A375 Hücre Hattı - Melanom Araştırmalarına İlişkin Bir Kılavuz

A375, toksikoloji ve immüno-onkoloji araştırmalarında yaygın olarak kullanılan bir insan melanom hücre hattıdır. Araştırmacılar, kanser biyolojisini ve sinyal yollarını incelemek, potansiyel antikanser ajanlarını test etmek veya taramak ve yeni ve etkili tedaviler geliştirmek için bu hücre hattını kullanır.

A375 hücrelerinin kökeni ve genel özellikleri

Bir hücre hattının kökeni ve genel özellikleri hakkında bilgi sahibi olmak, araştırmada kullanımını planlamanıza yardımcı olabilir. Makalenin bu bölümü, A375 hücre hattının kökenini ve özelliklerini ele alacaktır. Örneğin, A375 hücre hattı nedir? A375 hücre hattının özellikleri nelerdir? A375 hücreleri nereden gelir? A375 melanom hücrelerinin morfolojisi nedir? A375 hücre boyutu nedir?

• Cilt kanseri hücre hattı A375, malign melanomlu 54 yaşındaki bir kadının katı tümörünün eksplant kültüründen elde edilmiştir [1].
• A375 hücreleri epitel benzeri bir morfolojiye sahiptir.
• A375 hücre boyutu, diğer hücre hatlarına kıyasla nispeten daha küçüktür. Çapları yaklaşık 12 µm'dir.
• A375 melanom hücreleri hipotriploiddir. Bu hücre hattı için modal kromozom sayısı 62'dir. Genellikle her hücre dokuz marker kromozom ve normal N2, N6 ve N22 kromozomlarının bir kopyasına sahiptir.

A375 hücreleri: Hücre kültürü bilgileri

A375 hücre kültürlerinin bakımı kolaydır. Herhangi bir özel hücre kültürü gereksinimi yoktur. Bu bölüm, gerekli hücre kültürü bilgilerini öğrenmenize yardımcı olacaktır. Örneğin, A375'in ikiye katlanma süresi nedir? A375 hücre hattı besiyeri nedir? A375'in tohumlama yoğunluğu nedir? A375 melanom hücreleri yapışkan mıdır?

A375 Hücrelerini Kültüre Etmenin Önemli Noktaları

Popülasyon ikiye katlanma süresi:

A375'in ikiye katlanma süresi 20 saattir.

Yapışkan mı, Süspansiyon Halinde mi:

A375, yapışkan bir insan melanom hücre hattıdır.

Tohumlama Yoğunluğu:

1 x 10⁴ hücre/cm² hücre yoğunluğu, A375 hücre kültürleri için idealdir. Yapışkan hücreler, 1 x fosfat tamponlu salin (PBS) ile durulanır ve pasaj çözeltisi (Accutase) ile inkübe edilir. Daha sonra, hücrelere kültür ortamı eklenir ve santrifüjlenir. Hasat edilen hücreler, bir kültür ortamında yeniden süspansiyon haline getirilir ve büyüme için yeni şişelere dağıtılır.

Büyüme Ortamı:

DMEM, %10 fetal sığır serumu (FBS), 4,5 g/L glikoz, 1,5 g/L NaHCO3, 4 mM L-glutamin ve 1,0 mM sodyum piruvat ile takviye edildiğinde ideal A375 besiyeri olarak önerilir. A375 besiyeri haftada 2-3 gün yenilenmelidir.

Büyüme Koşulları:

A375 melanom hücreleri, %5 CO2 beslemesi olan nemlendirilmiş bir inkübatörde (37°C) büyütülür.

Saklama:

Dondurulmuş A375 hücreleri, sıvı azotun buhar fazında veya elektrikli dondurucuda -150°C'nin altında tutulmalıdır.

Dondurma Süreci ve Ortam:

A375 hücre hattını dondurmak için CM-1 veya CM-ACF besiyerleri kullanılır. Hücre canlılığını korumak için, sıcaklığın kademeli olarak 1°C düşmesine izin veren yavaş bir dondurma işlemi tercih edilmiştir.

Çözme Süreci:

Dondurulmuş A375 melanom hücre şişesi, sadece küçük bir buz parçası kalana kadar 40 ila 60 saniye boyunca su banyosunda hızlıca çalkalanır. Hücrelere taze besiyeri eklenir ve dondurma besiyeri bileşenlerini uzaklaştırmak için santrifüjlenir. Elde edilen hücre peleti tekrar süspansiyon haline getirilir ve yeni şişelere dökülür.

Biyogüvenlik Seviyesi:

A375 kültürleri, biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvar ortamlarında işlenir ve muhafaza edilir.

A375 hücre hattının araştırma alanları

A375 hücre hattı, kanser araştırmalarında geniş bir araştırma uygulama alanına sahiptir. A375 hücrelerinin kullanıldığı yaygın alanlardan bazıları şunlardır.

