Linia celulară RAW 264.7 în cercetarea privind macrofagele și imunologia
Linia celulară RAW 264.7 servește ca model in vitro robust pentru macrofagele murine, fiind fundamentală în domeniul cercetării imunologice. Provenind de la un șoarece mascul BALB/c, aceste celule au fost transformate de virusul leucemiei murine Abelson, rezultând o linie celulară de tip macrofag. Datorită stabilității lor funcționale și capacității inerente de a realiza atât fagocitoza, cât și pinocitoza, celulele RAW 264.7 sunt esențiale pentru studiul interacțiunilor gazdă-patogen, ceea ce le face o piatră de temelie în eforturile de cercetare imunologică [1,2].
- Mediu de creștere
- Consultați pagina produsului
- Timp de dublare
- Consultați pagina produsului
- Tip de creștere
- Aderent
- Nivel de biosiguranță
- BSL-1
- Disponibil de la
- Cytion — Comandați RAW 264.7
Caracteristici morfologice și comportament de creștere
La examinare, celulele RAW 264.7 prezintă o creștere semi-aderentă, cu tendința de a forma atât celule aderente în formă de fus, cât și celule viabile sferice plutitoare, cu un diametru celular cuprins între 10 și 20 µm. Această natură polimorfă și adaptabilitatea la condițiile de cultură fac din celulele RAW 264.7 un instrument versatil pentru manipulare și observare experimentală.
Funcția imunologică și prezentarea antigenului
În calitate de celule prezentatoare de antigen, celulele RAW 264.7 joacă un rol esențial în sistemul imunitar. Funcția lor se extinde dincolo de simpla recunoaștere a agenților patogeni, ajungând la procesarea și prezentarea antigenelor către celulele T, orchestrând astfel un răspuns imunitar cuprinzător. Această dinamică facilitează o înțelegere mai profundă a modului în care sistemul imunitar identifică și neutralizează entitățile străine.
Polarizarea macrofagelor: paradigma M0, M1 și M2
Celulele RAW 264.7, în starea lor bazală ca macrofage M0, posedă capacitatea remarcabilă de a se polariza fie către fenotipul proinflamator M1, fie către cel antiinflamator M2. Această capacitate de polarizare oferă cercetătorilor un model pentru a studia influențele și efectele diverselor citokine și factori de mediu asupra funcției macrofagelor și a răspunsurilor imune [3,4].
Osteoclastogeneza și remodelarea osoasă
Deși nu sunt ele însele osteoclaste, celulele RAW 264.7 au jucat un rol esențial în studierea osteoclastogenezei — procesul de formare a osteoclastelor. Aceste celule facilitează explorarea expresiei genelor osteoclastice și a receptivității acestora la activarea receptorilor. Această cercetare are implicații profunde pentru înțelegerea fiziopatologiei unor afecțiuni precum osteoporoza, în care remodelarea osoasă dereglată este o caracteristică definitorie.
Informații privind cultura celulară RAW 264.7
Înainte de a începe experimentele, trebuie să înțelegeți câteva informații de bază despre această linie celulară puternică. Știți care este timpul de dublare al celulelor RAW 264.7? Care este densitatea de însămânțare pentru aceste celule și sunt ele aderente? Mai mult, care sunt condițiile optime de creștere pentru RAW 264.7? Continuați să citiți pentru a descoperi toate răspunsurile de care aveți nevoie pentru a lucra cu această linie celulară incredibilă!
Informații privind cultura celulară
Linia celulară RAW 264.7
Timpul de dublare a populației
11 până la 30 de ore
Aderente sau în suspensie
În mare parte aderentă, cu unele populații de celule în suspensie
Densitatea de însămânțare
4 x 10^4 celule/cm^2
Mediu de creștere recomandat
RPMI 1640 suplimentat cu 10% ser fetal bovin și L-glutamină (2,5 mM)
Condiții optime de creștere
Incubator umidificat cu 5% CO₂ și temperatură de 37 °C
Înlocuirea mediului
De 2 până la 3 ori pe săptămână
Depozitare
Faza gazoasă a azotului lichid
CM-1 sau CM-ACF
Procesul de congelare
Congelare lentă
Procesul de decongelare
Agitare rapidă într-o baie de apă la 37 °C
Nivel de biosecuritate
Se recomandă un laborator de nivel BSL-2
Macrofage murine RAW 264.7 la diferite grade de confluență.
Avantajele și dezavantajele celulelor RAW 264.7
Avantaje
- Cultivare ușoară: Linia celulară RAW 264.7 este ușor de cultivat și întreținut în laborator, fără cerințe complicate.
- Bine caracterizată: RAW 264.7 este o linie celulară bine caracterizată, ceea ce înseamnă că prezintă caracteristici fenotipice și funcționale stabile.
- Model in vitro de macrofage: Deoarece celulele RAW 264.7 sunt macrofage, acestea prezintă funcții esențiale specifice macrofagelor, precum fagocitoza și pinocitoza. Prin urmare, sunt adesea utilizate ca model in vitro de macrofage.
