BV2 Hücreleri - BV2 Mikroglia Hücreleri ile Açıklanan Merkezi Sinir Sistemi Araştırması
BV2, sinirbilim araştırmalarında yaygın olarak kullanılan fare kaynaklı bir mikroglial hücre hattıdır. Bu ölümsüzleştirilmiş hücre hattı, nörodejeneratif hastalıkları ve ilişkili hücre koşullarını ve süreçlerini, yani nöroinflamasyonu incelemek için in vitro bir model olarak hizmet edebilir. Ayrıca, BV2 hücreleri primer mikroglia için alternatif bir model sistem olarak kabul edilmektedir.
Bu makalede, bir fare mikroglial hücre hattı olan BV2'nin kökeni, hücre kültürü bilgileri ve araştırma uygulamaları tartışılacaktır. Özellikle, aşağıdakileri gözden geçireceğiz:
- BV2 hücrelerinin kökeni ve genel özellikleri
- BV2 hücre hattı: Kültürleme bilgileri
- BV2 hücrelerinin avantajları ve sınırlamaları
- BV2 hücre hattının araştırma alanındaki uygulamaları
- BV2 hücreleri: Araştırma yayınları
- BV2 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
1. BV2 hücrelerinin kökeni ve genel özellikleri
Makalenin bu bölümünde BV2 hücre hattının kökeni ve onu diğer mikroglial hücre hatlarından ayıran genel özellikler açıklanmaktadır. Burada, çalışacaksınız: BV2 hücreleri nedir? BV2 hücreleri nereden gelmektedir? Bir BV2 hücresinin boyutu nedir?
- BV2 mikroglial hücre hattı, neonatal (yenidoğan) C57/BL6 mikroglialarından elde edilmiştir Hücre hattı, hücrelerin v-raf/v-myc onkogeni taşıyan J2 retrovirüsü ile enfekte edilmesiyle immortalize edilmiştir [1].
- Uyarılmamış BV2 hücreleri amip benzeri, hipertrofik morfolojiye sahiptir. Bu morfoloji, primer mikroglialara kıyasla BV2 hücrelerinin oldukça aktif ve enflamatuar bir durum sergilediğini göstermektedir [2].
- BV-2 hücre hattı için bildirilen çap 10 ila 15 μm arasında değişmektedir.
BV2 Vs ECO 2 hücre hattı
Her ikisi de fare mikroglial hücre dizileridir ancak birbirlerinden farklıdırlar. En büyük fark, BV2'nin genetik manipülasyonla ölümsüzleştirilirken ECO 2'nin kendiliğinden ölümsüzleştirilmesidir. Ayrıca ECO 2, BV2 ile aynı genel özelliklere sahiptir ancak kültürlenmesi için koloni uyarıcı faktör-1 (CSF-1) takviyesi gerektirir.
2.bV2 hücre hattı: Kültürleme bilgileri
Bir hücre hattı kültürünü kullanmadan ve bakımını yapmadan önce, hücre kültürleme bilgileri çok önemlidir. Bu makale bölümü, BV2 hücre hatlarının kültürü için tüm önemli noktaları bilmenize yardımcı olacaktır. Özellikle, aşağıdakiler hakkında konuşacağız: BV2 ikiye katlanma süresi nedir? BV2 hücrelerini kültürlemek için hangi ortam kullanılır? BV2 hücre hattı yapışık mı yoksa süspansiyon mu? BV2 hücrelerini nasıl çözersiniz?
BV2 Hücrelerini Kültürlemek için Önemli Noktalar
|
İki Katına Çıkma Süresi: |
BV2 mikroglial hücreleri çok hızlı büyür ve ortalama BV2 ikiye katlanma süresi 34,5 saattir. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
BV2 yapışık bir hücre hattıdır. |
|
Bölünme Oranı: |
Bu yapışık mikroglial hücre hattı 1:2 ila 1:4 bölünme oranında alt kültüre alınır. Hücreler PBS ile yıkanır ve Accutase (ayrıştırma solüsyonu) ile inkübe edilir. 10 dakika sonra santrifüjlenir ve hasat edilirler. Bu hücreler daha sonra önerilen bölünme oranına göre taze büyüme ortamı şişelerine eklenir. |
|
Büyüme Ortamı: |
BV2 hücre hattını kültürlemek için RPMI 1640 ortamı kullanılır. BV2 RPMI, ideal hücre büyümesi için %10 FBS, 2,0 mM stabil Glutamin, 2,0 g/L NaHCO3 ile desteklenir. Ortam haftada 2 ila 3 kez yenilenir. |
|
Büyüme Koşulları: |
BV2 kültürleri 37°C nemlendirilmiş inkübatörde sürekli %5 CO2 iletimiyle muhafaza edilir. |
|
Depolama: |
Dondurulmuş BV2 hücre şişeleri ya sıvı nitrojenin buhar fazında ya da elektrikli dondurucuda -150 °C sıcaklığın altında tutulur. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortam: |
BV2 hücre hatları için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamı önerilir. Hücreler, hücre canlılığını korumak için dakikada sadece 1°C sıcaklık düşüşüne izin veren yavaş bir dondurma işlemi kullanılarak dondurulur. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş BV2 hücre şişesi, küçük bir buz kümesi kalana kadar 40 ila 60 saniye boyunca bir su banyosunda (37°C) hızla çalkalanır. Çözülmüş hücrelere taze büyüme ortamı eklenir ve donmuş ortam bileşenlerini ortadan kaldırmak için santrifüjlenir. Toplanan hücreler tekrar süspanse edilir ve büyüme için bir kültür şişesine dökülür. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: |
BV2 hücre hattı kültürü için biyogüvenlik seviyesi 1 önerilir. |
3.bV2 hücrelerinin avantajları ve sınırlamaları
Diğer hücre hatları gibi, BV2 hücreleri de bazı avantaj ve sınırlamalarla ilişkilidir. Bunlardan bazıları burada belirtilmiştir.