• Kanser araştırması: A375 hücreleri, melanom araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmacılar, bu hücreleri kullanarak cilt kanserinin biyolojisini, süreçlerini ve hücre çoğalması, göçü ve istilası dahil olmak üzere altta yatan hücre sinyal mekanizmalarını araştırmıştır. Bu, araştırmacıların yeni moleküler tedavi hedeflerini belirlemelerine de yardımcı olabilir. Lin Zhu ve meslektaşları tarafından 2019 yılında yürütülen bir çalışmada, oldukça agresif melanom hücreleri olan A375 kullanılmış ve mikroRNA-3662'nin A375 melanom hücrelerinin büyümesi ve invazyonu üzerindeki rolü ortaya konmuştur. Çalışma bulguları, mikroRNA-3662'nin ZEB1 genini hedef aldığını ve A375 tümör modelinde in vitro ve in vivo olarak melanom hücre büyümesini düzenlediğini belirtmektedir [2]. Benzer şekilde, 2018 yılında yapılan bir araştırma, PI3K/AKT ve MAPK/ERK yolaklarının A375 hücre hattının çoğalması ve metastazında rol oynadığını ortaya koymuştur [3].
• İlaç keşfi ve testleri: A375 hücre hattı, potansiyel antikanser ajanlarını test etmek ve taramak için yararlı bir in vitro tümör modelidir. Araştırmacılar, bu A375 melanom hücrelerini kullanarak yeni kemoterapötik ilaçların, bileşiklerin ve diğer tedavilerin toksisitesini ve etkinliğini değerlendirmektedir. Örneğin, bir çalışmada greyfurt kaynaklı mikro ve nanovesiküllerin A375 insan melanom kanser hücreleri üzerindeki antikanser özellikleri araştırılmıştır. Sonuçlar, mikro ve nanovesiküllerin hücre döngüsünü durdurduğunu, apoptozu indüklediğini ve hücre çoğalması, göçü ve istilasında gen ekspresyonunu engellediğini ortaya koymuştur [4].

A375 hücreleri: Yayınlar

A375 hücrelerini konu alan bazı önemli araştırma yayınları burada belirtilmiştir.

D vitamini ve düşük kalsemik analogları, insan melanom A375 hücre hattında sisplatin ve dakarbazinin antikanser özelliklerini modüle eder

Bu çalışma 2019 yılında Journal of Oncology dergisinde yayınlanmıştır. Çalışma, D vitamini ve analogları ile birlikte tedavinin, A375 melanom hücrelerinde sisplatin ve dakarbazinin antikanser aktivitesini iyileştirdiğini öne sürmüştür.

Seçilmiş aloe türlerinden elde edilen jel ve bütün yaprak özütlerinin anti-melanom etkilerinin (A375 hücre hattı) in vitro değerlendirmesi

Bu araştırma, 2022 yılında Journal of Herbal Medicine dergisinde yayınlanmıştır. Bu çalışma, A375 melanom hücrelerinde aloe vera jelinin anti-melanom etkilerini araştırmıştır.

Fermitin ailesinin 2. üyesi, p-α-Pix'in Rac1'e bağlanmasını güçlendirerek MAPK yolunu aktive eder ve melanomun ilerlemesini teşvik eder

Oncogene (2021) dergisinde yayınlanan bu çalışma, fermitin ailesi üyesi 2'nin (FERMT2 veya kindlin-2), p-α-Pix ve Rac1 ile bağlanarak MAPK'yi aktive etmek suretiyle melanomun ilerlemesini teşvik ettiğini öne sürmüştür.

FARP1, kutanöz melanomda MAPK sinyal yolunu modüle ederek hücre çoğalmasını kolaylaştırır

The American Journal of Dermatopathology (2019) dergisinde yayınlanan bu çalışma, FARP1'in kutanöz melanomun gelişimini ve ilerlemesini kolaylaştırabileceğini öne sürmüştür. Bu nedenle, FARP1 yararlı bir terapötik hedef olabilir.

Phyllodium elegans özütlerinin insan kanser hücre hatları üzerindeki sitotoksik ve apoptotik potansiyeli

Bu araştırma makalesi Bioengineered (2019) dergisinde yayınlanmıştır. Bu çalışma, A375 dahil olmak üzere insan karsinom hücre hatları üzerinde Phyllodium elegans bitki özütünün sitotoksik ve apoptotik aktivitesini araştırmıştır.

A375 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası

Aşağıda, A375 hücrelerini içeren birkaç çevrimiçi kaynak bulunmaktadır.

• A375 hücre transfeksiyonu: Bu video eğitimi, A375 hücre transfeksiyonunu adım adım öğrenmenize yardımcı olacaktır.
• Hücre kültürü: Bu videoda, hücre hattı kültürüyle ilgili çok yararlı bilgiler bulunmaktadır.

A375 hücreleri için hücre kültürü protokolleri burada listelenmiştir.

• A375 hücre hattı: Bu bağlantı, A375 besiyeri ve dondurulmuş ve çoğalan A375 kültürlerinin işlenmesi dahil olmak üzere, A375 hücre hattı kültürü ve bakımı hakkında yararlı bilgiler içerir.

Kaynakça

1. Avram, S., et al., Tavuk embriyo koryoallantoik membranı ve Balb/c çıplak fareler üzerinde A375 insan melanom modellerinin standardizasyonu. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MikroRNA-3662, ZEB1'i hedef alır ve oldukça agresif melanom hücre hattı A375'in invazyonunu azaltır. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845-5856.
3. Peng, X. ve ark., Oxyfadichalcone C, PI3K/Akt ve MAPK/ERK yolaklarını baskılayarak melanom A375 hücre çoğalmasını ve metastazını inhibe eder. Life sciences, 2018. 206: s. 35-44.
4. Stanly, C. ve ark., Greyfurt kaynaklı mikro ve nanovesiküller, A375 insan melanom hücre hattında farklı metabolom profilleri ve antikanser aktiviteleri gösterir. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.