Cellinjen Neuro-2a
Neuro-2a är en musbaserad nervcellinje som används i stor utsträckning inom neurovetenskaplig forskning. Dessa celler används främst för att studera nervutveckling, differentiering, neurotoxicitet, cellsignaleringsvägar och axonal tillväxt. Dessutom används de för läkemedelsutveckling och screening.
Denna artikel fokuserar på viktiga aspekter av Neuro-2a-neuroblastomceller som kan vara till hjälp innan du påbörjar arbetet med dem. Den kommer främst att behandla:
- Allmänna egenskaper och ursprung hos Neuro-2a-celler
- Information om odling av cellinjen Neuro-2a
- Fördelar och nackdelar med Neuro-2a-cellinjen
- Forskningsmässiga tillämpningar av Neuro-2a-cellinjen
- Forskningspublikationer om Neuro-2a-celler
- Resurser för Neuro-2a-celler: protokoll, videor och mer
Allmänna egenskaper och ursprung för Neuro-2a-celler
Denna del av artikeln behandlar bakgrunden och de grundläggande egenskaperna hos cellinjen Neuro-2a som är viktiga att känna till innan man arbetar med den. Här får du lära dig: Vad är cellinjen Neuro-2a? Vad är ursprunget till cellinjen Neuro-2a ? Vad är celldifferentiering hos Neuro-2a? Hur stor är en Neuro-2a-cell? Hur ser morfologin hos Neuro-2a-celler ut?
- Neuro-2a-cellerna härstammar från en spontan tumör (neuroblastom) hos en albino-mus (stam A). Cellinjen etablerades av R.J. Klebe och F.H. Ruddle.
- Neuro-2a-neuroblastomcellerna uppvisar en morfologi som är typisk för både nervceller och amöboida stamceller.
- Neuro-2a-cellernas storlek är 12 mikrometer i höjd [1].
- Kromosomantalet hos Neuro-2a-celler kan variera mellan 59 och 193, med ett modalt antal på 95. Karyotypen hos dessa neuroblastomceller är instabil inom intervallet 94 till 98 kromosomer.
Information om odling av cellinjen Neuro-2a
Neuro-2a-celler används i stor utsträckning i forskningslaboratorier inom neurovetenskap. Innan du arbetar med dessa celler bör du ta del av den viktiga informationen om cellodling som anges nedan. Detta kan underlätta arbetet för dig. Du kommer att få veta: Vad är ett Neuro-2a cellodlingsmedium? Hur odlar man Neuro-2a-celler? Vad är fördubblingstiden för Neuro-2a-celler? Vad är utsädesdensiteten för Neuro-2a ? Vad är odlingsprotokollet för Neuro-2a-celler? Vad är odlingsmediet för Neuro-2a-celler?
Viktiga punkter för odling av Neuro-2a-celler
Fördubblingstid:
Fördubblingstiden för Neuro-2a-celler är cirka 70 timmar.
Adherenta eller i suspension:
Neuro-2a är en vidhäftande cellinje.
Utsädestäthet:
Den optimerade utsädesdensiteten för cellinjen Neuro-2a är 1 x 10⁴ celler/cm². Inför utsädet tvättas cellerna med magnesium- och kalciumfri fosfatbuffrad saltlösning (1x). Därefter tillsätts en passageringslösning (Accutase) och cellerna inkuberas i 8 till 10 minuter vid rumstemperatur. Efter celldissociation tillsätts färskt odlingsmedium och cellerna centrifugeras. Den skördade cellpelleten resuspenderas försiktigt och cellerna hälls över i ett odlingskärl för tillväxt.
Odlingsmedium:
EMEM används för odling av Neuro-2a-celler. Det innehåller 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM natriumpyruvat och NEAA för optimal celltillväxt. Mediet bör bytas ut 1 till 2 gånger per vecka.
Odlingsförhållanden:
Neuro-2a-odlingar hålls i en fuktad inkubator vid 37 °C ansluten till en 5 % CO₂-tillförsel.
Förvaring:
Cellerna ska förvaras vid en temperatur under -150 °C i en elektrisk frys med extremt låg temperatur eller i gasfasen av flytande kväve för långvarig förvaring.
Frysningsprocess och odlingsmedium:
CM-1- eller CM-ACF-medier används för att frysa Neuro-2a-celler. Cellerna fryses genom en långsam frysningsprocess som endast tillåter en temperatursänkning på 1 °C per minut. Detta skyddar cellerna från chock och bibehåller deras livskraft.
Upptining:
För att tina upp frysta odlingar placeras provröret i ett vattenbad vid 37 °C i 40 till 60 sekunder tills endast en liten isklump återstår. Därefter tillsätts odlingsmedium och cellerna centrifugeras. Detta steg hjälper till att avlägsna komponenter från frysmediet. Cellpelleten resuspenderas sedan och cellerna överförs till en ny kolv fylld med odlingsmedium. Därefter placeras cellerna i en inkubator vid 37 °C i minst 24 timmar.
Biosäkerhetsnivå:
Laboratoriemiljöer med biosäkerhetsnivå 1 är obligatoriska för hantering och underhåll av Neuro-2a-kulturer.
- Fördelar och nackdelar med cellinjen Neuro-2a
- Forskningsmässiga tillämpningar av cellinjen Neuro-2a
- Information om odling av cellinjen Neuro-2a
- Allmänna egenskaper och ursprung för Neuro-2a-celler
- 5. Forskningspublikationer om Neuro-2a-celler
- Resurser för Neuro-2a-celler: protokoll, videor och mer
- Vanliga frågor
Fördelar och nackdelar med cellinjen Neuro-2a
Neuro-2a-celler har vissa fördelar och nackdelar som skiljer dem från andra neuronala cellinjer. Här listas några viktiga för- och nackdelar med dessa celler.