Avantajlar
BV2 hücre hattının avantajları şunlardır:
|
Birincil mikroglia benzeri özellikler |
BV2 hücreleri bazı primer mikroglia benzeri özelliklere sahiptir ve mikroglial fonksiyonları ve yanıtları incelemek için alternatif bir model olarak kullanılır. Birincil mikrogliaların temel biyolojik belirteçleri olan F4/80, CD11b ve Iba1'i ifade ederler. |
|
İmmortalizasyon |
BV2 hücreleri ölümsüzleştirilerek sürekli büyümeleri sağlanır. Bu özellik onları uzun süreli hücre kültürü deneyleri için ideal hale getirir. |
Sınırlamalar
BV2 hücreleri ile ilgili sınırlamalar şunlardır:
|
Murin kökenli hücre hattı |
BV2 hücre hattı fare mikroglialarından türetilmiştir. BV2 hücrelerini kullanan araştırma bulgularının insana özgü hastalıklara ve araştırmalara uygulanabilirliği sınırlı olabilir. |
|
İn vitro model |
BV2 hücreleri, mikroglial fonksiyonları incelemek için in vitro bir model olarak hizmet etmektedir. Bununla birlikte, in vivo beyindeki mikroglial hücrelerin özelliklerini ve karmaşıklığını tam olarak taklit edemeyebileceklerine dikkat etmek önemlidir. |
4.bV2 hücre hattının araştırmadaki uygulamaları
BV2 hücre hattı sinirbilim araştırmalarında çeşitli uygulamalar sunmaktadır. BV2 hücrelerinin bazı yaygın araştırma kullanımları bu bölümde belirtilmiştir.
Nörodejeneratif hastalık araştırması: Mürin mikroglial hücre hattı BV2, Parkinson hastalığı, Alzheimer hastalığı ve multipl skleroz gibi nörodejeneratif hastalıkları incelemek için değerli bir araştırma aracıdır. Araştırmacılar nörotoksisite ve hastalık patolojisi üzerinde çalışmış ve BV2 hücre hatlarını kullanarak terapötik ajanları değerlendirmişlerdir. Örneğin, 2020 yılında yapılan bir çalışmada, Parkinson hastalığı modeli olarak lipopolisakkarit ile aktive edilmiş BV2 hücreleri kullanılarak, Rheum rhaponticum bitkisinde bulunan doğal bir hidroksistilben olan Rhaponticin'in anti-enflamatuar ve nöroprotektif etkisi değerlendirilmiştir. Bileşik, nitrik oksit sentazı inhibe ederek ve reaktif oksijen türlerini ve proinflamatuar aracıları azaltarak lipopolisakkarit (LPS) aracılı BV2 aktivasyonunu hafifletmektedir. Kısaca, Rhaponticin, LPS ile indüklenen mikroglial model (BV2) üzerinde anti-enflamatuar ve nöroprotektif etkiler göstermektedir [3]. Benzer şekilde, bir çalışmada sinyal yolaklarının nöroinflamasyona katılımı araştırılmıştır. Araştırmacılar lipopolisakkarit aracılı BV2 aktivasyonu yoluyla bir inflamasyon modeli geliştirmişlerdir. AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB sinyalizasyon ekseninin nöroinflamasyona dahil olduğunu bulmuşlardır. Ayrıca, bu modeli kullanarak doğal bir flavonoid olan beta-naftoflavonu (BNF) anti-enflamatuar ve nöroprotektif etkileri açısından değerlendirmişlerdir. Bileşik bu terapötik etkileri BV2 aktivasyonunu inhibe ederek göstermiştir [4]. Benzer şekilde, araştırmada BV2 hücreleri kullanılmış ve zonisamid ilacının mikroglial hücrelerdeki mitokondriyal disfonksiyon üzerindeki iyileştirici etkisi incelenmiştir. Bu çalışmanın bulguları, zonisamidin Parkinson hastalığı tedavisi için klinik kullanımını desteklemektedir [5].
