Celule NIH-3T3: Avansarea studiilor privind fibroblastele și aplicațiile NIH-3T3
Linia celulară NIH-3T3, creată din țesutul unui embrion de șoarece albinos elvețian în vârstă de 17 zile în 1962 de către Howard Green și George Todaro la Facultatea de Medicină a Universității din New York, a devenit o resursă fundamentală în cercetarea biomedicală. Recunoscute pentru receptivitatea lor ridicată la formarea focarelor de virus leucemic și de virus sarcom, celulele NIH-3T3 servesc drept instrument esențial pentru o multitudine de cercetări științifice, inclusiv studii de oncologie virală, analiza expresiei genelor și explorarea dinamicii creșterii celulare. Nomenclatura "3T3" reflectă metoda de cultură celulară, indicând un interval de "transfer de 3 zile" cu o densitate inițială de însămânțare de 3 × 10^5 celule, subliniind condițiile standardizate în care aceste celule au fost cultivate și extinse pentru prima dată.
Morfologii și aplicații diverse ale celulelor NIH-3T3
Una dintre caracteristicile distinctive ale celulelor NIH-3T3 este adaptabilitatea lor morfologică, care variază semnificativ cu confluența culturii. La densități mai mici, aceste fibroblaste prezintă o structură celulară fusiformă, solitară, care evoluează în modele dense, vârtoase, pe măsură ce populația atinge confluența. Cu un diametru mediu de aproximativ 18 μm, celulele NIH-3T3 oferă un model versatil pentru studii aprofundate de biologie celulară, variind de la mecanismele de reparare a țesuturilor la căile complexe de reglare a ciclului celular.
Informații privind cultura
Detalii cheie de cultivare:
Timp de dublare apopulației: Aproximativ 20 de ore.
Tip de creștere: Culturi aderente.
Densitatea de însămânțare: Recomandată: 3 până la 4 x 10^4 celule/cm^2.
Mediu de creștere: DMEM sau Ham's F12, suplimentat cu 5% FBS și 2,5 mM L-glutamină.
Condiții de creștere: Mențineți la 37 °C într-un incubator umidificat cu 5% CO2.
Depozitare: A se păstra la temperaturi sub -195 °C în faza de vapori a azotului lichid.
Metoda de congelare: Se utilizează mediul CM-1 sau CM-ACF; se utilizează o metodă de congelare lentă (scăderea temperaturii cu 1 °C).
Protocol de decongelare: Încălzire rapidă într-o baie de apă la 37 °C, urmată de centrifugare pentru a elimina mediul de congelare, apoi resuspensie în mediu de creștere.
Nivelul de biosecuritate: Cultivarea necesită un nivel de biosecuritate 1.
Șoarece albinos elvețian în laborator.
Avantaje și dezavantaje ale utilizării celulelor NIH 3T3
Avantaje
Eficiența transfecției: Cunoscute pentru ratele lor ridicate de transfecție, celulele NIH-3T3 sunt excelente atât pentru studiile de expresie genică tranzitorie, cât și pentru cele stabile, acomodându-se cu o varietate de tehnici de transfecție.
Utilitatea stratului de hrănire: Aceste celule servesc adesea ca strat hrănitor de susținere pentru co-cultivarea cu celule precum keratinocitele și celulele stem, datorită eliberării de factori de creștere care promovează creșterea celulelor co-cultivate.
Cercetareacelulelor stem : Celulele NIH-3T3 sunt o alegere preferată în cercetarea celulelor stem pentru inducerea pluripotenței fără modificare genetică și pentru furnizarea unui mediu favorabil pentru diferențierea celulelor stem.
Stabilitatea culturii: Celulele NIH-3T3 sunt cunoscute pentru stabilitatea lor și frecvența scăzută a transformărilor spontane. Cu toate acestea, în anumite condiții sau după expunerea la oncogene sau mutageni specifici, celulele NIH-3T3 pot suferi transformări spontane. Această transformare poate duce la dobândirea de proprietăți canceroase, cum ar fi creșterea necontrolată, pierderea inhibiției de contact și capacitatea de a forma tumori atunci când sunt injectate în gazde sensibile.
Dezavantaje
Dimensiunea inconsecventă a celulelor: Morfologia alungită și fusiformă a celulelor NIH-3T3 poate varia, complicând analiza imaginilor în cadrul testelor.
Susceptibilitate la infecție: Aceste celule sunt predispuse la infecții bacteriene și micoplasme dacă nu sunt menținute în condiții aseptice stricte, ceea ce poate afecta integritatea experimentală.
Aplicații de cercetare ale celulelor NIH-3T3
Studii de transfecție ADN: Robustețea celulelor NIH-3T3 le face ideale pentru introducerea și studierea funcției diferitelor gene, fapt demonstrat în cercetările care examinează proteine precum NAB2-STAT6 și rolul acestora în procesele celulare.
