HT-29 Hücre Hattı
HT-29, çok çeşitli kanser ve toksikoloji araştırma uygulamalarına sahip bir insan kolorektal kanser hücre hattıdır. Örneğin, bu hücreler kolorektal kansere karşı standart kemoterapötik tedavilere duyarlıdır. Ayrıca HT-29 hücre hattı, bağırsak epitelinin bakteriyel enfeksiyona tepkisini araştırmak için iyi karakterize edilmiş bir in vitro modeldir. HT-29 hücreleri, olgun bağırsak hücrelerinin, yani enterositlerin özelliklerini taklit eder ve bu nedenle bağlanma ve mekanistik çalışmalar için uygundur.
Bu makale, HT-29 hücre hattı ile çalışmadan önce bilmeniz gereken tüm yönleri kapsayacaktır. Temel olarak şunları içerecektir:
- HT-29 hücreleri: Köken ve genel bilgiler
- HT-29 hücre hattının hücre kültürü bilgileri
- HT-29 hücreleri: Avantajlar ve Sınırlamalar
- HT-29 hücreleri: Uygulamalar
- HT-29 hücreleri üzerine araştırma yayınları
- HT-29 hücreleri Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
1. HT-29 hücreleri: Kökeni ve genel bilgiler
Herhangi bir hücre hattını kullanmadan önce, hücre hattının genel özellikleri ve kökeni hakkında bilgi sahibi olmalısınız. Bu bölüm öğrenmenize yardımcı olacaktır: HT-29 hücreleri nedir? HT-29 bir kolorektal kanser hücre hattı mıdır? HT-29 hücrelerinin morfolojisi nedir?
HT-29 hücre hattı nedir? HT-29, 1964 yılında Trempe ve Fogh tarafından kurulan bir kolorektal adenokarsinom hücre hattıdır. Hücreler başlangıçta kolorektal adenokarsinomlu Kafkasyalı bir kadının (44 yaşında) primer tümöründen türetilmiştir [1]. Kuruluşundan bu yana, bu hücre hattı kanserlerin biyolojisini incelemek için kullanılmıştır.
HT-29 hücrelerinin morfolojisi: HT-29 hücre hattı genellikle epitel benzeri morfolojiye sahiptir. Farklılaşmış hücreler tek tabakalar halinde büyür, sıkı hücre-hücre bağlantıları oluşturur ve apikal bir fırça sınırına sahiptir. Bu hücreler glukoz eksikliği olan ortamda büyütülürse veya bütirat veya asit gibi indükleyiciler verilirse enterosit benzeri özellikler gösterirler.
Hücre boyutu: HT-29 kolorektal kanser hücre hattının çapı 11 μm'dir.
Genom ve ploidi: HT-29 hücre hattı için modal kromozom sayısı 71'dir. Bu sayı 68-72 arasında değişebilir. Ayrıca, HT-29 hücreleri için düzenlenmiş kromozom sayısı hiper-triploiddir ve 2S bileşeni %2,4 oranında görülür.
HT29 MTX nedir? HT29 MTX, orijinal HT-29 insan kolon kanseri hücre hattından 10 µM Metotreksata adaptasyon yoluyla izole edilen metotreksata dirençli bir hücre hattıdır. Bu hücreler mukoza salgılayan olgun goblet hücrelerinin özelliklerini gösterir.
2. HT-29 hücre hattının hücre kültürü bilgileri
Bir hücre hattının temel kültür gereksinimlerini bilmek, onunla çalışmanızı kolaylaştırabilir. Bilmeniz gerekenler: HT-29 hücre hattının ikiye katlanma süresi nedir? HT-29 hücrelerinin ekim yoğunluğu nedir? HT-29 hücreleri için hangi ortam?
