Jurkat E6.1 Cellinje

JurkatE6.1 är en klon av Jurkat-cellinjen, en odödliggjord cellinje av humana T-lymfocyter som härrör från perifert blod. De etablerades första gången 1977 och används i forskning relaterad till T-cellsreceptorsignalering, T-cells- och andra lymfocyters adoptiva terapier mot cancer, blodrelaterad proto-onkogenforskning, cellöverlevnad och celldifferentiering.

I den här artikeln kommer vi att inkludera all information och alla förutsättningar som du behöver förstå innan du påbörjar ditt arbete med Jurkat E6.1 klonade cellinjer som inkluderar:

1. Ursprung, historia och allmän information
2. Cellkulturens egenskaper
3. Tillämpningar av Jurkat E6.1-cellinjer
4. Forskningspublikationer
5. Fördelar och begränsningar
6. Resurser: Protokoll, videor och mycket mer

1. Ursprung,historia ochallmän information

Här finns all nödvändig information om historia, ursprung och allmänna egenskaper hos cellinjen Jurkat E6.1 och deras hantering i cellkultur.

• Jurkat E6.1 är en odödliggjord human T-lymfocytcellinje. Denna klonade cellinje är ett derivat av Jurkat-cellinjen som erhölls från perifert blod från en 14-årig pojke som led av akut lymfoblastisk leukemi 1976. Efter isolering från blod fick denna cellinje ursprungligen namnet JM, eftersom JM och Jurkat indikerar att dessa cellinjer är isolerade från samma patient. Cellinjen Jurkat E6.1 klonades från cellderivat som kallas Jurkat-FHCRC.
• E6.1-cellinjerna härrör från leukemi; dessa cellinjer används för att öka uttrycket av IL-2 genom simulering med monoklonala antikroppar eller lektin. De uttrycker T-cellsantigenreceptorer; därför kan dessa cellinjer användas vid studier av immunsystemstörningar och immun-onkologisk forskning.
• Cellmorfologi hos Jurkat E6.1-celler: Jurkat E6.1-cellerna isolerades från en leukemipatient och har en förändrad morfologi jämfört med T-lymfocyter, vilket gör dem till odödliga cellinjer. Lymfoblastcellen bildas när naiva lymfocyter aktiveras genom antigenpresentation av antigenpresenterande celler. Detta leder till ökad tillväxt i cellkärnan, cytoplasman, mRNA och proteiner.
• Cellstorlek: Jurkat E6.1-cellinjerna är klonade odödliga med en diameter på vanligen 10-16 μm (diametern kan variera beroende på typen av suspension). Dessa cellinjer har en mycket sfärisk cellform.
• Genom- och kromosomnummer: Dessa cellinjer är pseudodiploida cellinjer av humana T-lymfocyter, med modellkromosomen kromosom 46. Dessa visar också att den modala kromosomen finns i cirka 74% och visar en polyploidifrekvens på cirka 5,3%. Karyotypstudierna visade en karyotyp med 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). X- och Y-kromosomer har vanligtvis en vanlig kopia i de flesta cellinjer.
• Jurkat-cellinjer vs E6.1 Jurkat-cellinjer: Jurkat-cellinjer är de primära föräldracellinjer som först isolerades från en patient med akut lymfatisk leukemi. E6.1 Jurkat-cellinjerna är dock klonade derivat av Jurkat-FHCRC-cellinjer.

3. tillämpningar av Jurkat E6.1-cellinjer

Jurkat E6.1-cellinjen används framför allt för forskning och studier av sjukdomar som är kopplade till immunsystemet och cancerformer. Dessutom har den varit lämplig för studier av vissa komplexiteter i samband med HIV-infektion eftersom CD4 T-cellsreceptorn är nödvändig för retroviralt inträde.

