Cellinjen A375 – En guide till forskning om melanom

A375 är en human melanomcellinje som används flitigt inom toxikologi och immunonkologisk forskning. Forskare använder denna cellinje för att studera cancerbiologi och signalvägar, testa eller screena potentiella läkemedel mot cancer samt utveckla nya och effektiva behandlingar.

Ursprung och allmänna egenskaper hos A375-celler

Att känna till en cellinjes ursprung och allmänna egenskaper kan hjälpa dig att planera dess användning i forskning. Detta avsnitt av artikeln behandlar ursprunget och egenskaperna hos cellinjen A375. Vad är till exempel cellinjen A375? Vilka är egenskaperna hos cellinjen A375? Varifrån kommer A375-celler? Hur ser morfologin hos A375-melanomceller ut? Hur stor är A375-cellen?

• Hudcancercellinjen A375 har sitt ursprung i en explantatodling från en solid tumör hos en 54-årig kvinna med malignt melanom [1].
• A375-celler har en epitelial morfologi.
• A375-cellernas storlek är relativt mindre jämfört med andra cellinjer. De har ungefär en diameter på 12 µm.
• A375-melanomcellerna är hypotriploida. Det modala kromosomantalet för denna cellinje är 62. Vanligtvis har varje cell nio markörkromosomer och en kopia av de normala kromosomerna N2, N6 och N22.

A375-celler: Information om cellodling

A375-cellkulturer är lätta att underhålla. De ställer inga krävande krav på cellodling. Detta avsnitt hjälper dig att lära dig nödvändig information om cellodling. Till exempel vad är fördubblingstiden för A375? Vad är odlingsmediet för A375-cellinjen? Vad är utsädesdensiteten för A375? Är A375-melanomceller vidhäftande?

Viktiga punkter för odling av A375-celler

Populationsfördubblingstid:

Fördubblingstiden för A375 är 20 timmar.

Adhärenta eller i suspension:

A375 är en vidhäftande human melanomcellinje.

Utsädestäthet:

En celltäthet på 1 x 10⁴ celler/cm² är idealisk för A375-cellkulturer. Adhärenta celler sköljs med 1 x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och inkuberas med passageringslösning (Accutase). Därefter tillsattes celler med odlingsmedium och centrifugerades. Skördade celler resuspenderades i ett odlingsmedium och fördelades i nya kolvar för tillväxt.

Odlingsmedium:

DMEM rekommenderas som idealiskt A375-medium när det kompletteras med 10 % fetalt bovint serum (FBS), 4,5 g/l glukos, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamin och 1,0 mM natriumpyruvat. A375-mediet bör bytas ut 2–3 gånger per vecka.

Odlingsförhållanden:

A375-melanomceller odlas i en fuktad inkubator (37 °C) med 5 % CO2-tillförsel.

Förvaring:

Frysta A375-celler ska förvaras vid en temperatur under -150 °C i flytande kväves ångfas eller i en elektrisk frys.

Frysningsprocess och medium:

CM-1- eller CM-ACF-medier används för att frysa A375-cellinjen. En långsam frysningsprocess som möjliggör en gradvis temperatursänkning med 1 °C har valts för att skydda cellernas livskraft.

Upptining:

Flaskan med frysta A375-melanomceller skakas kraftigt i vattenbadet i 40 till 60 sekunder tills endast en liten isklump återstår. Celler tillsätts med färskt medium och centrifugeras för att avlägsna frysmedieelement. Den erhållna cellpelleten resuspenderades återigen och hälldes i nya kolvar.

Biosäkerhetsnivå:

A375-odlingar hanteras och underhålls i laboratoriemiljöer med biosäkerhetsnivå 1.

Forskningsmässiga tillämpningar av cellinjen A375

Cellinjen A375 har omfattande forskningsanvändningar inom cancerforskning. Här är några av de vanligaste områdena där A375-celler används.

