2021'de yapılan bir çalışmadaolduğu gibi, gen düzenleme ve gen nakavtına tabi tutulabildikleri bu hücre hatlarında HIV replikasyonu ve enfeksiyonu büyük ölçüde incelenmiştir . Uzun etkili efavirenz (Efa)-enfuvirtid (Enf) birlikte yüklenmiş polimer-lipid hibrit nanopartiküller (PLN) gibi ilaç dağıtımının HIV enfeksiyonu üzerindeki etkisi Jurkat E6.1 hücre hatlarını kullanmıştır. CRISPR/Cas9 ile tasarlanmış Jurkat E6.1, HIV girişi, replikasyonu ve enfeksiyonu ile ilgili mekanizmaları incelemek için birçok kez kullanılmıştır.

4. araştırma Yayınları

Jurkat E6.1 hücre hatları da dahil olmak üzere geniş araştırma koleksiyonundan birkaç önemli örnek.

Selenyum metaboliti metilselenol, lenfosit reseptörü NKG2D aracılığıyla bağışıklık aktivasyonunu tetikleyen ligandların ekspresyonunu düzenler

Ligand ekspresyonunu ve MICA/B'nin yüzey ekspresyonunu incelemek için farklı selenyum bileşiklerinde inkübe edilen Jurkat E6.1 kullanılmıştır.

Bir ent-3,4-seko-kauren olan karakasin asit, lösemi hücrelerinde NFkB sinyal yolu inhibisyonu yoluyla apoptozu ve hücre farklılaşmasını teşvik eder.

Jurkat E6.1 ve HL-60 gibi insan T hücre hatlarında karakasin asit ile indüklenen sitotoksisitenin anlaşılması.

T-Lenfositik Lösemi Hücre Hatlarında (Jurkat E6-1/AZT-100) ve HIV-1 Enfeksiyonu Olan Pediatrik Hastalarda Azidotimidine Karşı İn Vitro İlaç Direnci Gelişimi Kanıtı

HIV-1 ile enfekte hastalarda Azidothymidine (AZT) direncini incelemek için AZT ilacı ile uzun süreli inkübe edilen Jurkat E6.1 kullanıldı.

Bazı Biyo-İdollerin Membran Akışkanlığı Üzerindeki Etkilerine İlişkin Jurkat E6.1 Hücre Hattı Çalışmaları

Bu araştırmada, serotonin, triptofan ve melatonin gibi biyo-indollerin Jurkat E6.1 hücre hatlarında hücre zarı akışkanlığı üzerindeki etkisini anlamak için polarize floresan analiz sistemi kullanılmıştır.

Tribulus terrestris alkaloidleri ekstresi ile Jurkat E6-1 hücrelerinde apoptoz indüksiyonunun moleküler mekanizması

Tribulus terristris türevi alkaloid ekstresi, altta yatan etki mekanizmasını anlamak için Jurkat E6.1 hücrelerinde apoptozu indükledi.

LFA-1 Ekspresyonunun Artırılması Jurkat E6.1 Hücrelerinde İmmün Sinaps Mimarisini ve T Hücre Reseptör Sinyalini Geliştirir

Jurkat E6.1 hücrelerindeki T Hücresi reseptör sinyali, LFA-1 ifadesinin zorla artırılmasıyla güçlendirilmiştir.

5. avantajlar ve Sınırlamalar

Diğer hücre hatları gibi Jurkat E6.1'in de avantajları ve sınırlamaları vardır.

Avantajlar

Bu uygulamalarda tercih edilmesinin birçok nedeni vardır:

• Büyüme Modu

  Jurkat E6.1 süspansiyon ve yapışık olmayan bir hücre hattıdır, yani süspansiyon halinde büyür ve kültür yüzeyine yapışmaz.

• Genlerin İfadesi

  Jurkat E6.1 hücre hattı interlökin-2 (IL-2) ve CD3 kodlayan genleri ifade eder. T3 antijenik kompleksine karşı monoklonal antikorlar, lektinler veya phorbol esterleri ile stimülasyon üzerine, bu hücrelerin güçlendirilmiş IL-2 ürettiği gösterilmiştir.

• Antijenlerin İfadesi

  Jurkat E6.1 hücre hattı, T hücre aktivasyonu ve sinyalizasyon ile ilişkili CD3 antijenini ifade eder.

