Celule P19 - Cercetarea carcinomului embrionar utilizând celulele P19
P19 este o linie celulară de carcinom embrionar murin. Aceasta este utilizată pe scară largă în cercetarea biomedicală, în principal pentru studiul biologiei dezvoltării, biologiei celulelor stem, diferențierii celulare și screening-ului medicamentelor. Deoarece celulele P19 au capacitatea de diferențiere, ele pot fi utile în investigarea proceselor biologice complexe, cum ar fi formarea țesuturilor și dezvoltarea embrionară timpurie. În acest articol, vom discuta elementele fundamentale ale celulelor P19 derivate din șoarece.
Caracteristicile generale și originea celulelor P19
Cunoașterea caracteristicilor generale și a originii unei linii celulare este esențială înainte de a începe să lucrați cu aceasta. Această secțiune va acoperi următoarele: Ce este linia celulară P19? Care este dimensiunea celulei P19? Care este originea celulelor P19?
- P19 este un tip de celule de carcinom embrionar pluripotent obținut inițial din teratocarcinom dezvoltat la un șoarece C3H/He. Linia celulară a fost stabilită pentru prima dată în 1982 de McBurney și Rogers.
- Celulele P19 pot crește continuu într-un mediu de cultură suplimentat cu ser. Ele pot fi diferențiate în alte tipuri de celule atunci când sunt expuse la medicamente non-toxice precum acidul retinoic și dimetil sulfoxidul (DMSO) [1].
- Aceste celule de carcinom de șoarece posedă o morfologie de tip epitelial.
- Linia celulară P19 are un cariotip masculin euploid (n=40; XY).
Informații privind cultivarea celulelor P19
Linia celulară P19 este cultivată pe scară largă în laboratoarele de cercetare datorită caracteristicilor sale unice. Cultivarea acesteia este ușoară și ușor de gestionat. Această secțiune a menționat toate informațiile cheie de care aveți nevoie pentru a menține și crește cultura de celule P19. Vom ști: Care este timpul de dublare al celulelor P19? Cum se cultivă linia celulară P19? Este P19 o linie celulară aderentă?
Puncte-cheie pentru cultivarea celulelor P19
|
Timpul de dublare: |
Timpul de dublare raportat pentru linia celulară P19 este de aproximativ 2 până la 3 zile. |
|
Aderentă sau în suspensie: |
Linia celulară de carcinom embrionar P19 este aderentă. |
|
Raport de subcultură: |
Celulele P19 trebuie subcultivate la fiecare 48 de ore și trebuie menținut un raport de divizare de 1:10 pentru aceste celule. Celulele aderente se spală cu soluție salină tampon fosfat 1 X și se incubează cu Accutase până când celulele se disociază. Celulele sunt adăugate cu mediu de cultură și recoltate prin centrifugare. Celulele colectate sunt resuspendate cu grijă și distribuite în flacoane noi. |
|
Mediu de creștere: |
Mediul DMEM/Ham's F12 conținând 5% ser fetal bovin, 3,1 g/L glucoză, 1,6 mM L-glutamină, 1,0 mM piruvat de sodiu, 15 mM HEPES și 1,2 g/L NaHCO3 este utilizat pentru cultivarea celulelor P19. |
|
Condiții de creștere: |
Pentru creșterea și cultivarea liniei celulare de carcinom embrionar P19 este esențial un incubator umidificat la 37°C, cu un aport de 5% CO2. |
|
Depozitare: |
Fiolele cu celule P19 congelate trebuie depozitate la temperaturi sub -150°C într-un congelator sau în faza de vapori a azotului lichid pentru a menține viabilitatea celulelor pe termen lung. |
|
Procesul de congelare și mediul: |
Mediul CM-1 sau CM-ACF poate fi utilizat pentru a congela celulele P19 folosind o metodă de congelare lentă care protejează celulele de orice șoc și le păstrează viabilitatea. |
|
Procesul de decongelare: |
Celulele P19 congelate pot fi dezghețate într-o baie de apă la 37°C prin agitarea rapidă a unui flacon timp de 40 până la 60 de secunde. Celulele se adaugă cu mediu proaspăt și se centrifughează pentru a elimina elementele de mediu congelate. Paleta de celule este din nou resuspendată, iar celulele sunt turnate în flaconul nou pentru creștere. |
|
Nivelul de biosecuritate: |
Pentru linia celulară P19 sunt necesare condiții de laborator de nivel de biosecuritate 1. |
Linia celulară P19: Avantaje și dezavantaje
Această secțiune va discuta avantajele și dezavantajele liniei celulare P19.
