DLD-1-celler: Användningsområden och insikter om DLD-1-celler inom forskningen om kolorektal cancer
DLD-1 är en human cellinje för kolorektal cancer som ofta används i cancerforskning. Den är ett värdefullt verktyg för att undersöka olika aspekter av tjocktarmscancer, inklusive tumörutveckling, progression, underliggande molekylära mekanismer och respons på terapeutiska medel. DLD-1 är därför utmärkt för att förstå sjukdomen och utveckla potentiella behandlingsstrategier.
- Odlingsmedium
- RPMI 1640 med medeltillskott, inklusive 10 % fetalt bovint serum (FBS), 2,1 mM stabilt glutamin och 2,0 g/l NaHCO3, används för att odla DLD-1-celler. Mediet bör bytas 2–3 gånger per vecka.
- Fördubblingstid
- Fördubblingstiden för DLD-1 är cirka 15 timmar.
- Tillväxt
- DLD-1 är en vidhäftande human koloncancercellinje. Cellerna växer till monoskikt.
- Biosäkerhetsnivå
- BSL-1
- Finns hos
- Cytion — Beställ DLD-1
Allmänna egenskaper och ursprung för DLD-1-celler
Innan en forskare börjar arbeta med en cellinje är det första man bör ta hänsyn till dess ursprung och allmänna egenskaper. Detta avsnitt är en detaljerad introduktion till DLD-1-cellinjen. Det kommer att behandla följande vanliga frågor: Vad är DLD-1-celler? Vad är en DLD-1-cancercellinje? Vilka mutationer finns i DLD-1-cellinjen? Hur stor är en DLD-1-cell? Hur ser DLD-1-cellernas morfologi ut?
- DLD-1, en cellinje för tjocktarmscancer, har sitt ursprung i tjocktarmen hos en 67-årig manlig patient med kolorektal adenokarcinom. Den isolerades av D.L. Dexter och kollegor under 1977–1979. Denna cellinje har samma ursprung som cellinjerna HCT-8, HCT-15 och HRT-18.
- Liksom kolorektal cancer uppvisar DLD-1-celler en fenotyp med mikrosatellitinstabilitet [1].
- DLD-1-mutationer inkluderar KRAS, P53, BRAF, BRCA1 och BRCA2. På grund av DLD-1 P53-status, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 och DLD-1 KRAS-mutation anses dessa celler vara idealiska för cancerstudier.
- Dessa celler har en epitelial-liknande morfologi.
- Storleken på DLD-1-cellinjen är cirka 15 µm.
- Den humana kolorektala cancercellinjen DLD-1 har en pseudodiploid karyotyp. Cirka 86 % av cellerna har ett modalt kromosomantal på 46. Polyploidi kan dock också förekomma hos 17,1 % av cellpopulationen.
Information om odling av cellinjen DLD-1
Innan du odlar en cellinje måste du känna till dess grundläggande krav för cellodling. I detta avsnitt belyser vi de viktiga punkter du måste känna till innan du påbörjar arbetet med DLD-1-cellinjen. Detta inkluderar: Vad är DLD-1:s fördubblingstid? Vad är odlingsmediet för DLD-1? Vad är utsädesdensiteten för DLD-1-celler? Hur odlar man DLD-1-celler?
Viktiga punkter för odling av DLD-1-celler
Fördubblingstid:
Fördubblingstiden för DLD-1 är cirka 15 timmar.
Adhererande eller i suspension:
DLD-1 är en vidhäftande human koloncancercellinje. Cellerna växer till monolager.
Utsädestäthet:
DLD-1-celler utsätts med en densitet på 1 till 2 x 104 celler/cm2. Adhärenta celler tvättas med 1x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och inkuberas med passageringslösning (Accutase) vid rumstemperatur. Efter inkubation i 8 till 10 minuter tillsätts de lossnade cellerna till odlingsmediet och centrifugeras. Cellpelleten resuspenderas sedan försiktigt och cellerna hälls i nya odlingskärl som innehåller tillväxtmedium.
Odlingsmedium:
RPMI 1640 med medeltillskott, inklusive 10 % fetalt bovint serum (FBS), 2,1 mM stabilt glutamin och 2,0 g/l NaHCO3 används för att odla DLD-1-celler. Mediet bör bytas 2–3 gånger per vecka.
Odlingsförhållanden:
DLD-1-odlingar hålls i en fuktad inkubator vid 37 °C med 5 % CO2-tillförsel.
Förvaring:
DLD-1-celler förvaras i ångfasen av flytande kväve eller i en elektrisk frys med extremt låg temperatur (under -150 °C).
Frysningsprocess och medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysmedier kan användas för att frysa DLD-1-cellerna. En långsam frysprocess rekommenderas alltid, vilket möjliggör en gradvis sänkning av temperaturen med 1 °C, vilket förhindrar att cellerna utsätts för chock och skyddar deras livskraft.
Upptining:
Frysta celler tinas i ett vattenbad som är förinställt på 37 °C i 40 till 60 sekunder tills endast en liten isklump återstår. Därefter tillsätts cellerna till ett nytt medium och centrifugeras. Detta steg är nödvändigt för att avlägsna komponenter från frysmediet från cellerna. De uppsamlade cellerna resuspenderas i ett tillväxtmedium och hälls i kolven för tillväxt.
Biosäkerhetsnivå:
DLD-1-cellinjen odlas i laboratorier med biosäkerhetsnivå 1.
