HK-2-celler - Undersökning av njurfunktion och patologi med HK-2-celler i njurforskning
HK-2 är en odödliggjord human njurepitelcellinje som ofta används inom toxikologisk forskning. Forskare utvärderar effekterna av miljögifter på dessa njurceller. Dessutom använder de HK-2-celler för att undersöka njursjukdomar och deras underliggande mekanismer.
Denna artikel kommer att förklara nästan all väsentlig information om HK-2-celler, inklusive deras allmänna egenskaper, cellodlingsförhållanden, forskningsapplikationer och mycket mer. Du kommer att lära dig följande:
- HK-2-celler: Ursprung och allmänna egenskaper
- HK-2 cellinje: Information om odling
- Fördelar och begränsningar med HK-2-celler
- Tillämpningar av HK-2-cellinjen i forskning
- HK-2 celler: Forskningspublikationer
- Resurser för HK-2 cellinje: Protokoll, videor och mer
1.hK-2-celler: Ursprung och allmänna egenskaper
Ursprunget och de allmänna egenskaperna hos en cellinje är absolut nödvändiga att känna till för korrekt hantering, underhåll och användning av en cellinje. Detta avsnitt av artikeln kommer att täcka följande: Vad är HK-2-celler i human njure 2? Vad är HK2:s roll? Vad är HK2-celler? Vad är ursprunget till HK-2-cellinjen? Vilka är HK-2-cellernas storlek och morfologi?
- Human Kidney 2 (HK-2)-celler är en typ av proximala tubulära celler som härrör från normal njurvävnad från en europeisk vuxen. HK-2-cellinjen etablerades genom transfektering av njurceller med ett rekombinant retrovirus som omfattar E6/E7-generna från humant papillomvirus 16. Detta experiment ledde till immortalisering och etablering av en kontinuerligt växande HK-2-njurepitelcellinje.
- HK-2-celler uppvisar en epitelial morfologi.
- HK-2-cellernas storlek varierar mellan 17,4 och 18,6 µm i diameter. Medeldiametern är 18,2 µm [1].
2.hK-2 cellinje: Information om odling
Information om odling av human kidney 2-cellinjen kan hjälpa dig avsevärt innan du arbetar med den. Viktig information om HK-2-cellodling nämns i detta avsnitt av artikeln. Du kommer att veta: Är HK-2-celler vidhäftande? Vad är fördubblingstiden för HK-2-celler? Vilket medium används för att odla HK-2-celler?
Viktiga punkter för odling av HK-2-celler
|
Populationens fördubblingstid: |
Fördubblingstiden för HK-2-celler varierar mellan 47,3 h och 61,7 h. |
|
Vidhäftande eller i suspension: |
HK-2 njurepitelcellinje är vidhäftande. |
|
Subkultiveringsförhållande: |
HK-2-celler subkultiveras i förhållandet 1:2 till 1:4. Adherenta HK-2-celler tvättas med 1 x PBS och inkuberas vid rumstemperatur i 8 till 10 minuter efter tillsats av accutaslösning. Kulturmedia tillsätts till de dissocierade cellerna och centrifugeras. De uppsamlade cellerna resuspenderas försiktigt och hälls över i nya kolvar för odling. |
|
Tillväxtmedium: |
Keratinocytcellinjemedium innehållande 10% fetalt bovint serum, 0,05 mg/ml bovint hypofysextrakt (BPE) och 5 ng/ml epidermal tillväxtfaktor (EGF) är idealiskt HK-2-cellmedium. Mediet bör bytas ut varannan till var tredje dag i veckan. |
|
Tillväxtförhållanden: |
Human Kidney 2-cellinjekulturer förvaras i en fuktad inkubator med 5% CO2-tillförsel vid 37°C. |
|
Förvaring: |
Frysta celler förvaras i ångfasen av flytande kväve eller vid en temperatur under -150 °C i en frys med extremt låg temperatur. |
|
Frysningsprocess och medium: |
CM-1 eller CM-ACF frysmedier är idealiska för frysning av HK-2-celler. Kortfattat används en långsam frysmetod som endast tillåter en temperaturminskning på 1 grad Celsius per minut och skyddar cellerna från chock. |
|
Upptiningsprocess: |
De frysta cellerna tinas i ett vattenbad med en temperatur på 37 grader Celsius. Dessa celler tillsätts med färskt odlingsmedium och resuspenderas. Därefter fördelas cellerna i en ny kolv som innehåller tillväxtmedier. Efter 24 timmar byts media ut för att avlägsna frysande mediakomponenter. |
|
Biosäkerhetsnivå: |
HK-2-cellkulturer förvaras i laboratorier med biosäkerhetsnivå 1. |
3.fördelar och begränsningar med HK-2-celler
HK-2 är en allmänt använd cellinje för epitelceller från proximala tubuli hos människa. Liksom andra cellinjer är den också förknippad med vissa fördelar och begränsningar. I detta avsnitt diskuteras några viktiga för- och nackdelar med cellinjen Human Kidney 2.
