HK-2 Hücreleri - Böbrek Araştırmalarında HK-2 Hücreleri ile Böbrek Fonksiyonu ve Patolojisinin İncelenmesi
HK-2, toksikoloji araştırmalarında yaygın olarak kullanılan, ölümsüzleştirilmiş bir insan böbrek epitel hücre hattıdır. Araştırmacılar, çevresel toksinlerin bu böbrek hücreleri üzerindeki etkilerini değerlendirir. Ayrıca, böbrek hastalıklarını ve bunların altında yatan mekanizmaları araştırmak için de HK-2 hücrelerini kullanırlar.
- Büyüme Ortamı
- %10 fetal sığır serumu, 0,05 mg/ml sığır hipofiz ekstresi (BPE) ve 5 ng/ml epidermal büyüme faktörü (EGF) içeren keratinosit hücre hattı besiyeri, ideal HK-2 hücre besiyeridir. Besiyeri haftada 2 ila 3 günde bir değiştirilmelidir.
- Çiftlenme Süresi
- HK-2 hücrelerinin ikiye katlanma süresi 47,3 saat ile 61,7 saat arasında değişmektedir.
- Büyüme Tipi
- HK-2 böbrek epitel hücre hattı yapışkandır.
- Biyogüvenlik Seviyesi
- BSL-2
- Satın Alınabileceği Yer
- Cytion — HK-2 Sipariş Et
- HK-2 hücreleri: Kökeni ve genel özellikleri
- HK-2 hücre hattı: Kültüre alma bilgileri
- HK-2 hücrelerinin avantajları ve sınırlamaları
- Araştırmada HK-2 hücre hattının uygulamaları
- 5. HK-2 hücreleri: Araştırma yayınları
- HK-2 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
- Sıkça sorulan sorular
HK-2 hücreleri: Kökeni ve genel özellikleri
Bir hücre hattının doğru şekilde işlenmesi, bakımı ve kullanımı için hücre hattının kökeni ve genel özelliklerini bilmek zorunludur. Makalenin bu bölümü şu konuları ele alacaktır: İnsan böbreği 2'deki HK-2 hücreleri nedir? HK2'nin rolü nedir? HK2 hücreleri nedir? HK-2 hücre hattının kökeni nedir? HK-2 hücrelerinin boyutu ve morfolojisi nedir?
- İnsan Böbrek 2 (HK-2) hücreleri, Avrupalı bir yetişkinin normal böbrek dokusundan kaynaklanan bir tür proksimal tübüler hücredir. HK-2 hücre hattı, böbrek hücrelerine insan papillomavirüs 16'nın E6/E7 genlerini içeren rekombinant bir retrovirüs transfüze edilerek oluşturulmuştur. Bu deney, sürekli büyüyen bir HK-2 böbrek epitel hücre hattının ölümsüzleştirilmesine ve oluşturulmasına neden olmuştur.
- HK-2 hücreleri epitel morfolojisi sergiler.
- HK-2 hücrelerinin çapı 17,4 -18,6 µm arasında değişmektedir. Ortalama çap 18,2 µm'dir [1].
HK-2 hücre hattı: Kültivasyon bilgileri
İnsan böbrek 2 hücre hattının kültürü hakkında bilgi, bu hücrelerle çalışmaya başlamadan önce size önemli ölçüde yardımcı olabilir. Bu makalenin bu bölümünde, HK-2 hücre kültürüyle ilgili zorunlu bilgiler yer almaktadır. Şunları öğreneceksiniz: HK-2 hücreleri yapışkan mıdır? HK-2 hücrelerinin ikiye katlanma süresi nedir? HK-2 hücrelerini kültürlemek için hangi besiyeri kullanılır?
HK-2 Hücrelerinin Kültürü İçin Önemli Noktalar
Popülasyon Çoğalma Süresi:
HK-2 hücrelerinin ikiye katlanma süresi 47,3 saat ile 61,7 saat arasında değişmektedir.
Yapışkan mı, Süspansiyon Halinde mi:
HK-2 böbrek epitel hücre hattı yapışkandır.
Alt kültürleme oranı:
HK-2 hücreleri 1:2 ila 1:4 oranında alt kültürlenir. Yapışkan HK-2 hücreleri 1 x PBS ile yıkanır ve Accutase çözeltisi eklendikten sonra oda sıcaklığında 8 ila 10 dakika inkübe edilir. Ayrışmış hücrelere kültür ortamı eklenir ve santrifüjlenir. Toplanan hücreler dikkatlice yeniden süspansiyon haline getirilir ve kültürleme için yeni şişelere dökülür.