DLD-1-cellinjen: Fördelar och begränsningar
I detta avsnitt av artikeln kommer vi att gå igenom fördelarna och begränsningarna med DLD-1-cellinjen för tjocktarmscancer.
Fördelar
De främsta fördelarna med cellinjen DLD-1 är:
Modell för kolorektal cancer
DLD-1-celler har mutationer som ofta förekommer hos patienter med kolorektal cancer, såsom DLD-1 KRAS-mutation, DLD-1 BRCA och DLD-1 BRCA2. Denna relevans gör dem till en kliniskt lämplig cellmodell för att studera denna sjukdom.
Tumörbildande cellinje
DLD-1-celler är tumörbildande. De kan orsaka tumörer när de injiceras i nakenmöss. Därför använder forskare dessa celler för att utveckla xenotransplantat-tumörmodeller som hjälper till att undersöka tumörbildning, utveckling och progression in vivo.
Begränsningar
Begränsningarna förknippade med DLD-1-cellerna är:
Heterogenitet
DLD-1-koloncancercellpopulationer uppvisar genetisk och fenotypisk heterogenitet. Detta kan påverka generaliserbarheten av forskningsresultaten.
Forskningsmässiga tillämpningar av DLD-1-cellinjen
DLD-1-cellinjen erbjuder en rad tillämpningar inom cancerforskningen. Några framstående tillämpningar diskuteras i detta avsnitt.
- Cancerforskning: DLD-1-celler fungerar som en värdefull in vitro-modell för att förstå de molekylära mekanismerna bakom tillväxt, utveckling och progression av kolorektal cancer. Dessutom används de för att studera genuttryck, signalvägar och hur specifika genetiska mutationer påverkar cancercellernas beteende. Forskning som genomfördes 2022 visade att PI3K/Akt/YAP-signalkaskaden reglerar migrationen och invasionen av DLD-1-cellinjen för kolorektal cancer [2].
- Läkemedelsutveckling: Forskare använder DLD-1-cellinjen för att testa effektiviteten hos läkemedel mot cancer och utvärdera deras potential för behandling av koloncancer. Detta underlättar läkemedelsutvecklingen och bidrar till en effektiv bekämpning av sjukdomen. I en studie som genomfördes 2022 användes cancercellinjen DLD-1 för att undersöka den cancerhämmande effekten av kiselftalocyaniner, kemiskt syntetiserade föreningar. Studiens resultat tyder på att dessa föreningar är potenta cancerhämmande medel [3]. Intressant nog fann en annan studie den cancerbekämpande potentialen hos ett probiotiskt härlett P8-protein med hjälp av DLD-1-celler [4].
5. Forskningspublikationer om DLD-1-celler
I detta avsnitt lyfter vi fram några intressanta och ofta citerade publikationer som handlar om DLD-1-cellinjen för koloncancer.
Denna publikation finns i Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Studien fann att diosmin, en flavonoid, inducerade celldöd i DLD-1-celler och även orsakade cellcykelstopp; därmed kan det vara ett potentiellt läkemedel mot cancer.
Bromelain hämmar effektivt Kras-mutant kolorektal cancer genom att stimulera ferroptos
Denna studie i Animal Cells and Systems (2018) föreslog att bromelain, ett enzym, hämmar DLD-1 KRAS-mutationen och utövar potenta cytotoxiska effekter.
Denna forskningsartikel publicerades 2019 i tidskriften ”Environmental Toxicology”. Studien undersökte de antitumöra effekterna av en naturlig förening, bergapten, med hjälp av en DLD-1-kolorektal cellinje.
Denna studie i tidskriften Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) fann att nanokompositer av curcumin/järnoxid är mycket effektiva mot DLD-1-kolorektala cancerceller.
Denna forskningsartikel publicerades 2020 i Turkish Journal of Biology. Studien föreslog att en naturprodukt, epibrassinolid-medierad aktivering av AKT i DLD-1-celler, stimulerar autofagi relaterad till polyaminer.
Resurser för DLD-1-cellinjen: protokoll, videor och mer
Här följer några resurser om DLD-1-celler:
- DLD-1-transfektion: Denna videohandledning är en omfattande guide om DLD-1-in vitro-transfektionsprotokoll.
- DLD-1-celler: Denna forskningsartikel beskriver kortfattat kraven för DLD-1-cellodling, inklusive odlingsmedier och odlingsförhållanden. Dessutom kan den hjälpa dig att lära dig transfektionsprotokollet som används för DLD-1-celler.
Följande länkar innehåller protokollet för odling av DLD-1, humant härledda koloncancerceller.
- DLD-1-cellinje: Denna webbplats ger grundläggande information om DLD-1-cellinjen. Den hjälper dig att lära dig olika DLD-1-cellodlingsprotokoll, inklusive subodling och hantering av kryokonserverade och prolifererande odlingar.
Referenser
- Gavrilas, L.I., et al., Pro-apoptotiska gener som nya mål för enkel- och kombinationsbehandlingar med resveratrol och curcumin vid kolorektal cancer. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP-signalering främjar migration och invasion av DLD-1-kolorektala cancerceller. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Anticanceraktivitet hos nya kiselftalocyaniner mot cellinjen för kolorektal adenokarcinom (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Anti-Cancer Roles of Probiotic-Derived P8 Protein in Colorectal Cancer Cell Line DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.