İnsan Göbek Damarı Endotel Hücreleri (HUVEC)
HUVEC, biyomedikal araştırmalarda önemli bir araç olarak kullanılan birincil endotel hücreleridir. Araştırmacıların anjiyogenez, vasküler biyoloji ve ateroskleroz ve kanser gibi hastalıkları incelemelerine yardımcı olurlar. HUVEC'ler, endotel hücre davranışını, hücresel sinyal mekanizmalarını ve ilaç testlerini araştırmak için kullanılır ve kardiyovasküler hastalıklar ile kanser için potansiyel tedaviler hakkında değerli bilgiler sağlar. Ayrıca, vasküler biyoloji çalışmaları için bir model sistem görevi de görür.
HUVEC hücrelerinin kökeni ve genel özellikleri
Bir hücre hattının kökeni ve genel özellikleri hakkındaki bilgiler, çalışmanız için uygun olup olmadığına karar vermede çok önemlidir. Bu bölüm, HUVEC endotel hücreleri hakkında şu temel bilgileri öğrenmenize yardımcı olacaktır: HUVEC hücreleri ne için kullanılır? HUVEC hücrelerinin tam adı nedir? HUVEC'in ayırt edici özellikleri nelerdir? HUVEC morfolojisi nedir? HUVEC'lerin çapı nedir? HUVEC hücre boyutu nedir?
- HUVEC hücreleri, insan göbek kordonu damarının endotelinden elde edilir.
- HUVEC morfolojisi endotel benzeri bir yapıya sahiptir. Genellikle poligonal şekilli olup, merkezlerinde yuvarlak bir çekirdek bulunur.
- HUVEC hücrelerinin çapı 17 μm'dir.
- Bu endotel hücreleri diploiddir. Modal kromozom sayısı 46'dır.
HUVEC TERT2
HUVEC TERT2, birincil insan umbilikal ven endotel hücrelerinden (HUVEC'ler) türetilmiş ölümsüzleştirilmiş bir hücre hattıdır. HUVEC hücrelerinin genomuna insan telomeraz ters transkriptaz (TERT) geni eklenerek geliştirilmiştir. Bu modifikasyon, kültürdeki ömürlerini uzatmaya yardımcı olmuş ve birincil HUVEC'lerle ilişkili sınırlamalar olmaksızın daha uzun süreli deneylerin yapılmasına olanak sağlamıştır.
HUVEC ve HMEC-1 arasındaki fark nedir?
HUVEC ve HMEC-1 endotel hücre hatlarının yapısı ve karmaşıklığı benzerdir. Ancak, HMEC-1 hücreleri, hücre boyutu ve granülerlik açısından HUVEC'lere göre daha homojen bir popülasyon sergiler. Bu durum, deney verilerindeki varyasyonları azaltabilir.
HUVEC hücre hattı kültürüyle ilgili bilgiler
Makalenin bu bölümü, HUVEC hücre kültürü hakkında size önemli bilgiler sunmaya odaklanmıştır. Bu bilgiler, bu hücrelerle çalışmanıza büyük ölçüde yardımcı olacaktır. Burada, aşağıdaki sık sorulan soruların yanıtlarını bulacaksınız: HUVEC'in ikiye katlanma süresi nedir? HUVEC'in tohumlama yoğunluğu nedir? HUVEC'lerde kaç pasaj vardır? HUVEC hücre besiyeri nedir? HUVEC'leri nasıl kültürlersiniz?
HUVEC Hücrelerini Kültüre Etmenin Önemli Noktaları
Çoğalma Süresi:
HUVEC'in ikiye katlanma süresi yaklaşık 23,5 saattir. Bununla birlikte, hücre kültürü koşullarına ve pasaj sayısına göre değişiklik gösterebilir.
Yapışkan mı, Süspansiyon mu:
HUVEC, yapışkan bir hücre hattıdır. Hücreler büyür ve tek tabakalı yapılar oluşturur.
Bölünme Oranı:
HUVEC'ler için alt kültürleme oranı 1:2 ila 1:4'tür. Ekim için; hücreler 1x fosfat tamponlu salin ile yıkanır ve ortam sıcaklığında 8 ila 10 dakika boyunca bir ayrıştırma çözeltisi (Accutase) eklenir. Daha sonra kültür ortamı eklenir ve ayrılan hücreler santrifüjlenir. Süpernatant atılır ve hücre peleti dikkatlice yeniden süspansiyon haline getirilir. Hücreler, büyüme için yeni bir kültür şişesine aktarılır.