Avantaje
- Potențial de diferențiere: Celulele P19 se pot diferenția în diverse tipuri de celule, inclusiv cardiomiocite, neuroni și celule microgliale. Acestea necesită medicamente netoxice pentru diferențiere, cum ar fi acidul retinoic și dimetil sulfoxidul (DMSO). Acidul retinoic induce dezvoltarea neuronilor, microgliei și astrogliei, în timp ce DMSO inițiază dezvoltarea cardiomiocitelor bătătoare și a celulelor musculare netede. Astfel, celulele P19 sunt utile în studiul diferențierii celulare și al proceselor de dezvoltare
- Sistem model: Linia celulară de carcinom embrionar pluripotent P19 este un model valoros pentru studiul dezvoltării embrionare timpurii. Cercetătorii utilizează celulele P19 pentru a elucida căile de semnalizare celulară și mecanismele celulare și moleculare implicate în aceste procese
Dezavantaje
- Origine murină: P19 este o linie celulară de carcinom embrionar murin. În consecință, este posibil ca rezultatele studiilor care utilizează aceste celule să nu se transpună pe deplin în biologia și procesele umane
Aplicații de cercetare ale celulelor P19
Celulele P19 au mai multe aplicații de cercetare datorită capacității lor de diferențiere și relevanței pentru biologia dezvoltării și cercetarea celulelor stem. Unele dintre aplicațiile de cercetare importante ale celulelor de carcinom embrionar P19 includ:
- Studii de diferențiere celulară: După cum știm, celulele P19 se pot diferenția în neuroni, microglii, celule musculare netede și cardiomiocite; astfel, sunt utilizate pe scară largă pentru a studia procesele de diferențiere celulară. În plus, ajută cercetarea să investigheze dezvoltarea neuronală și cardiacă și mecanismele subiacente. Un studiu efectuat în 2018 a constatat că speciile reactive de oxigen (ROS) direcționează diferențierea celulelor P19 în tipuri specifice de celule și împiedică inducerea altora [3]. Un alt studiu a explorat procesul de diferențiere neuronală mediat de acidul retinoic și a constatat implicarea căii de semnalizare PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia dezvoltării: Celulele P19 sunt un model neprețuit pentru studiul dezvoltării embrionare timpurii. Ele ajută cercetătorii să înțeleagă procesele biologice complexe, cum ar fi formarea țesuturilor în timpul dezvoltării embrionare. Cercetarea a utilizat celule P19 și a studiat factorii moleculari care contribuie la formarea defectului septal ventricular (VSD). Rezultatele au arătat că un ARN lung necodificator SNHG6 contribuie la VSD prin reglarea negativă a miARN-101 și activarea căii Wnt/β-catenin [5].
- Testarea medicamentelor: Linia celulară de carcinom embrionar de șoarece P19 este, de asemenea, utilizată pentru testarea potențialilor candidați la medicamente. Un studiu a utilizat neuronii celulari P19 diferențiați și a investigat efectele neuroprotectoare de inhibare a acetilcolinesterazei de L-Dopa sintetică și extractul apos din semințe de Mucuna pruriens. Rezultatele au arătat că extractul de plantă a prezentat rezultate promițătoare comparativ cu L-Dopa [6].
Achiziționați astăzi linia celulară P19
Celule P19: Publicații de cercetare
Această secțiune de articole va acoperi câteva publicații de cercetare interesante cu celule P19.
Acest articol a fost publicat în Oncology Reports în 2017. Studiul a propus că hormonii sexuali hipofizari determină aderența, proliferarea și migrația liniilor de celule teratocarcinom, inclusiv celulele P19.
Această publicație din revista Experimental & Molecular Medicine (2018) a utilizat celule P19 și a studiat funcția ARN-ului lung necodificator uc.4. Rezultatele au arătat că uc.4 afectează diferențierea celulară prin modularea căii de semnalizare TGF beta.
Acest articol de cercetare a fost publicat în 2018 în Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Studiul a constatat că extractul natural de țesut cerebral și cultura celulară 3D pot accelera diferențierea celulelor de carcinom embrionar P19 în celule neurale.
Acest studiu a fost publicat în Journal of Ethnopharmacology în 2020. Studiul a propus că extractul de frunze de Cichorium intybus L. poate induce diferențierea celulelor de carcinom embrionar P19 în celule β pancreatice producătoare de insulină.
Această cercetare a fost publicată în Molecules (2022). Acest studiu a explorat efectele neuroprotectoare și inhibitoare ale acetilcolinesterazei ale extractului de semințe de Mucuna pruriens asupra neuronilor celulelor P19.
Resurse pentru linia celulară P19: Protocoale, videoclipuri și multe altele
Următoarele sunt câteva resurse privind celulele P19.
- Protocolul de diferențiere neuronală a celulelor P19: Acest articol conține protocolul de diferențiere neuronală a celulelor P19 și alte informații utile despre diferențierea celulelor P19.
- Transfecția celulelor P19: Acest link vă va ajuta să învățați protocolul de transfecție a celulelor P19.
Următorul link conține protocolul de cultură a celulelor P19.
- Celule P19: Acest site web conține toate informațiile utile despre linia celulară P19, inclusiv condițiile sale de cultură, mediul celular P19, divizarea celulelor și multe altele.
Explorarea liniei celulare P19: Întrebări frecvente
Referințe
- McBurney, M.W., celule de carcinom embrionar P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., și colab., Linia celulară de carcinom embrionar P19: A Model to Study Gene-Environment Interactions (Un model pentru studiul interacțiunilor gen-mediu). Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey și G. Rödel, ROS mitocondriale direcționează diferențierea celulelor pluripotente murine P19. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., și colab., Acidul all-trans-retinoid induce diferențierea celulelor P19 în neuroni implicați în calea de semnalizare PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., și colab., ARN-ul lung necodificator SNHG6 contribuie la formarea defectului septal ventricular prin reglarea negativă a miR-101 și activarea căii Wnt / β-catenin. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N. și colab., Extractul apos de semințe de Mucuna pruriens a îmbunătățit efectele neuroprotectoare și inhibitoare ale acetilcolinesterazei comparativ cu L-dopa sintetică. Molecule, 2022. 27(10): p. 3131.