Teste bazate pe celule: Fiabilitatea lor se extinde la diverse teste, inclusiv testele de viabilitate, apoptoză și formare a focarelor, oferind o perspectivă asupra răspunsurilor celulare în diferite condiții experimentale.
Cercetarea ciclului celular: Manipularea simplă a ciclului celular prin intermediul nivelurilor serice face din această linie celulară un model puternic pentru studierea reglării ciclului celular și a aberațiilor acestuia în contexte patologice.
Îmbunătățiți-vă cercetarea cu celule NIH-3T3
Evidențierea principalelor studii care implică linia celulară de fibroblaste NIH 3T3
Linia celulară NIH-3T3 a fost esențială în numeroase proiecte de cercetare, acoperind diverse fațete ale biologiei celulare. Mai jos sunt prezentate câteva studii semnificative care utilizează aceste celule:
- Explorarea proteinei de fuziune NAB2-STAT6: Publicat în Biochemical and Biophysical Research Communications, acest studiu analizează modul în care proteina de fuziune NAB2-STAT6 influențează celulele NIH-3T3, în special rolul său în sporirea creșterii și migrației celulare prin reglarea EGR-1
- Investigarea APOBEC3 și a virusului leucemiei murine: Această cercetare din revista Virology examinează hipermutația virusului leucemiei murine AKV în celulele NIH-3T3 care exprimă gena APOBEC3 de șoarece
- Evaluarea potențialului antimetastatic al medicamentelor epigenetice: În Oncotargets and Therapy, acest studiu evaluează efectele antimetastatice ale hidralazinei și acidului valproic asupra celulelor NIH-3T3 transformate RAS
- Impactul baicaleinei asupra proliferării NIH-3T3 și sintezei colagenului: Această cercetare utilizează celule NIH-3T3 pentru a explora modul în care Baicalein influențează proliferarea celulară și producția de colagen prin modularea axei miR-9/factorul de creștere similar insulinei-1
- Studiul epuizării riboflavinei și a tumorogenezei: Acest studiu prezintă constatări privind modul în care deficitul de riboflavină în celulele NIH-3T3 contribuie la tumorogeneză prin promovarea proliferării celulare și dereglarea genelor ciclului celular
Resurse esențiale pentru cercetarea celulelor NIH-3T3
Pentru cercetătorii interesați să lucreze cu celule NIH-3T3, sunt disponibile o varietate de resurse pentru a ghida protocoalele de cultivare și experimentale:
- Formarea de sferoizi în celulele NIH-3T3: Acest videoclip oferă o prezentare detaliată a formării de sferoizi, o tehnică de cultură celulară 3D care agregă celulele NIH-3T3 în grupuri, oferind un model mai relevant fiziologic pentru studii
- Monitorizarea creșterii celulelor NIH-3T3: Prin intermediul sistemului de imagistică a celulelor vii JuLI Br, acest videoclip surprinde dinamica creșterii celulelor NIH-3T3 pe parcursul a 65 de ore, prezentând proliferarea celulară în timp real
Aceste resurse urmăresc să vă sprijine eforturile de cercetare cu celule NIH-3T3, oferind o bază pentru experimente și descoperiri de succes.
Întrebări frecvente despre celulele NIH-3T3
Referințe
- Rahimi, A.M., M. Cai și S. Hoyer-Fender, Heterogenity of the NIH3T3 Fibroblast Cell Line. Celule, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., și colab., Prima caracterizare citogenetică moleculară de înaltă rezoluție a liniei celulare NIH 3T3 prin bandaj multicolor murin. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., și colab., Analiza comparativă a diferitelor straturi de hrănire cu fibroblaste 3T3 pentru cultivarea celulelor stem limbale de iepure. Jurnalul internațional de oftalmologie, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Diferențierea celulelor neuronale din fibroblaste NIH/3T3 în condiții definite. Dezvoltare, creștere și diferențiere, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., și colab., Proteina de fuziune NAB2-STAT6 mediază proliferarea celulară și progresia oncogenă prin reglarea EGR-1. Comunicare de cercetare biochimică și biofizică, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Expresia Sloppymerase™ în celulele NIH/3T3: Explorarea versatilității unei polimeraze de fuziune predispuse la erori. 2021.
- Sahinturk, V., și colab., Acrilamida își exercită citotoxicitatea în celulele fibroblaste NIH/3T3 prin apoptoză. Toxicologie și sănătate industrială, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. și F. Caicci, Descoperirea primului virus retro-gigant uman: Descrierea morfologiei sale, a kinazei retrovirale și a capacității de a induce tumori la șoareci. bioRxiv, 2019: p. 851063.
- Endo, M. și colab.,SemnalareaE2F1-Ror2mediază reglementarea transcripțională coordonată pentru a promova tranziția fazei G1/S înfibroblastele NIH/3T3stimulate debFGF. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L. și colab., Depleția de riboflavină promovează tumorogeneza în celulele HEK293T și NIH3T3 prin susținerea proliferării celulare și reglarea transcripției genice legate de ciclul celular. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.