Büyüme Ortamı:
%10 fetal sığır serumu, 0,05 mg/ml sığır hipofiz ekstresi (BPE) ve 5 ng/ml epidermal büyüme faktörü (EGF) içeren keratinosit hücre hattı besiyeri, ideal HK-2 hücre besiyeridir. Besiyeri haftada 2 ila 3 günde bir değiştirilmelidir.
Büyüme Koşulları:
İnsan böbrek 2 hücre hattı kültürleri, 37°C'de %5 CO2 beslemeli nemlendirilmiş bir inkübatörde tutulur.
Saklama:
Dondurulmuş hücreler, sıvı azotun buhar fazında veya ultra düşük sıcaklıklı bir dondurucuda -150 °C'nin altındaki sıcaklıkta saklanır.
Dondurma Süreci ve Ortamı:
CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamları, HK-2 hücrelerinin dondurulması için idealdir. Kısaca, sıcaklığın dakikada sadece 1 derece düşmesine izin veren ve hücreleri herhangi bir şoktan koruyan yavaş dondurma yöntemi tercih edilir.
Çözme Süreci:
Dondurulmuş hücreler, 37 derece Celsius sıcaklığa ayarlanmış bir su banyosunda çözülür. Bu hücrelere taze kültür ortamı eklenir ve yeniden süspansiyon haline getirilir. Ardından, hücreler büyüme ortamı içeren yeni bir şişeye aktarılır. 24 saat sonra, dondurma ortamı bileşenlerini uzaklaştırmak için ortam değiştirilir.
Biyogüvenlik Seviyesi:
HK-2 hücre kültürleri, biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvarlarda muhafaza edilir.
HK-2 Hücrelerinin Avantajları ve Sınırlamaları
HK-2, yaygın olarak kullanılan bir insan proksimal tübül epitel hücre hattıdır. Diğer hücre hatları gibi, bu hücre hattının da bazı avantajları ve sınırlamaları vardır. Bu bölümde, insan böbrek 2 hücre hattının bazı temel artıları ve eksileri ele alınacaktır.
Avantajlar
HK-2 hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
İyi karakterize
HK-2 hücre hattı, morfolojisi, boyutu ve genomu açısından kapsamlı bir şekilde karakterize edilmiştir. Bu normal böbrek hücreleri üzerinde çok sayıda araştırma çalışması yapılmıştır.
Ölümsüzleştirilmiş
HK-2, ömrü uzatılmış, birkaç pasaj boyunca çoğaltılabilen sürekli bir hücre hattıdır. Bu özellik, laboratuvar deneyleri için sürekli hücre teminini garanti eder.
Proksimal tübül epitel özellikleri
HK-2 hücreleri, insan böbreğinde bulunan proksimal tübül hücrelerinin (PTC) iyi farklılaşmış fenotip özelliklerini sergiler. Bu benzersiz özellik, HK-2 hücrelerini böbrek fizyolojisi, hücre süreçleri ve çeşitli uyaranlara verilen tepkileri incelemek için değerli bir in vitro model haline getirir.
Sınırlamalar
HK-2 hücre hattının bazı sınırlamaları şunlardır:
İn vitro model
HK-2, normal böbrek hücrelerinin in vitro modeli olarak işlev görür ve özellikle proksimal tübül epitel hücrelerinin özelliklerini sergiler. Ancak, insan böbrek dokusunun ve in vivo ortamda bulunan mikroortamın karmaşıklığını tam olarak yansıtmayabilir.
Araştırmada HK-2 hücre hattının uygulamaları
HK-2 hücre hattı, toksikoloji araştırmalarında çok sayıda uygulamaya sahiptir. Burada, bu insan proksimal tübüler hücre hattının bazı spesifik ve önemli araştırma kullanımlarını ele aldık.
- Böbrek fizyolojisi: HK-2 hücreleri, normal böbrek fizyolojisi ve işlevlerini incelemek için yaygın olarak kullanılır. Araştırmacılar, iyon kanallarını, taşıma süreçlerini ve böbrek homeostazını düzenleyen diğer hücresel mekanizmaları araştırmak için bu proksimal tübül epitel hücrelerini kullanır. Örneğin, araştırmacılar, bir neolignan olan (+)-Conocarpan (CNCP) tarafından HK-2 böbrek epitel hücrelerinde indüklenen hücre ölümünde Geçici Reseptör Potansiyeli Kanal 6 (TRPC6) kanallarının rolünü incelemiştir [2].
