DLD-1 Hücreleri: Kolorektal Kanser Araştırmalarında DLD-1 Hücrelerinin Uygulamaları ve Bulguları
DLD-1, kanser araştırmalarında yaygın olarak kullanılan bir insan kolorektal karsinom hücre hattıdır. Tümör gelişimi, ilerlemesi, altta yatan moleküler mekanizmalar ve terapötik ajanlara yanıt dahil olmak üzere kolon kanserinin çeşitli yönlerini araştırmak için değerli bir araçtır. Bu nedenle, DLD-1, hastalığı anlamak ve potansiyel tedavi stratejileri geliştirmek açısından olağanüstü bir öneme sahiptir.
- Büyüme Ortamı
- DLD-1 hücrelerinin kültürlenmesi için %10 fetal sığır serumu (FBS), 2,1 mM stabil glutamin ve 2,0 g/L NaHCO3 içeren besin takviyeli RPMI 1640 kullanılır. Besiyeri haftada 2-3 kez değiştirilmelidir.
- İkiye Katlanma Süresi
- DLD-1'in ikiye katlanma süresi yaklaşık 15 saattir.
- Büyüme Tipi
- DLD-1, yapışkan bir insan kolon kanseri hücre hattıdır. Hücreler tek tabaka halinde büyür.
- Biyogüvenlik Seviyesi
- BSL-1
- Temin Edilebilir
- Cytion — DLD-1 Siparişi
- DLD-1 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
- DLD-1 hücre hattının kültürleme bilgileri
- DLD-1 hücre hattı: Avantajlar ve Sınırlamalar
- DLD-1 hücre hattının araştırma uygulamaları
- 5. DLD-1 hücreleri ile ilgili araştırma yayınları
- DLD-1 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
- Sıkça sorulan sorular
DLD-1 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Bir hücre hattı üzerinde çalışmaya başlamadan önce, bir araştırmacının ilk dikkate alması gereken husus, hücre hattının kökeni ve genel özellikleridir. Bu makale bölümü, DLD-1 hücre hattına ilişkin ayrıntılı bir giriş niteliğindedir. Aşağıdaki sık sorulan soruları ele alacaktır: DLD-1 hücreleri nedir? DLD-1 kanser hücre hattı nedir? DLD-1 hücre hattındaki mutasyonlar nelerdir? DLD-1 hücresinin boyutu nedir? DLD-1 hücrelerinin morfolojisi nedir?
- Kolon kanseri hücre hattı olan DLD-1, kolorektal adenokarsinomlu 67 yaşındaki bir erkek hastanın kalın bağırsağından elde edilmiştir. 1977-1979 yılları arasında D.L. Dexter ve meslektaşları tarafından izole edilmiştir. Bu hücre hattı, HCT-8, HCT-15 ve HRT-18 hücre hatlarıyla aynı kökeni paylaşmaktadır.
- Kolorektal kanserler gibi, DLD-1 hücreleri de mikrosatellit instabilitesi fenotipine sahiptir [1].
- DLD-1 mutasyonları arasında KRAS, P53, BRAF, BRCA1 ve BRCA2 bulunur. DLD-1 P53 durumu, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 ve DLD-1 KRAS mutasyonu nedeniyle bu hücreler kanser çalışmaları için ideal kabul edilir.
- Bu hücreler epitel benzeri bir morfolojiye sahiptir.
- DLD-1 hücre hattının boyutu yaklaşık 15 µm'dir.
- İnsan kolorektal kanser hücre hattı DLD-1, psödodiploid karyotipe sahiptir. Hücrelerin yaklaşık %86'sı 46 modal kromozom sayısına sahiptir. Ancak, hücre popülasyonunun %17,1'inde poliploidi de bulunabilir.
DLD-1 hücre hattının kültürleme bilgileri
Herhangi bir hücre hattını kültürlemeden önce, temel hücre kültürü gereksinimlerini bilmeniz gerekir. Bu bölümde, DLD-1 hücre hattı üzerinde çalışmaya başlamadan önce öğrenmeniz gereken önemli noktalar ele alınacaktır. Bunlar arasında şunlar yer almaktadır: DLD-1 ikiye katlanma süresi nedir? DLD-1 kültür ortamı nedir? DLD-1 hücrelerinin tohumlama yoğunluğu nedir? DLD-1 hücreleri nasıl kültürlenir?
DLD-1 Hücrelerini Kültüre Etmenin Önemli Noktaları
Çoğalma Süresi:
DLD-1'in ikiye katlanma süresi yaklaşık 15 saattir.