• İfade Belirteçleri

  Hücre hattı, T hücresi tanıma ve bağışıklık yanıtında çok önemli olan T hücresi antijen reseptörü (TCR) belirteçlerini ifade eder.

• Transfeksiyon için Uygulanabilirlik

  Jurkat klon E6.1 hücre hattı, konak transfeksiyon deneyleri için uygundur ve çeşitli araştırma amaçları için hücrelere eksojen genetik materyalin eklenmesine izin verir.

Sınırlamalar

Avantajlardan sonra, Jurkat E6.1 hücre hatlarının kullanımıyla ilgili sınırlamaları gözden geçirelim:

• Viral Vektör ile Hücre Transfeksiyonu

  Jurkat E6.1 hücrelerinin transfekte edilmesi, T-hücresi kökenli olmaları nedeniyle zordur. Tipik olarak, genetik modifikasyon için pahalı ve zaman alıcı viral vektörler gereklidir. Viral olmayan vektörler Jurkat hücrelerinde düşük transfeksiyon etkinliği ve önemli toksisite göstermiştir.

• Bakteriyel Kirlenme

  Jurkat E6.1 hücre kültürleri, deneysel sonuçların bütünlüğünü sağlamak için potansiyel bakteriyel kontaminasyon açısından izlenmelidir.

• Viral Kontaminasyonlar

  Jurkat E6.1 hücre hatları çeşitli kemokin reseptörlerini ve düşük CD4 seviyelerini ifade ederek viral girişi kolaylaştırır. Bu da onları HTLV ve HIV gibi T hücrelerini enfekte eden virüslere karşı duyarlı hale getirir.

6.kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası

Bu bölüm, hücre kültürü ve transfeksiyonu için yöntem ve protokollerin yanı sıra bu hücre hattıyla ilgili eğitim videolarını da kapsayacaktır:

Hücre Kültürü Protokolleri

İşte bu hücre hattı için izlenecek bazı temel kültür prosedürleri:

• Hücre Kültürü SOP, Jurkat'ın Çoğaltılması: Kaliforniya Üniversitesi ayrıca USCS Genom tarayıcısında Jurkat klon E6-1'in kültürü için bir yöntem sağlamıştır.
• Jurkat, Klon E6-1 Kültürü ve İşleme: Elabscience, ürün açıklama sitesinde kültür işleme protokolüne yer vermiştir.

Transfeksiyon Protokolleri

İşte mevcut farklı transfeksiyon protokollerinin listesi:

• Jurkat Hücreleri Transfeksiyon Protokolü Lipofectamine LTX Reaktifi: ThermoFisher'dan Lipofectamine LTX Reaktifi kullanan bir Jurkat Hücre transfeksiyon protokolü.
• Jurkat klonu E6.1 için Amaxa™ 4D-Nucleofector™ Protokolü [ATCC®]: Lonza Group AG ,4D-Nucleofector® X Ünitesi kullanarak ATCC'den Jurkat klon E6.1 için transfeksiyon protokolünü sağlamıştır.

Jurkat E6.1 ile ilgili videolar

Hücre kültürü kavramları, prosedürler, çoğalma, kaplama ve diğer konuları kapsayan birkaç mükemmel video bulunmaktadır.

• Hücreleri Pasajlama:Hücre Kültürü Temelleri: Bu, ThermoFisher'ın insan hücre hatlarını pasajlama temel kılavuzu için harika bir videodur.
• Hücreleri Çözme: Hücre Kültürü Temelleri: Bu video, ThermoFisher tarafından hücre kültürü ve çözdürme hakkında temel talimatlar sunmaktadır.
• Plazmid DNA Transfeksiyon Protokolü: Bu video, ThermoFisher tarafından Lipofectamine® LTX ve Plus™ Reaktifi ile Plazmid DNA transfeksiyonu protokolüne odaklanmıştır.
• Apoptozu 3 Mikromolar Staurosporin ile Muamele Edilmiş Süspansiyon Jurkat Hücreleri Kullanarak Ölçün: Bu video, Nexcelom Bioscience'ın Hoechst ve kaspaz 3/7 reaktiflerini kullanarak Celigo görüntü sitometresinde apoptoz tahlilinin nasıl yapılacağını göstermektedir.