Publicat: 2023 | Ultima revizuire: mai 2026
Linia celulară Jurkat E6.1
Jurkat E6.1 este o clonă a liniei celulare Jurkat, o linie celulară de limfocite T umane imortalizate, derivată din sângele periferic. Înființată pentru prima dată în 1977, aceasta este utilizată în cercetări legate de semnalizarea receptorilor celulelor T, terapiile adoptive cu celule T și alte limfocite împotriva cancerului, cercetarea proto-oncogenelor legate de sânge, supraviețuirea celulară și diferențierea celulară.
În acest articol, vom include toate informațiile și cerințele preliminare pe care trebuie să le cunoașteți înainte de a începe lucrul cu liniile celulare clonate Jurkat E6.1, printre care se numără:
- Origine, istoric și informații generale
- Caracteristicile culturii celulare
- Aplicații ale liniilor celulare Jurkat E6.1
- Publicații de cercetare
- Avantaje și limitări
- Resurse: protocoale, videoclipuri și altele
1. Origine, istoric și informații generale
Aici găsiți toate informațiile necesare referitoare la istoria, originea și caracteristicile generale ale liniei celulare Jurkat E6.1, precum și la manipularea acesteia în cultura celulară.
- Jurkat E6.1 este o linie celulară imortalizată de limfocite T umane. Această linie celulară clonată este un derivat al liniei celulare Jurkat obținută din sângele periferic al unui băiat de 14 ani care suferea de leucemie limfoblastică acută în 1976. După izolarea din sânge, această linie celulară a fost denumită inițial JM, deoarece denumirile JM și Jurkat indică faptul că aceste linii celulare sunt izolate de la același pacient. Linia celulară Jurkat E6.1 a fost clonată din derivate celulare cunoscute sub denumirea de Jurkat-FHCRC.
- Liniile celulare E6.1 sunt derivate din leucemie; aceste linii celulare sunt utilizate pentru a crește expresia IL-2 prin stimulare cu anticorpi monoclonali sau lectină. Ele exprimă receptori de antigen ai celulelor T; prin urmare, aceste linii celulare pot fi utilizate în studiul tulburărilor sistemului imunitar și în cercetarea imuno-oncologică.
- Morfologia celulară a celulelor Jurkat E6.1: Celulele Jurkat E6.1 au fost izolate de la un pacient cu leucemie și prezintă o morfologie modificată în comparație cu limfocitele T, ceea ce le face linii celulare imortale. Celula limfoblastică se formează atunci când limfocitele naive sunt activate prin prezentarea antigenului de către celulele prezentatoare de antigen. Acest lucru duce la o creștere sporită a nucleului, a citoplasmei, a ARNm-ului și a proteinelor.
- Dimensiunea celulelor: Liniile celulare Jurkat E6.1 sunt clonate și imortalizate, având de obicei un diametru cuprins între 10 și 16 μm (diametrul poate varia în funcție de tipul suspensiei). Aceste linii celulare au o formă celulară extrem de sferică.
- Genomul și numărul de cromozomi: Aceste linii celulare sunt linii celulare pseudodiploide de limfocite T umane, cromozomul lor model fiind cromozomul 46. De asemenea, se observă că cromozomul modal este prezent în aproximativ 74% din cazuri și prezintă o rată de poliploidie de aproximativ 5,3%. Studiile cariotipice au evidențiat un cariotip cu 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Cromozomii X și Y prezintă, de obicei, o copie normală în majoritatea liniilor celulare.
- Liniile celulare Jurkat vs. E6.1 Liniile celulare Jurkat: Liniile celulare Jurkat sunt liniile celulare părinte primare, izolate inițial de la un pacient cu leucemie limfoblastică acută. Cu toate acestea, liniile celulare Jurkat E6.1 sunt derivate clonate ale liniilor celulare Jurkat-FHCRC.
Caracteristicile culturii celulare
Puncte cheie pentru cultivarea celulelor B16
Timpul de dublare a populației
Timpul de dublare a populației liniilor celulare Jurkat este de aproximativ 20,7 ore, ceea ce permite o dezvoltare relativ rapidă a celulelor.
Aderente sau neaderente
Liniile celulare Jurkat E6.1 cresc în mod neaderent, existând în suspensie fie sub formă de strat unic, fie sub formă de aglomerări care plutesc liber.
Densitatea de însămânțare
Densitatea de însămânțare recomandată pentru liniile celulare Jurkat E6.1 este de 1,0-2,0 x 10⁵ celule viabile/mL, pentru a asigura o aderență sănătoasă și o creștere celulară optimă.
Mediu de creștere
Mediul de creștere necesar pentru liniile celulare Jurkat E6.1 este mediul RPMI-1640 formulat de ATCC (ATCC 30-2001). Mediul complet se prepară prin adăugarea componentelor specificate, inclusiv ser fetal bovin (ATCC 30-2002), pentru a atinge o concentrație finală de 10%.
Condiții de creștere
Liniile celulare E6.1 Jurkat pot fi cultivate într-un incubator adecvat, cu 5% aer și CO₂, utilizând mediul RPMI-1640 și serul fetal bovin.
Condiții de depozitare
Depozitarea pe termen lung a liniilor celulare Jurkat în stare de cultură congelată trebuie efectuată la -130 de grade Celsius sau în azot lichid în fază de vapori. Depozitarea acestora la -70 de grade Celsius poate duce la pierderea viabilității celulare.
Congelare
O alicotă de aproximativ 0,5-1,0 ml de suspensie de linie celulară este depozitată în tuburi criogenice pentru a menține liniile celulare. Aceste tuburi sunt apoi plasate într-un container de crioconservare la -70 grade Celsius. Tuburile sunt transferate într-un rezervor de azot lichid și depozitate în faza de vapori a doua zi.