Fördelar
Fördelarna med den murina neuroblastomcellinjen Neuro-2a är:
-
Lätt att odla:
Neuro-2a-cellinjen kräver inga komplexa eller invecklade cellodlingsprocedurer. De är lätta att odla och underhålla i forskningslaboratorier.
-
In vitro-modell för nervceller:
Neuro-2a är en praktisk nervcellsmodell som används i stor utsträckning av forskare inom studier av nervcellers utveckling och differentiering.
Nackdelar
Nackdelarna med Neuro-2a-celler är:
-
Musursprung:
Neuro-2a har sitt ursprung i möss, och forskare bör iaktta försiktighet när de extrapolerar resultat från studier baserade på möss till människors hälsa och sjukdomar, eftersom biologin hos möss och människor kan skilja sig avsevärt åt.
Forskningsmässiga tillämpningar av cellinjen Neuro-2a
Neuro-2a-celler har många tillämpningar inom neurovetenskaplig forskning. Här diskuteras några lovande användningsområden för denna cellinje:
- Neural utveckling: Neuro-2a är en in vitro-modell för nervceller som används i stor utsträckning för att studera nervcellernas utveckling och relaterade processer såsom differentiering, axonal tillväxt och synapsbildning. I en studie som genomfördes 2020 användes Neuro-2a-celler för att undersöka mikroRNA-124:s roll i retinsyrainducerad nervcellsdifferentiering [2]. En annan studie undersökte uttrycket av retinsyrareceptor gamma (RARG) och miRNA-124 i neuroblastomcellinjen (N2A). Studien föreslog att RARG är ett mål för miR-124 och hämmar neuritutväxten [3].
- Neurotoxicitet: Neuro-2a används även för att bedöma de toxiska effekterna av läkemedel, kemikalier eller miljöfaktorer på nervceller. I en studie utförd av Zhihong Yin och kollegor undersöktes exempelvis neurotoxiciteten hos bisfenol A (BPA), en miljökemikalie, med hjälp av Neuro-2a-celler. De observerade att BPA hämmar nervcellernas differentiering och proliferation genom att störa deras cellulära och synaptiska integritet [4].
- Läkemedelsscreening: Neuro-2a-celler används även för att utvärdera den terapeutiska verkan hos olika läkemedel, föreningar och naturprodukter. I en studie användes exempelvis Neuro-2a-celler för att undersöka den antioxidativa potentialen hos växtextrakt från Ginkgo biloba. Dessutom visade forskningen att det leder till en minskning av Aβ-aggregering och kan utgöra en potentiell behandling mot Alzheimers sjukdom [5].
5. Forskningspublikationer som behandlar Neuro-2a-celler
Här följer några intressanta forskningsartiklar om cellinjen Neuro-2a.
Denna studie, publicerad i Journal of Natural Medicines 2018, undersökte de terapeutiska effekterna av alkamider isolerade från vitpeppar (P. nigrum) på Neuro-2a-neuronceller.
Nedreglering av Nkx2.1 är inblandad i hjärnavvikelser orsakade av överskott av retinsyra
Denna forskning, publicerad i Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2020, föreslog att Nkx2.1-genen spelar en viktig roll i utvecklingen av mushjärnan genom att reglera Shh-signalkaskaden.
Denna artikel publicerades i Toxicology and Industrial Health (2023) och föreslog att miljögiftet bisfenol A utlöser neurotoxicitet i neuro-2a-celler och stör deras synapser och cytoskelett.
Denna artikel i tidskriften Pharmaceuticals (2021) föreslår att läkemedlet hexarelin modulerar PI3K/AKT- och MAPK-signalvägarna i neuroblastomceller (Neuro-2a) och hämmar väteperoxidinducerad apoptos i Neuro-2a-celler.
Denna forskningsartikel i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) föreslår att fruktextrakt från Emblica officinalis hämmar neuroinflammation i Neuro-2a-celler och därmed kan vara till nytta vid neuroinflammatoriska sjukdomar.
Resurser för Neuro-2a-celler: protokoll, videor och mer
Nedan följer de online-resurser som finns tillgängliga om Neuro-2a-celler. De inkluderar protokoll för cellodling och transfektion av Neuro-2a-celler.
- Transfektionsprotokoll för Neuro-2a: Neuro-2a är en lämplig transfektionsvärd. Denna länk ger vägledning om transfektionsprotokollet för cellinjen. Transfektionseffektiviteten för Neuro-2a varierar beroende på vilket reagens som används.
Följande länk innehåller protokollet för cellodling av Neuro-2a.
- Protokoll för cellodling av Neuro-2a: Denna länk hjälper dig att lära dig protokollet för subkultivering av Neuro-2a-celler.
- Neuro-2a-celler: Webbplatsen innehåller omfattande information om odlingsmedier för Neuro-2a-celler, utsädesdensitet samt protokoll för subkultivering och hantering av kryokonserverade och proliferativa odlingar.
Referenser
- Lulevich, V., et al., Enkelcellsmekanik utgör ett känsligt och kvantitativt sätt att undersöka interaktioner mellan amyloid-beta-peptid och nervceller. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872–7.
- You, Q., et al., miR-124:s roll i regleringen av retinsyrainducerad Neuro-2A-celldifferentiering. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133–1139.
- Su, X., et al., Retinsyrareceptor gamma är mål för mikroRNA-124 och hämmar neuritutväxt. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisfenol-A-exponering inducerade neurotoxicitet och var associerad med synapser och cytoskelettet i Neuro-2A-celler. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L., et al., Ginkgo biloba-extrakt (EGb) hämmar oxidativ stress i Neuro-2A-celler som överuttrycker APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.