Linia celulară Jurkat E6.1

Jurkat E6.1 este o clonă a liniei celulare Jurkat, o linie celulară imortalizată de limfocite T umane derivate din sângele periferic. Stabilite pentru prima dată în 1977, acestea sunt utilizate în cercetarea legată de semnalizarea receptorilor celulelor T, terapiile adoptive ale celulelor T și ale altor limfocite împotriva cancerului, cercetarea proto-oncogenelor legate de sânge, supraviețuirea și diferențierea celulară.

În acest articol, vom include toate informațiile și premisele pe care trebuie să le înțelegeți înainte de a vă începe activitatea pe liniile celulare clonate Jurkat E6.1, care includ:

1. Origine, istoric și informații generale
2. Caracteristicile culturii celulare
3. Aplicații ale liniilor celulare Jurkat E6.1
4. Publicații de cercetare
5. Avantaje și limitări
6. Resurse: Protocoale, videoclipuri și multe altele

1. Origine, istoric și informații generale

Aici sunt prezentate toate informațiile necesare legate de istoricul, originea și caracteristicile generale ale liniei celulare Jurkat E6.1 și manipularea lor în cultura celulară.

• Jurkat E6.1 este o linie celulară imortalizată de limfocite T umane. Această linie celulară clonată este un derivat al liniei celulare Jurkat obținute din sângele periferic al unui băiat de 14 ani care suferea de leucemie limfoblastică acută în 1976. După izolarea din sânge, această linie celulară a fost denumită inițial JM, deoarece JM și Jurkat indică faptul că aceste linii celulare sunt izolate de la același pacient. Linia celulară Jurkat E6.1 a fost clonată din derivați celulari cunoscuți ca Jurkat-FHCRC.
• Liniile celulare E6.1 sunt derivate din leucemie; aceste linii celulare sunt utilizate pentru a crește expresia IL-2 prin simulare cu anticorpi monoclonali sau lectină. Ele exprimă receptorii antigenici ai celulelor T; prin urmare, aceste linii celulare pot fi utilizate în studiul tulburărilor sistemului imunitar și în cercetarea imuno-oncologică.
• Morfologia celulară a celulelor Jurkat E6.1: Celulele Jurkat E6.1 au fost izolate de la un pacient cu leucemie și au o morfologie modificată în comparație cu limfocitele T, ceea ce le face linii celulare nemuritoare. Celula limfoblastică se formează atunci când limfocitele naive sunt activate prin prezentarea antigenului de către celulele prezentatoare de antigen. Aceasta duce la creșterea crescută a nucleului, citoplasmei, ARNm și proteinelor.
• Dimensiunea celulei: Liniile celulare Jurkat E6.1 sunt clonate imortalizate cu diametrul mai frecvent cuprins între 10-16 μm (diametrul poate varia în funcție de tipul de suspensie). Aceste linii celulare au o formă celulară foarte sferică.
• Numărul genomului și al cromozomilor: Aceste linii celulare sunt linii celulare pseudodiploide de limfocite T umane, cu cromozomul lor model, cromozomul 46. Acestea arată, de asemenea, că cromozomul model este prezent în aproximativ 74% și prezintă o rată de poliploidie de aproximativ 5,3%. Studiile cariotipului au arătat un cariotip cu 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Cromozomii X și Y au de obicei o copie regulată în majoritatea liniilor celulare.
• Liniile celulare Jurkat vs liniile celulare Jurkat E6.1: Liniile celulare Jurkat sunt liniile celulare parentale primare izolate inițial de la pacientul cu leucemie limfoblastică acută. Cu toate acestea, liniile celulare Jurkat E6.1 sunt derivate clonate din liniile celulare Jurkat-FHCRC.

3. aplicații ale liniilor celulare Jurkat E6.1

Linia celulară Jurkat E6.1 este utilizată cel mai frecvent în cercetarea și studierea tulburărilor legate de sistemul imunitar și a cancerelor asociate acestuia. În plus, a fost adecvată pentru studierea unor complexități legate de infecția cu HIV, deoarece receptorul celulelor T CD4 este necesar pentru intrarea retrovirală.