5.bV2 hücreleri: Araştırma yayınları
Aşağıda BV2 hücrelerini içeren bazı ilginç ve en çok alıntılanan araştırma çalışmaları yer almaktadır.
Bu araştırma Journal of Alzheimer's Disease (2015) dergisinde yayımlanmıştır. Çalışma, mitokondriyal hasar kaynaklı DAMP (hasarla ilişkili moleküler model) mtDNA molekülünün mikroglial hücrelerde (BV2) enflamatuar değişikliklere neden olabileceğini öne sürmüştür. Böylece, Alzheimer hastalığı nöroinflamasyonuna da katkıda bulunabilirler.
FARMACIA'da (2021) yayınlanan bu makalede BV2 hücreleri kullanılmış ve Huanglian Jiedu Decoction'ın (HLJDD) Alzheimer hastalığı üzerindeki terapötik etkisi belirlenmiştir. Çalışma, HLJDD'nin BV2 western blot analizi ile doğrulandığı üzere Trm2 protein ekspresyonunu yükselterek BV2 amiloid-beta fagositozunu teşvik ettiğini ortaya koymuştur.
Alfa-sinüklein, agregasyon durumuna bağlı olarak BV2 mikroglia'yı aktive eder
Biochemical and Biophysical Research Communications'da (2016) yayınlanan bu araştırma makalesi, yetişkin merkezi sinir sisteminde çözünebilir bir protein olan alfa-sinükleinin, agregasyon durumlarına bağlı olarak BV2 hücrelerini aktive edebileceğini öne sürmüştür.
Bu araştırma 2013 yılında Neuroscience Letters dergisinde yayımlanmıştır. Bu çalışma, alfa-sinüklein ile aktive olan BV2 mikroglial hücrelerinden salgılanan eksozomların Parkinson hastalığında nörodejenerasyonun temel aracıları olabileceğini belirtmektedir.
Bu çalışma Frontiers Cellular Neuroscience (2019) dergisinde yayımlanmıştır. Bir antioksidan olan Idebenone'un mikroglial polarizasyonu modüle ettiğini ve lipopolisakkarit ile aktive edilmiş BV2 hücrelerinde ve 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) ile indüklenmiş Parkinson hastalığı fare modelinde inflamasyonu azalttığını öne sürmüştür.
6.bV2 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
BV2'de bulunan çevrimiçi kaynaklar sınırlıdır. İşte bunlardan bazıları.
- BV2 hücre hattının alt kültürü: Bu web sitesi bağlantısı, BV2 hücre hatlarının alt kültürlenmesi için kısa bir protokol içermektedir.
- Dondurulmuş hücrelerin çözdürülmesi: Bu video, donmuş hücrelerin çözülmesi ve kültürlenmesi için temel protokolü öğrenmenize yardımcı olur.
BV2 hücreleri için hücre kültürü protokolü burada belirtilmiştir.
- BV2 hücre kültürü: Bu web sitesi bağlantısı BV2 hücre kültürü protokolünü içerir. Ayrıca, BV2 hücre hattı için hücre kültürü ortamı ve dondurma ortamı bileşimleri de sağlar.
Referanslar
- Wang, Y., Y. Peng, ve H. Yan, Yorum: Nöroinflamatuar İn Vitro Hücre Kültürü Modelleri ve Nörolojik Bozukluklar için Potansiyel Uygulamalar. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
- Sarkar, S., et al., Nörotoksik hakaretler sırasında nöroinflamatuar mekanizmaları incelemek için yeni bir fare mikroglial hücre modelinin karakterizasyonu ve karşılaştırmalı analizi. Nörotoksikoloji, 2018. 67: p. 129-140.
- Zhao, F., et al., Rhaponticin'in Parkinson hastalığına karşı nöroprotektif etkisi: İn vitro BV-2 modelinden ve in vivo MPTP ile indüklenmiş fare modelinden elde edilen bilgiler. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, 2021. 35(1): s. e22631.
- Gao, X., et al., Beta-naftoflavon, AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB sinyal ekseni aracılığıyla BV-2 hücrelerinde LPS ile indüklenen inflamasyonu inhibe eder. İmmünobiyoloji, 2020. 225(4): p. 151965.
- Tada, S., et al., Zonisamide, Parkinson Hastalığı Modellerinde Mikroglial Mitokondriopatiyi İyileştirir. Beyin Bilimleri, 2022. 12(2): p. 268.