Büyüme Ortamı:
HUVEC hücrelerini kültürlemek için Endotel Hücre Büyüme Ortamı kullanılır. Ortam 2-3 günde bir değiştirilir. HUVEC'ler 8-10 pasaj kadar kullanılabilir.
Büyüme Koşulları:
İnsan endotel hücre hattı (HUVEC), 37 °C'de %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde muhafaza edilir.
Saklama:
HUVEC hücreleri genellikle -150 °C'nin altındaki sıcaklıkta ultra düşük sıcaklıklı bir dondurucuda veya sıvı azotun buhar fazında saklanır. Bu, hücre canlılığını daha uzun süre korur.
Dondurma Süreci ve Ortamı:
HUVEC hücrelerini korumak için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamlarının kullanılması önerilir. Genellikle, dakikada sadece 1 °C'lik bir sıcaklık düşüşüne izin verdiği, hücrelerin şoka girmesini önlediği ve canlılığını koruduğu için yavaş dondurma işlemi önerilir.
Çözme Süreci:
Dondurulmuş hücreleri çözmek için, sadece küçük bir buz parçası kalana kadar 37 °C'de önceden ısıtılmış su banyosuna 40 ila 60 saniye koyun. Ardından, hücrelere taze besiyeri ekleyin ve santrifüjleyin. Bu adım, dondurma besiyerinin kalıntılarını gidermek için gereklidir. Hücre peletini yeniden süspansiyon haline getirin ve hücreleri kültür besiyeri içeren yeni bir şişeye aktarın.
Biyogüvenlik Seviyesi:
HUVEC hücre kültürlerini uygun şekilde işlemek için Biyogüvenlik Seviyesi 1 laboratuvarı gereklidir.
Yayın tarihi: 2023 | Son güncelleme tarihi: Mayıs 2026
Avantajlar ve Sınırlamalar
Diğer insan hücre hatları gibi, HUVEC hücrelerinin de kendine özgü avantajları ve sınırlamaları vardır. Bu bölümde, araştırmalarda kullanımlarını önemli ölçüde etkileyen bazı önemli hususları ele alacağız.
Avantajlar
HUVEC hücrelerinin temel avantajları şunlardır:
-
Endotel Hücre Modeli
Anjiyogenez, vasküler biyoloji ve endotel fonksiyonuyla ilgili hastalıkların incelenmesi için son derece uygun modeller.
-
Kültürlenmesi Kolay
İnsan göbek kordonlarından izole edilmesi nispeten kolaydır. Hücre kültürü gereksinimleri çok titiz değildir ve araştırma laboratuvarlarında bakımı kolaydır.
Sınırlamalar
HUVEC endotel hücre hattıyla ilişkili sınırlamalar şunlardır:
-
Sınırlı Ömür
HUVEC'lerin ömrü sınırlıdır; genellikle 8 ila 10 pasaj için uygundur, bu da uzun vadeli deneyler için bir sınırlamadır. Pasaj sayısı arttıkça yaşlanmaya uğrayabilirler.
Araştırmada HUVEC hücrelerinin uygulamaları
HUVEC hücreleri, biyomedikal alanda çeşitli uygulamalar için önemli bir potansiyele sahiptir. Burada, HUVEC hücrelerinin bazı önemli araştırma kullanımlarını vurgulayacağız.
- Kardiyovasküler Hastalık Çalışmaları: HUVEC hücre hattı, değerli bir endotel hücre modelidir ve bu sayede ateroskleroz, tromboz ve hipertansiyon gibi kardiyovasküler hastalıkların altında yatan mekanizmalar hakkında bilgi sağlar. Araştırmacılar, endotel disfonksiyonu, oksidatif stres ve inflamasyonun altında yatan mekanizmaları araştırmak için bu hücreleri kullanır. Örneğin, 2020 yılında yapılan bir çalışmada HUVEC'ler kullanılmış ve uzun kodlamayan RNA TTTY15'in, miRNA-186-5p eksenini hedefleyerek hipoksiye bağlı vasküler endotel hücre hasarını iyileştirmede önemli bir rol oynadığı ortaya konmuştur [1].
- Kanser Araştırması: HUVEC'ler, vasküler biyolojiyi incelemek için idealdir. Bu nedenle, tümör anjiyogenezi ve endotel hücre etkileşimlerini araştırmak için kullanılırlar. Bu, araştırmacıların tümörlerin nasıl fazla kan akışını elde ettiğini ve çoğaldığını anlamalarına yardımcı olur. Örneğin, Hui Wang ve meslektaşları, oral skuamöz hücreli karsinom (OSCC) hücreleri tarafından salınan ekzozomların, HUVEC hücrelerinde miRNA-210-3p düzeylerini artırdığını ve ephrin A3 ekspresyonunu azalttığını ve HUVEC tüp oluşumu testi ile doğrulandığı üzere PI3K/AKT kaskadını düzenleyerek tüp oluşumunu teşvik ettiğini keşfettiler [2].