Några viktiga områden där dessa cellinjer används diskuteras nedan:

Modellsystem för T-cellssignalering och apoptotiska vägar: Denna cellinje som härrör från T-cellsleukemi används i stor utsträckning i forskning som involverar TCR-signaleringskaskad. Jurkat E6.1 frigör mer IL-2 och IL-8 som därefter hjälper till vid T-cellsaktivering och utlöser de inflammatoriska vägarna. Denna cellinje är också känd för sin hyperfosforylerade Pyk2 och ökade produktion av Vav1 som på ett avgörande sätt påverkar aktincytoskelettets omarrangemang i T-celler. TCR-segregeringen i Jurkat cellinje E6-1 kan också förbättras genom kraftfullt uttryck av LFA-1, som följaktligen ökar TCR-signaleringen och uttrycket av IL-2 . Cellproliferation och cellcykelstudier utförs också i Jurkat cellinje E6.1. De har använts för att studera apoptotiska processer och DNA-skador som induceras av ämnen från marina källor och växtkällor. I en studie från 2013 utvärderades effekterna av konditionerat media från haj-epigonal på mänskligaceller med hjälp av dessa cellinjer. På samma sätt studerades den repressiva effekten av växtbaserad hirsutin på cellproliferation i Jurkat E6.1-cellinjer. Ofta används också Jurkat E6.1 i studier mot cancer för att utvärdera de utvalda målen. Påverkan av marina neurotoxiner som Brevetoxiner (PbTx) har också studerats i dessa cellinjer.

Studier av HIV: En av de viktigaste tillämpningarna av Jurkat E6.1-cellinjer är deras förmåga att fungera som en lämplig modell för HIV-studier, eftersom de kan välja olika signalhändelser som inducerar TCA. Jurkat E6.1-cellinjer har inte bara använts för att förstå HIV-aktivering utan också för att dissekera mekanismerna bakom HIV-latens . HIV-replikation och -infektion har i stor utsträckning studerats i dessa cellinjer där de kan utsättas för genredigering och genknockout, vilket gjordes i en studie 2021. Effekten av läkemedelsleverans på HIV-infektion, såsom långverkande efavirenz (Efa)-enfuvirtid (Enf) Co-loaded polymer-lipid hybrid nanopartiklar (PLN) på virusinträde utnyttjade Jurkat E6.1 cellinjer. CRISPR/Cas9-konstruerad Jurkat E6.1 har använts flera gånger för att studera mekanismer som är involverade i HIV-inträde, replikation och infektion.

4. forskningspublikationer

Här är några anmärkningsvärda exempel från den stora samlingen av forskning, inklusive Jurkat E6.1-cellinjer.

Selenmetaboliten metylselenol reglerar uttrycket av ligander som utlöser immunaktivering genom lymfocytreceptorn NKG2D

Användning av Jurkat E6.1, inkuberad i olika selenföreningar för att studera liganduttryck och ytuttryck av MICA/B.

Caracasine acid, en ent-3,4-seco-kaurene, främjar apoptos och celldifferentiering genom NFkB-signalvägsinhibering i leukemiceller.

Förståelse av karakassinsyrainducerad cytotoxicitet i humana T-cellinjer som Jurkat E6.1 och HL-60.

Bevis för in vitro-utveckling av läkemedelsresistens mot azidotymidin i T-lymfocytiska leukemicellinjer (Jurkat E6-1/AZT-100) och hos pediatriska patienter med HIV-1-infektion

Använda Jurkat E6.1 som inkuberats under lång tid med AZT-läkemedel för att studera Azidothymidine (AZT)-resistens hos HIV-1-infekterade patienter.

Jurkat E6.1 Cellinjestudier avseende effekterna av vissa bioindoler på membranets fluiditet

I denna forskning användes ett polariserat fluorescensanalyssystem för att förstå effekterna av bioindoler, inklusive serotonin, tryptofan och melatonin, på cellmembranets fluiditet i Jurkat E6.1-cellinjer.

Molekylär mekanism för apoptosinduktion i Jurkat E6-1-celler genom Tribulus terrestris alkaloidextrakt

Tribulus terristris-deriverat alkaloidextrakt inducerade apoptos i Jurkat E6.1-celler för att förstå den underliggande verkningsmekanismen.

Ökat LFA-1-uttryck förstärker immunsynapsarkitekturen och T-cellsreceptorsignaleringen i Jurkat E6.1-celler

T-cellsreceptorsignalering i Jurkat E6.1-celler förstärktes genom att kraftigt öka LFA-1-uttrycket.

5. fördelar och begränsningar

Liksom andra cellinjer har Jurkat E6.1 sina fördelar och begränsningar.