|
İki katına çıkma süresi |
HT-29 hücre hattı için ortalama ikiye katlanma süresi 24 saattir. |
|
Yapışık/süspansiyon |
HT-29 yapışık bir hücre hattıdır. |
|
Tohumlama yoğunluğu |
HT-29 hücreleri için önerilen ekim yoğunluğu 3 x104 hücre/cm2'dir. Yetiştirilen hücreler 1 X PBS ile yıkanır ve 8-10 dakika Accutase ile inkübe edildikten sonra ayrılır. Taze ortam eklenir ve hücreler santrifüjlenir. Hücre peleti yeniden süspanse edilir ve hücreler önerilen hücre yoğunluğunda yeni flasklara dağıtılır. |
|
Büyüme ortamı |
HT-29 hücrelerinin optimum kültürü için 2,5 mM L-glutamin ve %10 FBS ile desteklenmiş Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) kullanılır. Besiyeri haftada 2 ila 3 kez değiştirilmelidir. |
|
Büyüme koşulları |
HT-29 hücrelerinin büyümesi için 37°C sıcaklıkta ve %5CO2 beslemeli nemlendirilmiş bir inkübatör gerekir. |
|
Depolama |
Bu hücreler sıvı nitrojenin buhar fazında -195°C'nin altında saklanır. |
|
Dondurma ortamı ve süreci |
HT-29 hücre hattı için kullanılan dondurma ortamı CM-1 veya CM-ACF'dir. Hücreler, sıcaklıkta 1 °C'lik bir düşüşe neden olan ve hücrelerin canlılığını etkin bir şekilde koruyan yavaş bir dondurma işlemiyle dondurulur. |
|
Çözdürme işlemi |
Dondurulmuş HT-29 hücreleri 37°C sıcaklığa ayarlanmış bir su banyosunda çözdürülür. Bu hücreler yeniden süspanse edilebilir ve doğrudan taze büyüme ortamı şişesine dağıtılabilir. Bunun aksine, çözülen hücreler santrifüjlenerek dondurucu ortam elementlerinden arındırılabilir, taze ortamda yeniden süspanse edilebilir ve flasklarda kültürlenebilir. |
|
Biyogüvenlik seviyesi |
HT-29 hücre hattının kullanımı ve bakımı için biyogüvenlik seviyesi 1 kullanılmaktadır. |
3. HT-29 hücreleri: Avantajlar ve Sınırlamalar
Her hücre hattının, onu diğer hücre hatlarından ayıran benzersiz artıları ve eksileri vardır. Bu bölümde HT-29 hücreleri ile ilgili temel avantajlar ve sınırlamalar ele alınacaktır.
Avantajlar
HT-29 hücrelerinin başlıca avantajları şunlardır:
-
Kolay Kültür
HT-29 hücre hattının kullanımı ve bakımı kolaydır, kültürleme için karmaşık gereksinimler yoktur. Araştırma laboratuvarlarında yaygın olarak kültürü yapılmaktadır.
-
Bağırsak Hücrelerinin İn Vitro Modeli
HT-29 hücreleri, belirli kültür koşulları altında olgun bağırsak hücrelerine (enterositler ve mukus üreten hücreler) farklılaşabilir. Gıda sindirimi ve biyoyararlanımını incelemek için hücresel bir model olarak kullanılırlar.
-
Yüksek Transfeksiyon Verimliliği
HT-29 kolon kanseri hücreleri yüksek transfeksiyon verimliliği sunarak gen ekspresyonu ve düzenleme çalışmaları için uygun hale getirir. Hem geçici hem de kararlı transfeksiyon deneyleri çeşitli yöntemler kullanılarak gerçekleştirilebilir.
-
İlaç Hassasiyeti
HT-29 hücreleri, kolon kanseri tedavisinde yaygın olarak kullanılan fluorourasil ve oksaliplatin gibi kemoterapötik ilaçlara duyarlıdır. İlaç direncini incelemek ve kolorektal karsinom için potansiyel terapötik ilaçları taramak için kullanılırlar.
