Publicerad: 2023 | Senast granskad: maj 2026

Att förstå begreppet ”passagenummer”

Begreppet ”passagenummer” är centralt inom cellodling och avser antalet gånger en cellinje har subkultiverats eller överförts till ett nytt odlingsmedium efter att den initialt återuppväckts från kryokonservering eller mottagits från en referenscellbank. Detta mått är avgörande för att spåra en cellodlings härstamning och historik.

Processöversikt

I rutinmässig cellodlingspraxis överförs celler till ett nytt medium när de uppnår en viss densitet för att upprätthålla tillväxten och förhindra överkonfluens. Varje sådan överföring registreras som en passage.
Traditionellt sett, när vi till exempel mottog en cellinje vid passage 60 från deponenten, fortsatte vi från detta passagenummer och ökade det vid varje subkultur. Denna praxis, som visserligen bevarar en historisk tråd, ledde ofta till höga passagenummer redan från början. Med tanke på den omfattande och ofta decennielånga användningen av vissa cellinjer, såsom HeLa-linjen som etablerades 1951, är det inte möjligt att fastställa det totala antalet passager sedan cellinjen startade.
För att öka tydligheten och kvaliteten i våra cellodlingsprocesser reviderade vi denna metod i början av 2023. Nu, när vi startar en odling från en ny flaska, oavsett passagenummer från deponenten, nollställer vi och börjar räkna på nytt från passage ett för varje tillverkad sats.

Motivering

Passering är en viktig procedur för att säkerställa cellkulturernas hälsa och användbarhet för forskning. När celler växer för mycket upplever de kontaktinhibering, vilket minskar deras proliferationshastighet, vilket kan påverka experimentresultaten negativt. För att mildra dessa problem inför Cytion strikta kontroller av celltätheten vid subodling, vilket gör att man kan hålla antalet passager lågt under tillverkningen av sina cellinjer. Denna försiktighetsåtgärd hjälper till att förhindra de negativa effekterna av överdriven passagering, såsom morfologiska avvikelser, förändringar i tillväxthastighet och genetisk drift, vilket kan leda till att cellerna skiljer sig markant från sitt ursprungliga tillstånd. Långa perioder av subkultivering kan också öka risken för mikrobiell kontaminering.

Vårt löfte

Vi säkerställer att de celler som levereras till forskare ligger så nära den ursprungliga genetiska sammansättningen och de fenotypiska egenskaperna som möjligt, vilket förbättrar tillförlitligheten hos experimentella data. Genom att noggrant dokumentera varje passage bidrar Cytion dessutom till spårbarheten och reproducerbarheten i forskningen, ett åtagande som återspeglar de höga standarderna för cellodling. Forskare uppmanas att föra noggranna register över passagenummer, både på odlingskärlen och i sina laboratoriejournaler, som referens för hälsan och historiken hos sina cellodlingar.

Tips och vanliga misstag

Det är viktigt att följa rätt protokoll, men det kan vara lika viktigt att förstå vanliga fallgropar. Cellodlingsprocedurer är känsliga för små avvikelser i teknik, timing och reagenskvalitet. Följande tips återspeglar bästa praxis som rekommenderas av Cytions vetenskapliga team baserat på omfattande erfarenhet av cellodling.

Förvärm alltid reagenser till 37 °C före användning för att minimera termisk chock för cellerna.
Arbeta snabbt men försiktigt – minimera den tid cellerna tillbringar utanför inkubatorn.
Använd certifierade, mykoplasmatestade reagenser för att undvika kontaminering som kan äventyra experimentresultaten.
Dokumentera varje steg, inklusive passagenummer, datum och observationer av cellmorfologi.
Validera ditt protokoll med ett litet pilotförsök innan du skalar upp för att undvika slöseri med dyra reagenser.

Rekommenderade Cytion-reagenser

Cytion erbjuder ett utbud av validerade cellodlingsreagenser som är särskilt utformade för att stödja detta protokoll. Alla reagenser är testade för prestanda med vanligt förekommande cellinjer och finns tillgängliga med fullständig dokumentation. Besök cytion.com/Media-Reagents för att se hela sortimentet.