Yapışkan mı, Süspansiyon mu:
DLD-1, yapışkan bir insan kolon kanseri hücre hattıdır. Hücreler tek tabaka halinde büyür.
Tohumlama Yoğunluğu:
DLD-1 hücreleri, 1 ila 2 x 104 hücre/cm2 yoğunluğunda ekilir. Yapışkan hücreler, 1x fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkanır ve ortam sıcaklığında pasaj çözeltisi (Accutase) ile inkübe edilir. 8 ila 10 dakikalık inkübasyondan sonra, ayrılan hücreler kültür ortamına eklenir ve santrifüjlenir. Hücre peleti daha sonra dikkatlice yeniden süspansiyon haline getirilir ve hücreler, büyüme ortamı içeren yeni kültür kaplarına dökülür.
Büyüme Ortamı:
DLD-1 hücrelerinin kültürlenmesi için %10 fetal sığır serumu (FBS), 2,1 mM stabil glutamin ve 2,0 g/L NaHCO3 içeren ortam takviyeleri ile RPMI 1640 kullanılır. Ortam haftada 2-3 kez değiştirilmelidir.
Büyüme Koşulları:
DLD-1 kültürleri, %5 CO2 beslemeli, 37°C nemlendirilmiş bir inkübatörde muhafaza edilir.
Saklama:
DLD-1 hücreleri, sıvı azotun buhar fazında veya elektrikli ultra düşük sıcaklık dondurucusunda (-150°C'nin altında) saklanır.
Dondurma Süreci ve Ortamı:
DLD-1 hücrelerini dondurmak için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamları kullanılabilir. Sıcaklığın 1°C'lik kademeli bir düşüşe izin veren yavaş bir dondurma işlemi her zaman tavsiye edilir; bu sayede hücrelerin şoka girmesi önlenir ve canlılıkları korunur.
Çözme Süreci:
Dondurulmuş hücreler, küçük bir buz topakçığı kalana kadar 37 °C sıcaklığa önceden ayarlanmış bir su banyosunda 40 ila 60 saniye boyunca çözülür. Daha sonra hücreler taze bir besiyerine eklenir ve santrifüjlenir. Bu adım, hücrelerden dondurma besiyeri bileşenlerini uzaklaştırmak için gereklidir. Toplanan hücreler bir büyüme besiyerinde yeniden süspansiyon haline getirilir ve büyüme için şişeye aktarılır.
Biyogüvenlik Seviyesi:
DLD-1 hücre hattı, biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvarlarda muhafaza edilir.
DLD-1 hücre hattı: Avantajlar ve Sınırlamalar
Makalenin bu bölümünde, DLD-1 kolon kanseri hücre hattının avantajlarını ve sınırlamalarını gözden geçireceğiz.
Avantajlar
DLD-1 hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
Kolorektal Kanser Modeli
DLD-1 hücreleri, DLD-1 KRAS mutasyonu, DLD-1 BRCA ve DLD-1 BRCA2 gibi kolorektal kanser hastalarında sıklıkla görülen mutasyonlara sahiptir. Bu benzerlik, onları bu hastalığı incelemek için klinik olarak uygun bir hücre modeli haline getirir.
Tümör Oluşturucu Hücre Hattı
DLD-1 hücreleri tümörjeniktir. Çıplak farelere enjekte edildiğinde tümörlere neden olabilirler. Bu nedenle, araştırmacılar bu hücreleri, in vivo olarak tümör oluşumu, gelişimi ve ilerlemesini araştırmaya yardımcı olan ksenograft tümör modelleri geliştirmek için kullanmaktadır.
Sınırlamalar
DLD-1 hücreleriyle ilişkili sınırlamalar şunlardır:
Heterojenlik
DLD-1 kolon kanseri hücre popülasyonları genetik ve fenotipik heterojenlik gösterir. Bu durum, araştırma sonuçlarının genelleştirilebilirliğini etkileyebilir.
DLD-1 hücre hattının araştırma uygulamaları
DLD-1 hücre hattı, kanser araştırmalarında bir dizi uygulama alanı sunmaktadır. Bu bölümde bazı önemli uygulamalar ele alınmaktadır.
- Kanser çalışması: DLD-1 hücreleri, kolorektal kanserin büyümesi, gelişimi ve ilerlemesinin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için değerli bir in vitro model görevi görür. Ayrıca, gen ekspresyonu, sinyal yolakları ve belirli genetik mutasyonların kanser hücresi davranışına etkisini incelemek için kullanılırlar. 2022 yılında yapılan bir araştırmada, PI3K/Akt/YAP sinyal kaskadının DLD-1 kolorektal kanser hücre hattının göçünü ve istilasını düzenlediği gözlemlenmiştir [2].