Fördelarna med Jurkat E6.1

Det finns många skäl till varför den föredras i dessa tillämpningar:

• Tillväxtsätt

  Jurkat E6.1 är en suspenderad och icke-adherent cellinje, vilket innebär att den växer suspenderad och inte fäster vid odlingsytan.

• Uttryck av gener

  Jurkat E6.1-cellinjen uttrycker gener som kodar för interleukin-2 (IL-2) och CD3. Vid stimulering med monoklonala antikroppar, lektiner eller phorbolestrar mot det antigena komplexet T3 har dessa celler visat sig producera förstärkt IL-2.

• Uttryck av antigener

  Cellinjen Jurkat E6.1 uttrycker CD3-antigen, som är associerat med T-cellsaktivering och signalering.

• Uttryck av markörer

  Cellinjen uttrycker markörer för T-cellens antigenreceptor (TCR), som är avgörande för T-cellernas igenkänning och immunsvar.

• Tillämplighet för transfektion

  Jurkat clone E6.1 cellinje är lämplig för transfektionsexperiment, vilket gör det möjligt att föra in exogent genetiskt material i cellerna för olika forskningsändamål.

Begränsningar

Efter fördelarna går vi nu igenom de begränsningar som är förknippade med användningen av Jurkat E6.1-cellinjer:

• Celltransfektion med virusvektor

  Transfektion av Jurkat E6.1-celler är en utmaning på grund av deras T-cellsursprung. Vanligtvis krävs dyra och tidskrävande virala vektorer för genetisk modifiering. Icke-virala vektorer har visat låg transfektionseffektivitet och betydande toxicitet i Jurkat-celler.

• Bakteriell kontaminering

  Jurkat E6.1-cellkulturer bör övervakas med avseende på potentiell bakteriell kontaminering för att säkerställa experimentresultatens integritet.

• Virala kontamineringar

  Jurkat E6.1-cellinjer uttrycker olika kemokinreceptorer och låga nivåer av CD4, vilket underlättar virusinträde. Detta gör dem mottagliga för T-cellsinfekterande virus som HTLV och HIV.

6.resurser: Protokoll, videor och mer

I detta avsnitt beskrivs metoder och protokoll för cellodling och transfektion, samt utbildningsvideor relaterade till denna cellinje:

Protokoll för cellodling

Här är några grundläggande odlingsprocedurer som ska följas för denna cellinje:

• Cell Culture SOP, Förökning av Jurkat: University of California tillhandahöll också en metod på sin USCS Genome-webbläsare för odling av Jurkat-klon E6-1.
• Jurkat, klon E6-1 Odling och hantering: Elabscience inkluderade kulturhanteringsprotokoll på deras produktbeskrivningswebbplats.

Protokoll för transfektion

Här är listan över olika transfektionsprotokoll som finns tillgängliga:

• Transfektionsprotokoll för Jurkat-celler Lipofectamine LTX-reagens: Ett transfektionsprotokoll för Jurkat-celler med användning av Lipofectamine LTX Reagent, från ThermoFisher.
• Amaxa™ 4D-Nucleofector™-protokoll för Jurkat-klon E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG tillhandahöll transfektionsprotokollet för Jurkat-klon E6.1 från ATCC med användning av 4D-Nucleofector® X Unit.

Videor om Jurkat E6.1

Det finns flera utmärkta videor som täcker cellkulturkoncept, procedurer, spridning, plätering och andra ämnen.

• Passage av celler:Grunderna i cellodling: Detta är en bra video för grundläggande guide för passering av mänskliga cellinjer från ThermoFisher.
• Upptining av celler: Grunderna för cellodling: Den här videon ger grundläggande instruktioner om cellodling och upptining av ThermoFisher.
• Protokoll för transfektion av plasmid-DNA: Den här videon fokuserade på protokollet för transfektion av plasmid-DNA med Lipofectamine® LTX och Plus™ Reagent, från ThermoFisher.
• Mät apoptos med hjälp av suspenderade Jurkat-celler som behandlats med 3 mikromolär Staurosporine: Den här videon visar hur man utför en apoptosanalys på Celigo image cytometer med Hoechst och caspase 3/7-reagenser från Nexcelom Bioscience.