Sınırlamalar
-
Heterojenlik
HT-29 hücreleri, diğer kanser hücre dizileri gibi heterojenlik gösterir ve tek tip bir hücre popülasyonu oluşturmayabilir. Bu durum, belirli tahlillerde sonuçların tekrarlanabilirliğini etkileyebilir ve deney sonuçlarında küçük farklılıklara yol açabilir.
-
Sınırlı Farklılaşma
HT-29 hücreleri sınırlı farklılaşma potansiyeline sahiptir. Bağırsak veya kolon hücrelerine tam olarak farklılaşmazlar ancak sadece birkaç karakteristik özellik sergilerler. Bu sınırlama, daha karmaşık biyolojik süreçlerin incelenmesinde kullanımlarını kısıtlayabilir.
4. hT-29 hücreleri: Uygulamalar
HT-29 hücre hattı, geniş uygulama yelpazesi nedeniyle araştırma laboratuvarlarında yaygın olarak kültüre edilmektedir. Bu bölümde HT-29 hücrelerinin sadece birkaç önemli uygulaması ele alınacaktır.
Kanser araştırmaları: HT-29 bir kolorektal adenokarsinom hücre hattıdır, bu nedenle kanser ilerlemesi, gelişimi ve altta yatan moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılır. 2018'de yapılan bir çalışmada, metastazdan sorumlu hücre moleküllerini araştırmak için HT-29 hücre hattı kullanılmıştır. Bu çalışmada vimentin ve CXCR4 genlerinin hücre metastazını düzenlediği gözlemlenmiştir. Oysa mikroRNA-193a-5p mimiğinin transfekte edilmesi bu genlerin mRNA seviyelerini azaltabilir ve kanser hücresi metastazını başarıyla azaltabilir [2].
Toksikoloji araştırmaları: HT-29 hücre hattı toksikoloji araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu kolorektal karsinom hücreleri, farklı tahliller kullanarak farklı ilaç adaylarının toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Örneğin, bir çalışmada Syzygium cumini etanolik ekstrakt bitkisinin HT-29 hücre hattı üzerindeki toksisite potansiyeli araştırılmıştır. Sonuçlar, HT-29 hücre büyümesinin önemli ölçüde baskılandığını göstererek ekstraktın umut verici anti-kanser özelliklerini ortaya koymuştur [3].
Mikrobiyoloji: HT-29, potansiyel mikropların, yani bakteri ve virüslerin patogenezini araştırmak için bir konak hücre sistemi olarak kullanılabilir. Araştırmacılar HT-29 hücrelerini mikroplarla enfekte ederek virülanslarını ve konak tepkilerini araştırabilirler. Böyle bir çalışmada laktik asit bakterilerinin probiyotik özelliklerini araştırmak için HT-29 hücreleri kullanılmıştır [4]. Başka bir çalışmada, bakteriyofaj tedavilerinin etkinliğini ve güvenliğini değerlendirmek için HT-29 hücreleri kullanılmıştır [5].
5. HT-29 hücreleri üzerine araştırma yayınları
Bu bölüm, araştırma çalışmanızı tasarlamanıza yardımcı olacak HT-29 hücreleri ile ilgili bazı önemli yayınları aydınlatacaktır.
Bu çalışma, Syzygium cumini etanolik ekstraktını kolorektal kanser hücre hattı HT-29'a karşı potansiyel bir anti-kanser ajanı olarak önermiştir. Ekstrakt, kanser hücrelerinin büyümesini önemli ölçüde baskılamıştır.
Bioscience Reports'taki bu yayın, Tetradrine adlı bir bileşiğin HT-29 hücreleri üzerindeki anti-kanser aktivitesini test etti. Sonuçlar, tetrandrinin hücre sinyal yolaklarını düzenleyerek kanser hücresi çoğalmasını ve büyümesini engellediğini ortaya koymuştur.
Bu çalışma miRNA-193a-5p'nin metastazla ilişkili genleri düzenleyerek HT-29 hücre metastazını potansiyel olarak düzenleyebileceğini öne sürmüştür.