Unele domenii-cheie în care sunt utilizate aceste linii celulare sunt discutate mai jos:

Sistem model pentru căile de semnalizare și apoptotice ale celulelor T: Această linie celulară derivată din leucemia cu celule T este utilizată pe scară largă în cercetarea care implică cascada de semnalizare TCR. Jurkat E6.1 eliberează mai multă IL-2 și IL-8 care contribuie ulterior la activarea celulelor T și declanșează căile inflamatorii. Această linie celulară este, de asemenea, cunoscută pentru hiperfosforilarea Pyk2 și producția crescută de Vav1, care influențează în mod crucial rearanjarea citoscheletului de actină în celulele T. Segregarea TCR în linia celulară Jurkat E6-1 poate fi, de asemenea, îmbunătățită prin exprimarea forțată a LFA-1 care, în consecință, sporește semnalizarea TCR și exprimarea IL-2. Studiile privind proliferarea celulară și ciclul celular sunt, de asemenea, efectuate în liniile celulare Jurkat E6.1. Acestea au fost preferate pentru a studia căile apoptotice și inducerea daunelor ADN de către compușii derivați din surse marine și vegetale. Un studiu efectuat în 2013 a evaluat impactul mediilor condiționate de epigonal de rechin asupra celulelor umaneprin utilizarea acestor linii celulare. În mod similar, impactul represiv al hirsutinei derivate din plante asupra proliferării celulare a fost studiat în liniile celulare Jurkat E6.1. Adesea, studiile anticancer utilizează, de asemenea, Jurkat E6.1 pentru a-și evalua țintele selectate. Influența neurotoxinelor marine precum Brevetoxinele (PbTx) a fost, de asemenea, studiată în aceste linii celulare.

Studii privind HIV: Una dintre cele mai importante aplicații ale liniilor celulare Jurkat E6.1 este capacitatea lor de a servi drept model adecvat pentru studiile HIV datorită proprietății lor de a alege diferite evenimente de semnalizare care induc TCA. Liniile celulare Jurkat E6.1 au fost utilizate nu numai în înțelegerea activării HIV, ci și în disecarea mecanismelor care stau la baza latenței HIV. Replicarea și infecția HIV au fost studiate pe scară largă în aceste linii celulare, unde pot fi supuse editării genetice și knockout-ului genetic, așa cum s-a făcut într-un studiu efectuat în 2021. Impactul administrării medicamentelor asupra infecției cu HIV, cum ar fi nanoparticulele hibride polimer-lipidice (PLN) co-încărcate cu efavirenz (Efa)-enfuvirtide (Enf) cu durată lungă de acțiune asupra intrării virale a utilizat linii celulare Jurkat E6.1. Jurkat E6.1 modificată prin CRISPR/Cas9 a fost utilizată de mai multe ori pentru studierea mecanismelor implicate în intrarea, replicarea și infecția HIV.

4. publicații de cercetare

Iată câteva exemple notabile din vasta colecție de cercetări, inclusiv liniile celulare Jurkat E6.1.

Metabolitul seleniului metilselenol reglează expresia liganzilor care declanșează activarea imunitară prin receptorul limfocitelor NKG2D

Folosind Jurkat E6.1, incubate în diferiți compuși de seleniu pentru a studia expresia ligandului și expresia de suprafață a MICA/B.

Acidul Caracasine, un ent-3,4-seco-kauren, promovează apoptoza și diferențierea celulară prin inhibarea căii de semnal NFkB în celulele leucemice.

Înțelegerea citotoxicității induse de acidul caracasină în liniile de celule T umane, cum ar fi Jurkat E6.1 și HL-60.

Dovezi ale dezvoltării in vitro a rezistenței medicamentoase la azidotimidină în liniile celulare de leucemie limfocitară T (Jurkat E6-1/AZT-100) și la pacienții pediatrici cu infecție HIV-1

S-a utilizat Jurkat E6.1 incubat pe termen lung cu medicamentul AZT pentru a studia rezistența la azidotimidină (AZT) la pacienții infectați cu HIV-1.

Studii pe linia celulară Jurkat E6.1 privind efectele unor bioindoli asupra fluidității membranei

Această cercetare a utilizat un sistem de analiză a fluorescenței polarizate pentru a înțelege impactul bio-indolilor, inclusiv serotonina, triptofanul și melatonina, asupra fluidității membranei celulare în liniile celulare Jurkat E6.1.

Mecanismul molecular al inducerii apoptozei în celulele Jurkat E6-1 prin extractul de alcaloizi Tribulus terrestris

Extractul de alcaloiziderivat din Tribulus terristris a indus apoptoza în celulele Jurkat E6.1 pentru a înțelege mecanismul de acțiune de bază.

Creșterea expresiei LFA-1 îmbunătățește arhitectura sinapsei imune și semnalizarea receptorilor celulelor T în celulele Jurkat E6.1

Semnalarea receptorilor celulelor T în celulele Jurkat E6.1 a fost îmbunătățită prin creșterea forțată a expresiei LFA-1.