- Böbrek hastalıkları: İnsan böbrek 2 hücre hattı, akut böbrek hasarı ve diyabetik nefropati gibi farklı böbrek hastalıklarını ve bunların altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları araştırmak için kullanılır. Örneğin, yapılan bir araştırma, klotho proteininin metilasyon düzeylerinin böbrek hasarıyla bağlantılı olduğunu ortaya koymuştur. Klotho gen promotörünün metilasyonunun azaltılması, ekspresyonunu artırabilir ve diyabetik db/db fare modellerinde ve yüksek glikoz ile tedavi edilen HK-2 hücrelerinde indüklenen böbrek hasarını hafifletebilir [3].
- Toksikoloji çalışmaları: HK-2 hücreleri, çeşitli ilaçların, kimyasalların ve çevresel kirleticilerin potansiyel etkilerini değerlendirmek için harika bir araştırma aracıdır. Bu çalışmalar, araştırmacıların ilaç güvenliğini ve böbrek hücreleri üzerindeki yan etkileri değerlendirmesine yardımcı olabilir. Örneğin, 2022'de yayınlanan bir çalışmada, doğal bir bitki olan Polygonatumkingianum (PK) polisakkaritlerinin ve sulu ekstraktının, HK-2 hücrelerinde uranyum kaynaklı nefrotoksisite üzerindeki potansiyel etkileri değerlendirilmiştir. Araştırmacılar, PK'nin koruyucu etkiler gösterdiğini ve böbrek hücrelerinde uranyum zehirlenmesini önlediğini bulmuşlardır [4].
5. HK-2 hücreleri: Araştırma yayınları
Aşağıda, HK-2 böbrek epitel hücrelerini konu alan bazı ilginç araştırma yayınları yer almaktadır.
Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) dergisinde yayınlanan bu çalışma, dairesel RNA HIPK3'ün yüksek glikoz toksisitesinin neden olduğu HK-2 hücre proliferasyon inhibisyonunu azaltabileceğini öne sürmüştür. Ayrıca, miR-326/miR-487a-3p/SIRT1 kaskadını düzenleyerek hücre ölümünü engelleyebilir.
Nanomedicine (2020) dergisinde yayınlanan bu araştırma, 786-0 kanser hücreleri ve HK-2 proksimal tübül epitel hücrelerinde altın nanopartiküllerin (AuNPs) farklı toksisite mekanizmalarını değerlendirmiştir.
Bu makale Renal Failure (2022) dergisinde yayınlanmıştır. Bulgular, mikroRNA-320c'nin PTEN'i hedef alarak ve PI3K/AKT sinyalini inhibe ederek böbrek hücrelerinde (HK-2) yüksek glikozun neden olduğu toksisiteyi azaltabileceğini belirtmektedir.
Tissue Engineering Part A (2022) dergisinde yayınlanan bu çalışma, mezenkimal kök hücrelerden türetilen ekzozomların HK-2 böbrek hücrelerinin epitelyal-mezenkimal geçişini önlediğini öne sürmüştür.
Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) dergisinde yayınlanan makalede, lncRNA TapSAKI'nin mikroRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB sinyal yolunu düzenleyerek HK-2 iltihaplanma tepkisini ve hücre ölümünü artırdığı belirtilmektedir.
HK-2 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
HK-2, ünlü bir hücre hattıdır. İşte HK-2 hücre kültürü protokolünü açıklayan bazı kaynaklar.
- HK-2 hücre kültürü: Bu web sitesi, HK-2 hücre kültürü bilgileriyle zenginleştirilmiştir. Örneğin, HK-2 hücre besiyeri tarifi, pasaj protokolü ve proliferatif ve kriyoprezervatif kültürlerin işlenmesi ve bakımı için protokol sağlar.
- Hücre pasajı: Bu video, yapışkan hücre hatları için genel bir bölme veya pasaj protokolünü öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Referanslar
- Handl, J. ve ark., Tekrarlanan pasajlamanın insan proksimal tübüler HK-2 hücrelerinin toksik bileşiklere duyarlılığı üzerindeki etkisi. Fizyolojik Araştırma, 2020. 69(4): s. 731.
- Yang, G., et al., TRPC6 kanallarının aktivasyonu, HK-2 hücrelerinde (+)-conocarpan kaynaklı apoptotik hücre ölümüne katkıda bulunur. Gıda ve Kimyasal Toksikoloji, 2019. 129: s. 281-290.
- Yang, X.H., ve ark., EGCG, diyabetik db/db farelerde ve HK-2 hücrelerinde klotho hipermetilasyonunu tersine çevirerek böbrek hasarını hafifletir. Oksidatif Tıp ve Hücresel Uzun Ömür, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Polygonatum kingianum polisakkaritleri ve sulu ekstraktının insan böbrek (HK-2) hücrelerinde uranyum kaynaklı toksisite üzerindeki koruyucu etkileri. International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: s. 68-79.