- Diferențierea în osteoclaste: Celulele RAW 264.7 pot fi diferențiate în osteoclaste folosind factori moleculari specifici. Aceste celule diferențiate sunt capabile să realizeze remodelarea osoasă, similar cu osteoclastele.
Dezavantaje
- Reprezentare insuficientă a macrofagelor primare: Fiind o linie celulară transformată, RAW 264.7 s-ar putea să nu reprezinte cu exactitate caracteristicile macrofagelor primare și ar putea prezenta unele diferențe în ceea ce privește expresia genică, fenotipul și funcția.
- Limitări în screeningul medicamentelor: este posibil ca celulele RAW 264.7 să nu fie potrivite pentru toate tipurile de teste de screening al medicamentelor, iar răspunsurile lor la anumite medicamente pot diferi de cele ale macrofagelor primare.
- Aderență celulară puternică: Celulele RAW 264.7 aderă puternic la suprafața flaconului de cultură și, uneori, pot fi dificil de detașat.
Aplicații ale celulelor RAW 264.7 în mimarea macrofagelor și studiile imunologice
Modelarea răspunsurilor imunologice celulare
Linia celulară RAW 264.7, care reflectă funcționalitățile macrofagelor autentice, reprezintă un model cheie pentru investigarea răspunsurilor celulare la agenți patogeni și stimuli imunologici. Un studiu care a evidențiat acest aspect a evaluat efectele imunomodulatoare și antioxidante ale bacteriilor lactice ucise prin încălzire asupra acestor celule, oferind descoperiri semnificative în ceea ce privește reglarea sistemului imunitar [5 ].
În completarea acestui studiu, o cercetare efectuată în 2019 a elucidat impactul imunologic al expunerii celulelor RAW 264.7 la polizaharide provenite din planta Polygonatum sibiricum. Studiul a concluzionat că acești compuși declanșează un răspuns imun prin activarea căilor de semnalizare NF-κB/MAPK, oferind o înțelegere moleculară aprofundată [6].
Explorarea osteoclastogenezei
Funcționând ca model pentru studiile privind diferențierea osteoclastelor, celulele RAW 264.7 contribuie la elucidarea comportamentului osteoclastelor și a căilor de diferențiere. Astfel de cercetări ne extind cunoștințele privind mecanismele de resorbție osoasă și patogeneza osteoporozei. Tehnicile avansate de imagistică sunt adesea utilizate pentru a monitoriza modificările intracelulare și pentru a analiza metabolismul hemei în cadrul acestor celule.
Obținerea de informații moleculare privind osteoclastogeneza
În ciuda rolului lor principal ca model de macrofage, celulele RAW 264.7 sunt utilizate și pentru cercetarea in vitro a osteoclastogenezei. Prin inducerea unor caracteristici similare celor ale osteoclastelor în aceste celule, cercetătorii obțin informații despre procesul de diferențiere și comportamentul pre-osteoclastelor, deși este esențial să se țină seama de caracteristicile inerente și de originea liniei celulare în aceste studii.
Screeningul bioactivității produselor naturale
Screeningul bioactivității produselor naturale este o altă aplicație în care celulele RAW 264.7 excelează. De exemplu, utilizarea lor într-un studiu coreean care a investigat proprietățile imunostimulatoare ale unui amestec pe bază de plante a demonstrat eficacitatea liniei celulare în identificarea compușilor bioactivi din substanțele naturale [7 ].
Publicații științifice care utilizează celule RAW 264.7
Există numeroase publicații de cercetare disponibile privind linia celulară de macrofage de șoarece RAW 264.7:
- Polisaharidele din Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induc o răspuns imun în linia celulară RAW 264.7 prin intermediul căii NF-κB/MAPK: Acest studiu a sugerat că polizaharidele obținute din planta Polygonatum sibiricum pot declanșa un răspuns imun în linia celulară de macrofage de șoarece RAW 264.7 prin reglarea cascadei de semnalizare NF-κB/MAPK.
- Efectele imunomodulatoare ale extractului de Tinospora crispa și ale compușilor săi principali asupra funcțiilor imunitare ale macrofagelor RAW 264.7: Acest articol publicat în revista International Immunopharmacology descrie faptul că extractul din planta Tinospora crispa și principalii săi constituenți au un efect imunomodulator și imunostimulator asupra liniei celulare de macrofage RAW 264.7.
- Bacteriile lactice ucise prin încălzire inhibă producția de oxid nitric prin intermediul sintazei de oxid nitric inducibile și al ciclooxigenazei-2 în celulele RAW 264.7: Acest studiu a sugerat că bacteriile lactice ucise prin încălzire pot fi utilizate potențial în sinteza produselor probiotice, deoarece posedă proprietăți imunomodulatoare și antioxidante. Cercetătorii au utilizat celule RAW 264.7 pentru a studia aceste activități biologice.
- Efectul unei formulări pe bază de plante asupra potențării răspunsului imun în macrofagele RAW 264.7: Acest studiu a utilizat celule RAW 264.7 pentru a studia efectul imunostimulator al unei formulări pe bază de plante denumită KM1608. Studiul a sugerat că KM1608 ar putea fi un potențial agent de potențare a răspunsului imun.
