DLD-1 Hücreleri: DLD-1 Hücrelerinin Kolorektal Kanser Araştırmalarındaki Uygulamaları ve Öngörüleri
DLD-1, kanser araştırmalarında yaygın olarak kullanılan bir insan kolorektal karsinom hücre hattıdır. Tümör gelişimi, ilerlemesi, altta yatan moleküler mekanizmalar ve terapötik ajanlara yanıt dahil olmak üzere kolon kanserinin çeşitli yönlerini araştırmak için değerli bir araçtır. Bu nedenle DLD-1, hastalığın anlaşılmasında ve potansiyel tedavi stratejilerinin geliştirilmesinde öne çıkmaktadır.
Bu makale, DLD-1 hücre hattı ile çalışmadan önce bilmeniz gereken önemli bilgiler sağlayacaktır. Kapsayacaktır:
- DLD-1 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
- DLD-1 hücre hattının kültürleme bilgileri
- DLD-1 hücre hattı: Avantajlar ve Sınırlamalar
- DLD-1 hücre hattının araştırma uygulamaları
- DLD-1 hücreleri üzerine araştırma yayınları
- DLD-1 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
1. DLD-1 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Bir hücre hattı üzerinde çalışmadan önce, bir araştırmacının ilk göz önünde bulundurması gereken şey, bu hattın kökeni ve genel özellikleridir. Bu makale bölümü DLD-1 hücre hattına ayrıntılı bir giriş niteliğindedir. Aşağıdaki sık sorulan soruları kapsayacaktır: DLD-1 hücreleri nedir? DLD-1 kanser hücre hattı nedir? DLD-1 hücre hattı mutasyonları nelerdir? DLD-1 hücresinin boyutu nedir? DLD-1 hücrelerinin morfolojisi nedir?
- Bir kolon kanseri hücre hattı olan DLD-1, 67 yaşında kolorektal adenokarsinomlu bir erkek hastanın kalın bağırsağından köken almıştır. D.L. Dexter ve meslektaşları tarafından 1977-1979 yılları arasında izole edilmiştir. Bu hücre hattı HCT-8, HCT-15 ve HRT-18 hücre hatları ile aynı kökeni paylaşmaktadır.
- Kolorektal kanserler gibi DLD-1 hücreleri de mikrosatellit instabilite fenotipine sahiptir [1].
- DLD-1 mutasyonları KRAS, P53, BRAF, BRCA1 ve BRCA2'yi içerir. DLD-1 P53 durumu, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 ve DLD-1 KRAS mutasyonu nedeniyle, bu hücrelerin kanser çalışmaları için ideal olduğu düşünülmektedir.
- Bu hücreler epitel benzeri bir morfolojiye sahiptir.
- DLD-1 hücre hattının boyutu yaklaşık 15 µm'dir.
- İnsan kolorektal kanser hücre hattı DLD-1, psödodiploid bir karyotipe sahiptir. Hücrelerin yaklaşık %86'sı 46 modal kromozom sayısına sahiptir. Bununla birlikte, hücre popülasyonunun %17,1'inde poliploidi de mevcut olabilir.
2.dLD-1 hücre hattının kültürleme bilgileri
Herhangi bir hücre hattını kültüre almadan önce, temel hücre kültürü gereksinimlerini bilmeniz gerekir. Bu bölümde DLD-1 hücre hattı üzerinde çalışmaya başlamadan önce öğrenmeniz gereken önemli noktalar vurgulanacaktır. Buna şunlar dahildir: DLD-1 ikiye katlanma süresi nedir? DLD-1 kültür ortamı nedir? DLD-1 hücrelerinin ekim yoğunluğu nedir? DLD-1 hücrelerini nasıl kültüre alırsınız?