5. avantaje și limitări

Ca și alte linii celulare, Jurkat E6.1 are avantajele și limitările sale.

Avantaje

Există multe motive pentru care este preferată în aceste aplicații:

• Mod de creștere

  Jurkat E6.1 este o linie celulară în suspensie și neaderentă, ceea ce înseamnă că crește în suspensie și nu aderă la suprafața de cultură.

• Expresia genelor

  Linia celulară Jurkat E6.1 exprimă gene care codifică interleukina-2 (IL-2) și CD3. La stimularea cu anticorpi monoclonali, lectine sau esteri de forbol împotriva complexului antigenic T3, s-a demonstrat că aceste celule produc IL-2 amplificată.

• Exprimarea antigenelor

  Linia celulară Jurkat E6.1 exprimă antigenul CD3, asociat cu activarea și semnalizarea celulelor T.

• Markeri de expresie

  Linia celulară exprimă markerii receptorilor de antigen ai celulelor T (TCR), care sunt esențiali în recunoașterea celulelor T și în răspunsul imun.

• Aplicabilitate pentru transfecție

  Linia celulară Jurkat clonă E6.1 este adecvată pentru experimente de transfecție a gazdei, permițând introducerea de material genetic exogen în celule în diverse scopuri de cercetare.

Limitări

După avantaje, să trecem în revistă limitările asociate cu utilizarea liniilor celulare Jurkat E6.1:

• Transfecția celulară cu vector viral

  Transfectarea celulelor Jurkat E6.1 este o provocare din cauza originii lor de celule T. De obicei, pentru modificarea genetică sunt necesari vectori virali costisitori și care necesită mult timp. Vectorii non-virali au demonstrat o eficiență scăzută a transfecției și o toxicitate semnificativă în celulele Jurkat.

• Contaminare bacteriană

  Culturile de celule Jurkat E6.1 trebuie monitorizate în vederea detectării unei potențiale contaminări bacteriene pentru a asigura integritatea rezultatelor experimentale.

• Contaminări virale

  Liniile celulare Jurkat E6.1 exprimă diverși receptori de chemokine și niveluri scăzute de CD4, facilitând intrarea virală. Acest lucru le face susceptibile la virusurile care infectează celulele T, cum ar fi HTLV și HIV.

6.resurse: Protocoale, videoclipuri și altele

Această secțiune va acoperi metodele și protocoalele pentru cultivarea și transfecția celulelor, precum și videoclipuri educaționale legate de această linie celulară:

Protocoale de cultură celulară

Iată câteva proceduri de cultură de bază de urmat pentru această linie celulară:

• SOP de cultură celulară, Propagarea Jurkat: Universitatea din California a furnizat, de asemenea, o metodă de cultivare a clonei Jurkat E6-1 pe browserul său USCS Genome.
• Jurkat, clona E6-1 Cultură și manipulare: Elabscience a inclus un protocol de manipulare a culturii pe site-ul său de descriere a produsului.

Protocoale de transfecție

Iată lista diferitelor protocoale de transfecție disponibile:

• Protocolul de transfecție a celulelor Jurkat Reagent Lipofectamine LTX: Un protocol de transfecție a celulelor Jurkat utilizând reactivul Lipofectamine LTX, de la ThermoFisher.
• Protocolul Amaxa™ 4D-Nucleofector™ pentru clona Jurkat E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG a furnizat protocolul de transfecție pentru clona Jurkat E6.1 de la ATCC utilizând unitatea 4D-Nucleofector® X.

Videoclipuri privind Jurkat E6.1

Există mai multe videoclipuri excelente care acoperă concepte de cultură celulară, proceduri, proliferare, placare și alte subiecte.

• Pasarea celulelor:Bazele culturii celulare: Acesta este un videoclip excelent pentru ghidul de bază privind pasarea liniilor de celule umane de la ThermoFisher.
• Decongelarea celulelor: Bazele culturii celulare: Acest videoclip oferă instrucțiuni de bază privind cultivarea și decongelarea celulelor de către ThermoFisher.
• Protocolul de transfecție a ADN-ului plasmidic: Acest videoclip se concentrează pe protocolul de transfecție a ADN-ului plasmidic cu Lipofectamine® LTX și Plus™ Reagent, de la ThermoFisher.
• Măsurarea apoptozei utilizând celule Jurkat în suspensie tratate cu staurosporină 3 micromolară: Acest videoclip demonstrează modul de efectuare a unui test de apoptoză pe citometrul de imagine Celigo utilizând reactivi Hoechst și caspază 3/7 de la Nexcelom Bioscience.