NCI-H1299-celler: Forskning och kliniska implikationer av NCI-H1299-lungcancerceller

Information om odling

Det är inte lätt att underhålla en cellinjekultur förrän man känner till all viktig information om den, inklusive: Vad är fördubblingstiden för NCI-H1299? Vad är utsädesdensiteten för NCI-H1299? Vilket odlingsmedium används för NCI-H1299? Hur odlar man NCI-H1299-cellinjer? I detta avsnitt får du svar på alla dessa frågor om odling av NCI-H1299-celler.

Viktiga punkter för odling av NCI-H1299-celler

Fördubblingstid:

Fördubblingstiden för NCI-H1299 ligger mellan 22 och 30 timmar.

Adherenta eller i suspension:

NCI-H1299 är en vidhäftande cellinje.

Subkultiveringsförhållande:

NCI-H1299-celler subkultiveras i ett rekommenderat förhållande på 1:3 till 1:6. För utsäde tvättas de vidhäftande cellerna med 1x PBS och inkuberas med Accutase-passageringslösning i 8 till 10 minuter vid rumstemperatur. Lösa celler tillsätts färskt odlingsmedium och centrifugeras. Cellpelleten resuspenderas sedan och cellerna hälls över i nya kolvar som innehåller odlingsmedium.

Odlingsmedium:

RPM1 1640 är ett idealiskt odlingsmedium för NCI-H1299-celler. Det kompletteras med 10 % fetalt bovint serum, 4500 mg/l glukos, 2,0 mM L-glutamin, 1 mM natriumpyruvat, 1500 mg/l NaHCO3 och 10 mM HEPES. Odlingsmediet bör bytas ut 2–3 gånger per vecka.

Odlingsförhållanden:

NCI-H1299-lungcancercellkulturer odlas i en befuktad inkubator vid 37 °C med 5 % CO₂-tillförsel.

Förvaring:

Cellinjen NCI-H1299 kan förvaras långsiktigt i ångfasen av flytande kväve eller i frysar med extremt låg temperatur vid under -150 °C.

Frysningsprocess och medium:

CM-1 eller CM-ACF är frysmedier för NCI-H1299-celler. Cellerna fryses med en långsam frysprocess som endast tillåter en temperatursänkning på 1 grad per minut för att skydda cellernas livskraft.

Upptining:

Frysta NCI-H1299-celler omrörs snabbt i ett förvärmt vattenbad vid 37 grader Celsius i 40 till 60 sekunder tills endast en liten isbit återstår. Upptinade celler tillsätts färskt medium och kan odlas direkt i nya kolvar eller centrifugeras. I det förstnämnda fallet bör mediet bytas ut efter 24 timmars inkubation. Centrifugering hjälper till att avlägsna beståndsdelar från frysmediet. Därefter resuspenderas de skördade cellerna i färskt medium och överförs till en ny kolv för odling.

Biosäkerhetsnivå:

Ett laboratorium med biosäkerhetsnivå 1 krävs för hantering av NCI-H1299-cellkulturen.

Köp cellinjen NCI-H1299: högkvalitativa forskningsverktyg för att undersöka lungcancerbiologin

Fördelar och nackdelar med NCI-H1299-celler

Precis som andra humana cancercellinjer har även NCI-H1299 vissa utmärkande egenskaper som är förknippade med specifika för- och nackdelar. Här har vi sammanfattat några av de viktigaste.

Fördelar

De främsta fördelarna med cellinjen NCI-H1299 för icke-småcellig lungcancer är:

• In vitro-modell för lungcancer

  NCI-H1299-cellinjer har utvecklats från lymfkörtelmetastaser från lungkarcinom och har därför relativt likartade egenskaper. Dessa celler kan därför fungera som en in vitro-modell för att undersöka lungcancerbiologi, cellulära och molekylära mekanismer samt för att screena och testa potentiella behandlingar.

• Lätt att odla

  NCI-H1299-celler är lätta att odla och underhålla i ett forskningslaboratorium. Det finns inga krångliga krav eller procedurer för cellodling.