Fördelar och nackdelar
De viktigaste fördelarna med HK-2-cellinjen inkluderar:
|
Väl karakteriserad |
HK-2-cellinjen är väl karakteriserad när det gäller morfologi, storlek och arvsmassa. Många forskningsstudier har genomförts på dessa normala njurceller. |
|
Odödliggjorda |
HK-2 är en kontinuerlig cellinje med en förlängd livslängd, vilket gör att den kan förökas genom flera passager. Denna egenskap säkerställer en kontinuerlig leverans av celler för laboratorieexperiment. |
|
Epiteliala egenskaper i proximala tubuli |
HK-2-celler uppvisar en väldifferentierad fenotyp som är karakteristisk för proximala tubulusceller (PTC) som finns i den mänskliga njuren. Denna unika egenskap gör HK-2-celler till en värdefull in vitro-modell för studier av njurfysiologi, cellprocesser och reaktioner på olika stimuli. |
Begränsningar
Här följer några begränsningar för HK-2-cellinjen:
|
In vitro-modell |
HK-2 fungerar som en in vitro-modell av normala njurceller och uppvisar särskilt egenskaper hos epitelceller i proximala tubuli. Den kanske dock inte helt replikerar komplexiteten i den mänskliga njurvävnaden och den mikromiljö som finns in vivo. |
4.tillämpningar av HK-2-cellinjen inom forskning
HK-2-cellinjen har många tillämpningar inom toxikologisk forskning. Här har vi diskuterat några specifika och viktiga forskningsanvändningar av denna mänskliga proximala tubulära cellinje.
- Njurfysiologi: HK-2-celler används ofta för att studera normal njurfysiologi och -funktioner. Forskare använder dessa proximala tubulära epitelceller för att undersöka jonkanaler, transportprocesser och andra cellulära mekanismer som reglerar njurens homeostas. Forskare studerade till exempel vilken roll TRPC6-kanaler (Transient Receptor Potential Channel 6) spelar i (+)-Conocarpan (CNCP), en neolignan, inducerad celldöd i njurepitelceller, HK-2 [2].
- Njursjukdomar: Cellinjen Human Kidney 2 används för att undersöka olika njursjukdomar, t.ex. akut njurskada och diabetesnefropati, och deras underliggande cell- och molekylära mekanismer. Forskningen visade t.ex. att metyleringsnivåerna för klotho-protein är kopplade till njurskador. Minskad metylering av Klotho-genens promotor kan öka dess uttryck och lindra njurskador som inducerats i diabetiska db/db-musmodeller och HK-2-celler som behandlats med högt glukos [3].
- Toxikologiska studier: HK-2-celler är ett utmärkt forskningsverktyg för att utvärdera de potentiella effekterna av olika läkemedel, kemikalier och miljöföroreningar. Studierna kan hjälpa forskare att utvärdera läkemedelssäkerhet och biverkningar på njurceller. I en studie som publicerades 2022 utvärderades t.ex. de potentiella effekterna av polysackarider och vattenhaltigt extrakt från den naturliga örten Polygonatumkingianum (PK) på uraninducerad nefrotoxicitet i HK-2-celler. De fann att PK utövar skyddande effekter och förhindrar uranförgiftning i njurceller [4].
5.hK-2-celler: Forskningspublikationer
Nedan följer några intressanta forskningspublikationer som rör HK-2 njurepitelceller.
Denna studie i Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) föreslog att cirkulärt RNA HIPK3 kan minska HK-2-cellproliferationshämningen orsakad av hög glukostoxicitet. Dessutom kan det hämma celldöd genom att reglera miR-326/miR-487a-3p/SIRT1-kaskaden.
I denna forskningspublikation i Nanomedicine (2020) utvärderades olika toxicitetsmekanismer hos guldnanopartiklar (AuNPs) i 786-0 cancerceller och HK-2 proximala tubulära epitelceller.
Hög glukosinducerad toxicitet i HK-2-celler kan lindras genom hämning av miRNA-320c
Denna artikel publicerades i Renal Failure (2022). Resultaten visar att mikroRNA-320c kan minska den höga glukosinducerade toxiciteten i njurceller (HK-2) genom att rikta in sig på PTEN och hämma PI3K / AKT-signaleringen.
Exosomer från mesenkymala stamceller dämpar epitelial-mesenkymal övergång hos HK-2-celler
Denna studie i Tissue Engineering Part A (2022) föreslog att exosomer som härrör från mesenkymala stamceller förhindrar epitelial-till-mesenkymal övergång av HK-2-njurceller.
LncRNA TapSAKI främjar inflammationsskada i HK-2-celler och urin härledd sepsis-inducerad njurskada
I artikeln i Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) anges att lncRNA TapSAKI förstärker HK-2:s inflammationsreaktion och celldöd genom att reglera signalvägen microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
6.resurser för HK-2 cellinje: Protokoll, videor och mycket mer
HK-2 är en berömd cellinje. Här är några resurser som beskriver HK-2-cellkulturprotokollet.
- HK-2 cellkultur: Denna webbplats är berikad med HK-2-cellkulturinformation. Såsom det ger HK-2-cellmediumrecept, passeringsprotokoll och protokoll för hantering och underhåll av proliferativa och kryopreserverade kulturer.
- Cellpassage: Den här videon hjälper dig att lära dig ett allmänt delnings- eller passeringsprotokoll för adherenta cellinjer.
Referenser
- Handl, J., et al, The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds. Fysiologisk forskning, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., Aktivering av TRPC6-kanaler bidrar till (+) -konokarpaninducerad apoptotisk celldöd i HK-2-celler. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al, EGCG dämpar njurskador genom att vända klotho-hypermetylering i diabetiska db/db-möss och HK-2-celler. Oxidativ medicin och cellulär livslängd, 2020. 2020.
- Li, W., et al, Skyddande effekter av Polygonatum kingianum polysackarider och vattenhaltigt extrakt på uraninducerad toxicitet i mänskliga njurceller (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.