- O analiză a plantelor utilizate în medicina tradițională columbiană a evidențiat potențialul antiinflamator al caliciilor de Physalis angulata: Acest articol, publicat în „Saudi Journal of Biological Sciences”, a investigat potențialul antiinflamator al a 10 plante tradiționale columbiene utilizate frecvent, folosind celule RAW 264.7 stimulate cu LPS.
Celulele RAW 264.7: resurse, protocoale, videoclipuri și multe altele
Celulele RAW 264.7 sunt adesea utilizate în studiile de transfecție. Următoarele resurse explică diferite metode de transfecție utilizate pentru linia celulară RAW 264.7.
- Transfectarea celulelor RAW 264.7: Acest site web oferă un protocol pentru transfectarea macrofagelor RAW 264.7 folosind un reactiv de lipofectamină.
- Protocol de transfecție: Acest articol publicat descrie un protocol detaliat pentru transfecția celulelor RAW 264.7.
- Metodă eficientă de transfecție pentru celulele RAW 264.7: Acest document descrie o altă abordare practică de transfecție folosind celulele RAW 264.7.
Videoclipuri legate de linia celulară RAW 264.7
- Cultivarea celulelor RAW 264.7: Acest videoclip explică protocolul de pasare a celulelor RAW 264.7.
- Metoda de transfecție: Acest videoclip prezintă transfecția celulelor RAW 264.7 cu o genă reporter.
Întrebări frecvente esențiale despre linia celulară RAW 264.7: perspective asupra cercetării privind mimica macrofagelor și osteoclastogeneza
Linia celulară RAW 264.7 a fost obținută din ascita unei tumori induse de virusul leucemiei murine Abelson (A-MuLV) la un șoarece BALB/c mascul.
Celulele RAW 264.7 sunt utilizate ca model pentru macrofage datorită capacității lor de a îndeplini funcții-cheie precum fagocitoza și pinocitoza, care indică răspunsuri imune înnăscute.
Da, deși celulele RAW 264.7 nu sunt osteoclaste, ele pot fi utilizate pentru a studia procesul de osteoclastogeneză și expresia genelor osteoclastogene, ceea ce contribuie la înțelegerea sănătății oaselor și a bolilor precum osteoporoza.
Celulele RAW 264.7 răspund la stimulii microbieni imitând răspunsurile macrofagelor, ceea ce le face ideale pentru studierea interacțiunilor gazdă-patogen și a răspunsurilor celulare la diverse sisteme biologice.
Producția de citokine în celulele RAW 264.7 este esențială pentru înțelegerea procesului inflamator și a căilor de semnalizare celulară implicate în răspunsurile imune, cum ar fi căile NF-κB/MAPK.
Nu, celulele RAW 264.7 nu sunt celule primare; acestea sunt o linie celulară imortalizată. Celulele primare se referă la celulele prelevate direct din țesuturi vii și au o durată de viață limitată în cultură.
Celulele RAW 264.7 sunt cultivate în medii specifice care le susțin creșterea și sunt menținute la temperatură și în condiții atmosferice controlate pentru a le asigura stabilitatea funcțională pentru utilizarea experimentală.
Celulele RAW 264.7, în starea lor bazală (M0), pot fi polarizate pentru a prezenta proprietăți proinflamatorii de tip M1 sau antiinflamatorii de tip M2, în funcție de stimulii la care sunt expuse în cultură.
Da, celulele RAW 264.7 sunt frecvent utilizate pentru a evalua bioactivitatea produselor naturale, inclusiv a compușilor derivați din plante, pentru potențialele lor efecte imunomodulatoare sau terapeutice.
Markerii tipici includ F4/80 și CD11b, care sunt frecvent utilizați pentru a confirma fenotipul macrofagic al celulelor RAW 264.7, alături de markerii lor funcționali, cum ar fi fosfataza acidă rezistentă și activitatea fagocitară.
Referințe
- Taciak, B., et al., Evaluarea stabilității fenotipice și funcționale a liniei celulare RAW 264.7 prin pasaje seriale. PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
- Wang, S., et al., Macrofagele inflamatorii întrerup maturizarea și mineralizarea osteocitelor prin reglarea căii de semnalizare Notch. Molecular Medicine, 2022. 28(1): p. 102.
- Orekhov, A.N., et al., Diferențierea monocitelor și polarizarea macrofagelor. Vessel Plus, 2019. 3: p. 10.
- Khabipov, A., et al., Polarizarea macrofagelor RAW 264.7 de către celulele canceroase pancreatice – un model pentru studierea macrofagelor care favorizează dezvoltarea tumorilor. Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
- Kang, C.-H., et al., Bacteriile lactice ucise termic inhibă producția de oxid nitric prin intermediul sintazei inducibile de oxid nitric și a ciclooxigenazei-2 în celulele RAW 264.7. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
- Zhang, J. și colab., Polizaharidele din Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induc un răspuns imun în linia celulară RAW264.7 prin intermediul unei căi NF-κB/MAPK. RSC Advances, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
- Trinh, T.A., et al., Efectul unei formulări pe bază de plante asupra potențării răspunsului imun în macrofagele RAW 264.7. Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.