DLD-1 Hücrelerini Kültürlemek için Önemli Noktalar
|
İki Katına Çıkma Süresi: |
DLD-1 ikiye katlanma süresi yaklaşık 15 saattir. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
DLD-1 yapışık bir insan kolon kanseri hücre hattıdır. Hücreler tek tabakalar halinde büyür. |
|
Tohumlama Yoğunluğu: |
DLD-1 hücreleri 1 ila 2 x104 hücre/cm2 yoğunlukta ekilir. Yapışık hücreler 1x fosfat tampon salin (PBS) ile yıkanır ve ortam sıcaklığında pasajlama solüsyonu (Accutase) ile inkübe edilir. 8 ila 10 dakikalık inkübasyondan sonra, ayrılan hücreler kültür ortamına eklenir ve santrifüjlenir. Hücre peleti daha sonra dikkatlice yeniden süspanse edilir ve hücreler büyüme ortamı içeren yeni kültür kaplarına dökülür. |
|
Büyüme Ortamı: |
DLD-1 hücrelerini kültürlemek için %10 fetal sığır serumu FBS, 2,1 mM stabil Glutamin ve 2,0 g/L NaHCO3 içeren ortam takviyeli RPMI 1640 kullanılır. Ortam haftada 2-3 kez değiştirilmelidir. |
|
Büyüme Koşulları: |
DLD-1 kültürleri 37°C nemlendirilmiş inkübatörde %5 CO2 kaynağı ile muhafaza edilir. |
|
Depolama: |
DLD-1 hücreleri sıvı nitrojenin buhar fazında veya elektrikli ultra düşük sıcaklıklı dondurucuda (-150°C sıcaklığın altında) saklanır. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortam: |
DLD-1 hücrelerini dondurmak için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamı kullanılabilir. Sıcaklıkta kademeli olarak 1°C'lik bir düşüşe izin veren, böylece hücrelerin şok olmasını önleyen ve canlılıklarını koruyan yavaş bir dondurma işlemi her zaman tavsiye edilir. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş hücreler, 37 °C sıcaklığa önceden ayarlanmış bir su banyosunda 40 ila 60 saniye boyunca küçük bir buz kümesi kalana kadar çözdürülür. Daha sonra hücreler taze bir besiyerine eklenir ve santrifüjlenir. Bu adım, donmuş ortam bileşenlerini hücrelerden uzaklaştırmak için gereklidir. Toplanan hücreler bir büyüme ortamında yeniden süspanse edilir ve büyüme için şişeye dağıtılır. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: |
DLD-1 hücre hattı biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvarlarında muhafaza edilmektedir. |
3.dLD-1 hücre hattı: Avantajlar ve Sınırlamalar
Makalenin bu bölümünde, DLD-1 kolon kanseri hücre hattının avantajlarını ve sınırlamalarını gözden geçireceğiz.
Avantajlar
DLD-1 hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
|
Kolorektal Kanser Modeli |
DLD-1 hücreleri, DLD-1 KRAS mutasyonu, DLD-1 BRCA ve DLD-1 BRCA2 gibi kolorektal kanser hastalarında yaygın olarak bulunan mutasyonlara sahiptir. Bu ilişki, onları bu hastalığı incelemek için klinik olarak uygun bir hücre modeli haline getirmektedir. |
|
Tümörijenik Hücre Hattı |
DLD-1 hücreleri tümörijeniktir. Çıplak farelere enjekte edildiklerinde tümörlere neden olabilirler. Bu nedenle araştırmacılar bu hücreleri, in vivo tümör oluşumu, gelişimi ve ilerlemesini araştırmaya yardımcı olan ksenograft tümör modelleri geliştirmek için kullanmaktadır. |
Sınırlamalar
DLD-1 hücreleri ile ilgili sınırlamalar şunlardır:
|
Heterojenlik |
DLD-1 kolon kanseri hücre popülasyonları genetik ve fenotipik heterojenlik sergiler. Bu durum, araştırma sonuçlarının genellenebilirliğini etkileyebilir. |
4.dLD-1 hücre hattının araştırma uygulamaları
DLD-1 hücre hattı kanser araştırmalarında bir dizi uygulama sunmaktadır. Öne çıkan bazı uygulamalar bu bölümde ele alınmaktadır.
- Kanser çalışması: DLD-1 hücreleri, kolorektal kanser büyümesi, gelişimi ve ilerlemesinin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için değerli bir in vitro model olarak hizmet eder. Ayrıca, gen ekspresyonunu, sinyal yollarını ve spesifik genetik mutasyonların kanser hücresi davranışı üzerindeki etkisini incelemek için kullanılırlar. 2022'de yapılan bir araştırmada PI3K/Akt/YAP sinyal kaskadının DLD-1 kolorektal kanser hücre hattının göçünü ve istilasını düzenlediği gözlemlenmiştir [2].