- İlaç geliştirme: Araştırmacılar, anti-kanser ilaçlarının etkinliğini test etmek ve kolon kanseri tedavisi için potansiyellerini değerlendirmek amacıyla DLD-1 hücre hattını kullanmaktadır. Bu, ilaç geliştirmeye ve hastalıkla verimli bir şekilde mücadeleye yardımcı olmaktadır. 2022 yılında yapılan bir çalışmada, DLD-1 kanser hücre hattı kullanılarak, kimyasal olarak sentezlenmiş bileşikler olan silikon ftalosiyaninlerin anti-kanser aktivitesi araştırılmıştır. Çalışma sonuçları, bu bileşiklerin güçlü anti-kanser ajanları olduğunu ortaya koymuştur [3]. İlginç bir şekilde, başka bir araştırma, DLD-1 hücrelerini kullanarak probiyotik kaynaklı P8 proteininin anti-kanser potansiyelini ortaya çıkarmıştır [4].
5. DLD-1 hücreleri üzerine araştırma yayınları
Bu bölümde, DLD-1 kolon karsinomu hücre hattını ele alan, ilgi çekici ve sıkça atıf yapılan birkaç yayın öne çıkarılacaktır.
Bu yayın, Journal of Biologically Active Products from Nature (2022) dergisinde yer almaktadır. Çalışma, bir flavonoid olan diosminin DLD-1 hücrelerinde hücre ölümünü indüklediğini ve ayrıca hücre döngüsünün durmasına neden olduğunu ortaya koymuştur; bu nedenle, diosmin potansiyel bir anti-kanser ajanı olabilir.
Bromelain, ferroptozu uyararak Kras mutasyonlu kolorektal kanseri etkili bir şekilde bastırır
Animal Cells and Systems (2018) dergisinde yayınlanan bu çalışma, bir enzim olan bromelainin DLD-1 KRAS mutasyonunu baskıladığını ve güçlü sitotoksik etkiler gösterdiğini öne sürmüştür.
Bu araştırma makalesi 2019 yılında “Environmental Toxicology” dergisinde yayınlanmıştır. Çalışma, bir DLD-1 kolorektal hücre hattı kullanarak doğal bir bileşik olan Bergapten’in anti-tümör etkilerini araştırmıştır.
Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) dergisinde yayınlanan bu çalışma, kurkumin/demir oksit nanokompozitlerinin DLD-1 kolorektal kanser hücrelerine karşı oldukça etkili olduğunu ortaya koymuştur.
Bu araştırma makalesi 2020 yılında Turkish Journal of Biology dergisinde yayınlanmıştır. Çalışma, DLD-1 hücrelerinde epibrassinolide aracılı AKT aktivasyonunun, poliaminlerle ilişkili otofajiyi uyardığını öne sürmüştür.
DLD-1 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Aşağıda DLD-1 hücreleri ile ilgili birkaç kaynak bulunmaktadır:
- DLD-1 transfeksiyonu: Bu video eğitimi, DLD-1 in vitro transfeksiyon protokolü hakkında kapsamlı bir kılavuzdur.
- DLD-1 hücreleri: Bu araştırma makalesi, besiyeri ve kültür koşulları dahil olmak üzere DLD-1 hücre kültürü gereksinimlerini kısaca açıklamaktadır. Ayrıca, DLD-1 hücreleri için kullanılan transfeksiyon protokolünü öğrenmenize yardımcı olabilir.
Aşağıdaki bağlantılar, insan kaynaklı kolon kanseri hücreleri olan DLD-1'in kültürlenmesi için protokolü içerir.
- DLD-1 hücre hattı: Bu web sitesi, DLD-1 hücre hattı hakkında temel bilgiler sunmaktadır. Bu site, subkültürleme ve kriyoprezervasyonlu ve proliferatif kültürlerin işlenmesi dahil olmak üzere farklı DLD-1 hücre kültürü protokollerini öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Kaynakça
- Gavrilas, L.I. ve ark., Kolorektal kanserde resveratrol ve kurkumin ile tekli ve kombinasyonel tedaviler için yeni hedefler olarak pro-apoptotik genler. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP sinyalleşmesi, DLD‑1 kolorektal kanser hücrelerinin göçünü ve istilasını teşvik eder. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Kolorektal adenokarsinom hücre hattına (DLD-1) karşı yeni silikon ftalosiyaninlerin antikanser aktivitesi. New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863-19873.
- An, B.C., ve ark., Kolorektal Kanser Hücre Hattı DLD-1'de Probiyotik Kaynaklı P8 Proteininin Anti-Kanser Rolleri. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.