- İlaç Testleri: HUVEC endotel hücreleri, ilaç testlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmacılar, HUVEC'leri kullanarak doğal bileşiklerin, nanopartiküllerin ve diğer terapötik ajanların ilaç etkinliğini, toksisitesini ve potansiyel yan etkilerini in vitro olarak değerlendirebilirler. Örneğin, bir çalışmada HUVEC hücreleri kullanılarak Rheum ribes özünden sentezlenen gümüş nanopartiküllerin toksisitesi değerlendirilmiştir [3].
HUVEC hücrelerini konu alan yayınlar
Makalenin bu bölümünde, HUVEC hücrelerini konu alan, sıkça atıf yapılan ve ilgi çekici birkaç araştırma yayını listelenecektir.
Bu çalışma, Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology (2019) dergisinde yayınlanmıştır. Çalışmada, bir nörotransmiter olan Gamma-aminobutirik asidin (GABA), HUVEC hücrelerinde H2O2 kaynaklı oksidatif stresi inhibe ettiği ve bu nedenle oksidatif hasara bağlı kardiyovasküler hastalıklara karşı etkili bir farmakolojik ajan olabileceği belirtilmiştir.
Biochemical and Biophysical Research Communications (2020) dergisinde yayınlanan bu çalışma, östrojenin HUVEC hücrelerinde bir sinyal ileticisi olan glikoprotein130'u (gp130) nasıl düzenlediğini araştırmıştır.
Substrat sertliği, A549 hücreleri ve HUVEC'lerin göç ve anjiyogenez potansiyelini düzenlemiştir
Journal of Cellular Physiology (2017) dergisinde yayınlanan bu araştırma makalesi, değişen substrat sertliğinin endotel hücrelerinin (A549 ve HUVEC'ler) göçü ve anjiyogenezi üzerindeki etkilerini araştırmıştır. Bu etkileri değerlendirmek için HUVEC göçü ve HUVEC anjiyogenez testleri gerçekleştirilmiştir.
Bakır oksit nanopartiküllerinin lizozomal birikimi, HUVEC hücrelerinin ölümünü tetiklemektedir
Biomaterials (2018) dergisinde yayınlanan bu araştırma, vasküler endotel hücrelerinde bakır oksit nanopartiküllerinin toksisitesinden sorumlu olası mekanizmaları incelemektedir.
Medicine (2020) dergisinde yayınlanan bu çalışma, doğal bir bileşik olan quercetin'in, AP-1 ve NF-kB sinyal yollarını düzenleyerek TNF-alfa aracılı HUVEC apoptozunu ve iltihabı bastırdığını öne sürmüştür.
6. HUVEC hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, videolar ve daha fazlası
Aşağıda, HUVEC hücreleri hakkında mevcut birkaç çevrimiçi kaynak bulunmaktadır.
- HUVEC transfeksiyonu: Bu web sitesi bağlantısı, HUVEC transfeksiyonu hakkında kapsamlı bilgiler sunmaktadır. Örneğin, transfeksiyon reaktifleri hakkında bilgiler ve in vitro HUVEC transfeksiyonu için bir protokol içermektedir.
Aşağıdaki bağlantı, HUVEC hücre kültürü protokolünü içerir.
- HUVEC hücre kültürü: Bu belge, subkültür ve kriyoprezervatif kültürlerin işlenmesi için HUVEC hücre kültürü protokollerini öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Referanslar
- Zheng, J., et al., LncRNA TTTY15, kardiyovasküler hastalıklarda miR-186-5p'yi hedefleyerek hipoksiye bağlı vasküler endotel hücre hasarını düzenler. European Review for Medical & Pharmacological Sciences, 2020. 24(6).
- Wang, H., et al., OSCC ekzozomları, PI3K/AKT yoluyla ağız kanseri anjiyogenezini teşvik etmek için EFNA3'ü hedefleyen miR-210-3p'yi düzenler. BioMed research international, 2020. 2020.
- Unal, İ. ve S. Egri, Rheum ribes'in sulu ekstresi kullanılarak gümüş nanopartiküllerin biyosentezi, karakterizasyonu ve HUVEC'ler ile Artemia salina üzerindeki toksisitesinin değerlendirilmesi. Inorganic and Nano-Metal Chemistry, 2022: s. 1-14.