- İlaç geliştirme: Araştırmacılar, anti-kanser ilaçlarının etkinliğini test etmek ve kolon kanseri tedavisi için potansiyellerini değerlendirmek için DLD-1 hücre hattını kullanmaktadır. Bu, ilaç geliştirmeye ve hastalıkla etkin bir şekilde mücadele etmeye yardımcı olur. 2022'de yapılan bir çalışmada DLD-1 kanser hücre hattı kullanılmış ve kimyasal olarak sentezlenmiş bileşikler olan silikon ftalosiyaninlerin anti-kanser aktivitesi araştırılmıştır. Çalışma sonuçları, bu bileşiklerin güçlü anti-kanser ajanları olduğunu göstermiştir [3]. İlginç bir şekilde, başka bir araştırma DLD-1 hücrelerini kullanarak probiyotik türevli bir P8 proteininin anti-kanser potansiyelini bulmuştur [4].
5.dLD-1 hücreleri üzerine araştırma yayınları
Bu bölümde DLD-1 kolon karsinom hücre hattını içeren birkaç ilginç ve sıkça atıfta bulunulan yayın vurgulanacaktır.
Bu yayın Nature (2022) Biyolojik Olarak Aktif Ürünler Dergisi'nde yer almaktadır. Çalışma, bir flavonoid olan diosmin'in DLD-1 hücrelerinde hücre ölümünü indüklediğini ve ayrıca hücre döngüsünün durmasına neden olduğunu; bu nedenle potansiyel bir anti-kanser ajanı olabileceğini buldu.
Bromelain, ferroptozu uyararak Kras-mutant kolorektal kanseri etkili bir şekilde baskılar
Animal Cells and Systems (2018) dergisinde yayımlanan bu çalışmada, bir enzim olan bromelainin DLD-1 KRAS mutasyonunu baskıladığı ve güçlü sitotoksik etkiler gösterdiği öne sürülmüştür.
Bu araştırma makalesi 2019 yılında "Environmental Toxicology" dergisinde yayımlandı. Çalışmada, DLD-1 korektal hücre hattı kullanılarak doğal bir bileşik olan Bergapten'in anti-tümör etkileri araştırılmıştır.
Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) dergisinde yer alan bu çalışmada , kurkumin/demir oksit nanokompozitlerinin DLD-1 kolorektal kanser hücrelerine karşı oldukça etkili olduğubulunmuştur .
Bu araştırma makalesi 2020 yılında Türk Biyoloji Dergisi'nde yayımlandı. Çalışma, DLD-1 hücrelerinde AKT'nin doğal bir ürün olan epibrassinolid aracılı aktivasyonunun, poliaminlerle ilişkili otofajiyi uyardığını öne sürmüştür.
6.dLD-1 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Aşağıda DLD-1 hücreleri hakkında birkaç kaynak bulunmaktadır:
- DLD-1 transfeksiyonu: Bu eğitim videosu DLD-1 in vitro transfeksiyon protokolü hakkında kapsamlı bir rehberdir.
- DLD-1 hücreleri: Bu araştırma makalesi, ortam ve kültür koşulları dahil olmak üzere DLD-1 hücre kültürü gereksinimlerini kısaca açıklamaktadır. Ayrıca, DLD-1 hücreleri için kullanılan transfeksiyon protokolünü öğrenmenize yardımcı olabilir.
Aşağıdaki bağlantılar, insan kaynaklı kolon kanseri hücreleri olan DLD-1'in kültürüne yönelik protokolü içermektedir.
- DLD-1 hücre hattı: Bu web sitesi DLD-1 hücre hattı hakkında temel bilgiler sağlayacaktır. Dondurulmuş ve çoğalan kültürlerin alt kültürlenmesi ve işlenmesi dahil olmak üzere farklı DLD-1 hücre kültürü protokollerini öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Referanslar
- Gavrilas, L.I., et al., Kolorektal kanserde resveratrol ve curcumin ile tekli ve kombinatoryal tedaviler için yeni hedefler olarak pro-apoptotik genler. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., ve diğerleri, PI3K/Akt/YAP sinyalizasyonuDLD-1kolorektal kanser hücrelerinin göçünü ve istilasını teşvik eder. Onkoloji Mektupları, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., ve diğerleri, Yeni silikon ftalosiyaninlerin kolorektal adenokarsinom hücre hattına (DLD-1) karşı antikanser aktivitesi. New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Kolorektal Kanser Hücre Hattı DLD-1'de Probiyotik Türevli P8 Proteininin Anti-Kanser Rolleri. Uluslararası Moleküler Bilimler Dergisi, 2023. 24(12): p. 9857.