Bu makale 2018 yılında Nature Scientific Reports dergisinde yayınlanmıştır. Bu çalışmada, önerilen bakteriyofaj tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için bağırsak hücresel modeli olarak HT-29 tümörijenik hücre hattı kullanılmıştır.
Bu çalışmada araştırmacılar, laktik asit bakterilerinin probiyotik aktivitelerini araştırmak için HT-29 hücrelerini kullandılar. İlginç bir şekilde, çalışma laktobasil bakterilerinin patojenik bakterilerin kolon hücrelerine yapışmasını önlediğini göstermiştir.
6. HT-29 hücreleri Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Bu bölümde HT-29 hücrelerinin bakım, kültür ve transfeksiyon protokollerini öğrenmeye yardımcı olacak bazı çevrimiçi kaynaklar ele alınacaktır.
Hücre kültürü protokolleri
Aşağıdaki kaynaklar HT-29 hücrelerinin alt kültürlenmesi hakkında size yol gösterecektir.
- HT-29 hücrelerinin kültürlenmesi: Bu bağlantı, HT-29 hücrelerinin büyüme ortamı, çözdürülmesi ve alt kültürlenmesi hakkında temel bilgiler sağlayacaktır.
- HT-29 kültürlerinin bakımı: Bu makale HT-29 hücre kültürü ve bakımı hakkında tüm yararlı bilgileri içerir.
Transfeksiyon protokolleri
HT-29 hücre hattı yüksek transfeksiyon verimliliğine sahiptir ve gen ekspresyonu çalışmalarında sıklıkla kullanılır. Aşağıdaki kaynaklar bu hücreler için olası transfeksiyon protokollerini açıklamaktadır.
- HT-29'un Transfekte Edilmesi: Bu web sitesi bağlantısı HT-29 hücrelerinin transfeksiyonu için ayrıntılı protokolü içerir.
- HT-29 hücre hattının transfeksiyonu: Bu doküman HT-29 hücre hattının plazmid DNA ile transfeksiyon protokolünü açıklamaktadır.
HT-29 hücre hattı ile ilgili videolar
İşte bu tümörijenik hücre hattı kültürü ve bakımı ile ilgili bazı videolar.
- Hücre pasajlama: Bu video, yapışık hücre hatları için hücre pasajlama protokolünü göstermektedir.
- HT-29 hücrelerini transfekte etme: Bu video HT-29 hücreleri için kullanılan transfeksiyon yöntemi konusunda size rehberlik edecektir.
Bu makaledeki bilgilerin HT-29 hücre hattı kullanımı ve bakımını gerçekleştirmeniz için değerli ve yeterli olduğunu umuyoruz. Çalışmanızda HT-29 hücrelerini kullanmayı planlıyorsanız bizden sipariş veriniz.
Referanslar
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles, ve I. Recio, HT29 hücre hattı. Gıda Biyoaktiflerinin Sağlık Üzerindeki Etkisi: in vitro ve ex vivo modeller, 2015: s. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., microRNA-193a-5p, metastaz yolağının baskılanması yoluyla insan HT-29 kolon kanseri hücrelerinin göçünü inhibe eder. Hücresel biyokimya dergisi, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean ve R. Safaralizadeh, Syzygium cumini etanolik ekstraktının HT-29 kolorektal hücre hattı üzerindeki anti-kanser etkisinin değerlendirilmesi. Gastrointestinal kanser dergisi, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Laktobasillerin probiyotik özellikleri ve enteropatojenik bakterilerin Caco-2 ve HT-29 hücrelerine yapışmasını inhibe etme yetenekleri. Probiyotikler ve antimikrobiyal proteinler, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J., et al., Bakteriyofajlar, insan hücrelerine sahip bakterilere karşı bakteri kültüründe olduklarından daha virülanstır; HT-29 hücrelerinden elde edilen bilgiler. Bilimsel raporlar, 2018. 8(1): p. 5091.