• Cancerforskning: A375-celler har omfattande tillämpningar inom melanomforskning. Forskare använde dessa celler för att undersöka hudcancerbiologi, processer och underliggande cellsignaleringsmekanismer, inklusive cellproliferation, migration och invasion. Detta kan också hjälpa forskare att identifiera nya molekylära terapeutiska mål. En studie som genomfördes av Lin Zhu och kollegor 2019 använde mycket aggressiva melanomceller A375 och fann mikroRNA-3662:s roll för tillväxten och invasionen av A375-melanomceller. Studiens resultat visar att mikroRNA-3662 riktar sig mot ZEB1-genen och reglerar melanomcellernas tillväxt in vitro och in vivo i A375-tumörmodellen [2]. På samma sätt visade forskning som genomfördes 2018 att PI3K/AKT- och MAPK/ERK-signalvägarna är involverade i proliferation och metastasering av A375-cellinjen [3].
• Läkemedelsutveckling och testning: A375-cellinjen är en användbar in vitro-tumörmodell för att testa och screena potentiella läkemedel mot cancer. Forskare utvärderar toxiciteten och effekten hos nya kemoterapeutiska läkemedel, föreningar och andra terapier med hjälp av dessa A375-melanomceller. I en studie undersöktes till exempel de cancerbekämpande egenskaperna hos mikro- och nanovesiklar från grapefrukt på A375-celler från humant melanom. Resultaten visade att mikro- och nanovesiklar inducerar cellcykelstopp och apoptos samt hämmar genuttrycket vid cellproliferation, migration och invasion [4].

A375-celler: Publikationer

Här nämns några viktiga forskningspublikationer som handlar om A375-celler.

Vitamin D och dess kalciumsnåla analoger modulerar de cancerbekämpande egenskaperna hos cisplatin och dakarbazin i den humana melanomcellinjen A375

Denna studie publicerades i Journal of Oncology 2019. Studien föreslog att samtidig behandling med vitamin D och analoger förbättrar den cancerbekämpande aktiviteten hos cisplatin och dakarbazin i A375-melanomceller.

In vitro-utvärdering av de anti-melanom-effekterna (A375-cellinjen) hos gel- och helbladsextrakt från utvalda aloe-arter

Denna forskning publicerades i Journal of Herbal Medicine 2022. Studien undersökte de anti-melanom-effekterna av aloe vera-gel i A375-melanomceller.

Fermitin-familjemedlem 2 främjar melanomprogression genom att förstärka bindningen av p-α-Pix till Rac1 för att aktivera MAPK-signalvägen

Denna studie i Oncogene (2021) föreslog att fermitin-familjemedlem 2 (FERMT2 eller kindlin-2) främjar utvecklingen av melanom genom att aktivera MAPK via bindning med p-α-Pix och Rac1.

FARP1 underlättar cellproliferation genom att modulera MAPK-signalvägen i hudmelanom

Denna studie i The American Journal of Dermatopathology (2019) föreslog att FARP1 kan underlätta utveckling och progression av hudmelanom. Det kan därför vara ett användbart terapeutiskt mål.

Cytotoxiska och apoptotiska egenskaper hos extrakt av Phyllodium elegans på humana cancercellinjer

Denna forskningsartikel publicerades i Bioengineered (2019). Studien undersökte den cytotoxiska och apoptotiska aktiviteten hos ett extrakt från växten Phyllodium elegans på humana karcinomcellinjer, inklusive A375.

Resurser för A375-cellinjen: protokoll, videor och mer

Nedan följer några online-resurser om A375-celler.

• Transfektion av A375-celler: Denna videohandledning hjälper dig att lära dig transfektion av A375-celler steg för steg.
• Cellodling: Denna video innehåller mycket användbar information om odling av cellinjer.

Protokollen för cellodling av A375-celler finns listade här.

• A375-cellinjen: Denna länk innehåller användbar information om odling och underhåll av A375-cellinjen, inklusive A375-odlingsmedier och hantering av frysta och prolifererande A375-odlingar.

Referenser

1. Avram, S., et al., Standardisering av A375-modeller för humant melanom på kyllingembryons korioallantoismembran och Balb/c-nakenmöss. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89–99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 riktar sig mot ZEB1 och dämpar invasionen av den mycket aggressiva melanomcellinjen A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C hämmar cellproliferation och metastasering hos melanom A375 genom att undertrycka PI3K/Akt- och MAPK/ERK-signalvägarna. Life sciences, 2018. 206: s. 35–44.
4. Stanly, C., et al., Mikro- och nanovesiklar från grapefrukt uppvisar distinkta metabolomprofiler och anticanceraktiviteter i den humana melanomcellinjen A375. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.