• NCI-H1299 P53 och NCI-H1299 KRAS-mutation

  NCI-H1299-celler saknar p53-genuttryck, vilket gör att cellerna kan föröka sig kraftigt. Dessutom har de en KRAS-mutation som bidrar till celltillväxt, proliferation, invasion och migration. Med tanke på detta använder forskare H1299-celler för att undersöka molekylära mekanismer som är relevanta för KRAS- och P53-mutationer.

Nackdelar

Nackdelarna med NCI-H1299-celler är:

• Vävnadsspecificitet

  NCI-H1299 härstammar från lungvävnad. Därför är dess tillämpbarhet huvudsakligen begränsad till forskning om lungcancer. Den kanske inte fullt ut representerar andra cancertypers heterogenitet och allmänna egenskaper.

Forskningsmässiga tillämpningar av NCI-H1299-celler

Cellinjen NCI-H1299 används i stor utsträckning inom lungcancerforskningen. Här nämns några lovande tillämpningar av denna cellinje.

• Cancerbiologi: NCI-H1299-celler utgör ett utmärkt forskningsverktyg för att undersöka cancerutveckling, progression samt relaterade cellulära och molekylära mekanismer. Dessa celler bär på vissa mutationer, vilket gör det möjligt för forskare att utforska relaterade beteenden hos cancerceller, signalvägar och genuttrycksprofiler. Flera studier har använt cellinjen NCI-H1299 för icke-småcellig lungcancer för att studera lungcancerbiologi. Till exempel undersökte en studie som genomfördes 2018 den signalväg som är involverad i lungcellerens apoptos med hjälp av NCI-H1299-celler. Forskarna fann att PI3K/AKT-signalvägen bidrar till cellproliferation och att hämning av denna väg kan leda till cancercelldöd [1]. På samma sätt undersökte en annan studie de mekanismer som är involverade i epitel-till-mesenkym-övergången (EMT) hos NCI-H1299. Denna studie föreslog att ett extracellulärt protein, SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), bidrar till NCI-H1299:s EMT och migration och därmed främjar tumörbildning i cellerna – SPARC-proteinet fungerar som en mediator för TGF-β1-signalering [2]. 

• Läkemedelsutveckling och screening: NCI-H1299, en human lungcancercellinje, används i stor utsträckning för att bedöma toxiciteten och effekten hos potentiella läkemedel. Dessutom används den av forskare för att undersöka verkningsmekanismen hos antitumörläkemedel. I studier har dessa celler även använts för att identifiera möjliga läkemedelsmål och resistensmekanismer. Till exempel undersökte Xiao-Yun Shen och kollegor i sin forskning den naturliga föreningen brucein D:s (BD) potential som cancerläkemedel. Resultaten visade att BD avsevärt hämmar proliferation, invasion och migration hos NCI-H1299-celler. Därför kan det betraktas som en potentiell adjuvant behandling för icke-småcellig lungcancer [3]. På samma sätt utvärderade en studie de cytotoxiska effekterna av xanthohumol, både ensamt och i kombination med kemoterapiläkemedlet cisplatin, på NCI-H1299-lungcancerceller [4].

Vanliga frågor om cellinjen NCI-H1299

Referenser

1. Gu, J., et al., Studie av EGCG-inducerad apoptos i lungcancerceller genom hämning av PI3K/Akt-signalvägen. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557–4563.
2. Sun, W., et al., SPARC fungerar som en mediator för TGF-β1 vid främjandet av epitel-till-mesenkym-övergången i A549- och H1299-lungcancerceller. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453–464.
3. Shen, X.-Y., m.fl., En studie av verkningsmekanismen hos brucein D vid behandling av icke-småcelliga lungcancerceller av typen H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
4. Long, B., m.fl., Cytotoxiska effekter av xanthohumol och dess kombination med cisplatin på humana metastaserande lungcancerceller av typen H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1–15.