Decongelarea
Pentru a decongela liniile celulare Jurkat, flacoanele cu suspensie celulară trebuie plasate într-o baie de apă la 37 de grade Celsius. Suspensia poate fi decongelată timp de 2 minute, agitată ușor. Este esențial ca capacul flaconului să fie ținut în afara băii de apă pentru a preveni contaminarea liniilor celulare.
Nivelul de biosecuritate
Cultivarea liniilor celulare Jurkat necesită un nivel de biosecuritate BSL-1 în mediul de laborator, asigurându-se respectarea măsurilor de siguranță de bază.
Publicat: 2023 | Ultima revizuire: mai 2026
Aplicații ale liniilor celulare Jurkat E6.1
Linia celulară Jurkat E6.1 este utilizată în principal în cercetarea și studiul afecțiunilor legate de sistemul imunitar și al cancerelor asociate acestuia. Mai mult, aceasta s-a dovedit potrivită pentru studiul unor aspecte complexe legate de infecția cu HIV, deoarece receptorul celulelor T CD4 este necesar pentru pătrunderea retrovirusului.
Mai jos sunt prezentate câteva domenii cheie în care sunt utilizate aceste linii celulare:
Sistem model pentru semnalizarea celulelor T și căile apoptotice: această linie celulară derivată din leucemia cu celule T este utilizată pe scară largă în cercetările care implică cascada de semnalizare a receptorului TCR. Jurkat E6.1 eliberează mai multă IL-2 și IL-8, care contribuie ulterior la activarea celulelor T și declanșează căile inflamatorii. Această linie celulară este cunoscută, de asemenea, pentru Pyk2 hiperfosforilat și producția crescută de Vav1, care influențează în mod crucial rearanjarea citoscheletului de actină în celulele T. Segregarea TCR în linia celulară Jurkat E6-1 poate fi, de asemenea, îmbunătățită prin expresia forțată a LFA-1, care, în consecință, intensifică semnalizarea TCR și expresia IL-2. Studiile privind proliferarea celulară și ciclul celular sunt, de asemenea, efectuate pe liniile celulare Jurkat E6.1. Acestea au fost preferate în studierea căilor apoptotice și a inducerii leziunilor ADN-ului de către compuși derivați din surse marine și vegetale. Un studiu din 2013 a evaluat impactul mediilor condiționate epigonale de rechin asupra celulelor umane, utilizând aceste linii celulare. În mod similar, impactul represiv al hirsutinei de origine vegetală asupra proliferării celulare a fost studiat în liniile celulare Jurkat E6.1. Adesea, studiile anticanceroase utilizează, de asemenea, Jurkat E6.1 pentru a evalua țintele selectate. Influența neurotoxinelor marine, precum brevetoxinele (PbTx), a fost, de asemenea, studiată pe aceste linii celulare.
Studii privind HIV: Una dintre cele mai semnificative aplicații ale liniilor celulare Jurkat E6.1 este capacitatea lor de a servi drept model adecvat pentru studiile privind HIV, datorită proprietății lor de a selecta diferite evenimente de semnalizare care induc TCA. Liniile celulare Jurkat E6.1 au fost utilizate nu numai pentru înțelegerea activării HIV, ci și pentru analiza mecanismelor care stau la baza latenței HIV. Replicarea și infecția cu HIV au fost studiate pe larg în aceste linii celulare, unde pot fi supuse editării genice și eliminării genice, așa cum s-a realizat într-un studiu din 2021. Impactul administrării medicamentelor asupra infecției cu HIV, cum ar fi nanoparticulele hibride polimer-lipid (PLN) cu încărcătură combinată de efavirenz (Efa) cu acțiune prelungită și enfuvirtidă (Enf) asupra pătrunderii virale, a fost analizat utilizând liniile celulare Jurkat E6.1. Celulele Jurkat E6.1 modificate cu CRISPR/Cas9 au fost utilizate de mai multe ori pentru studierea mecanismelor implicate în pătrunderea, replicarea și infecția cu HIV.
Publicații de cercetare
Iată câteva exemple notabile din vasta colecție de cercetări, inclusiv cele care implică liniile celulare Jurkat E6.1.
Folosind Jurkat E6.1, incubate în diferiți compuși de seleniu pentru a studia expresia ligandului și expresia de suprafață a MICA/B.
Înțelegerea citotoxicității induse de acidul caracasinic în liniile celulare T umane, precum Jurkat E6.1 și HL-60.
S-a utilizat linia celulară Jurkat E6.1 incubată pe termen lung cu medicamentul AZT pentru a studia rezistența la azidotimidină (AZT) la pacienții infectați cu HIV-1.
Această cercetare a utilizat un sistem de analiză prin fluorescență polarizată pentru a înțelege impactul bioindolilor, inclusiv serotonina, triptofanul și melatonina, asupra fluidității membranei celulare în liniile celulare Jurkat E6.1.
Extractul de alcaloizi derivați din Tribulus terrestris a indus apoptoza în celulele Jurkat E6.1 pentru a înțelege mecanismul de acțiune subiacent.
Semnalizarea receptorilor celulelor T în celulele Jurkat E6.1 a fost îmbunătățită prin creșterea forțată a expresiei LFA-1.
Avantaje și limitări
La fel ca alte linii celulare, Jurkat E6.1 prezintă avantaje și limitări.
Avantaje
Există numeroase motive pentru care este preferată în aceste aplicații:
-
Modul de creștere
Jurkat E6.1 este o linie celulară în suspensie și neaderentă, ceea ce înseamnă că crește în suspensie și nu aderă la suprafața de cultură.
-
Expresia genelor
Linia celulară Jurkat E6.1 exprimă gene care codifică interleukina-2 (IL-2) și CD3. La stimularea cu anticorpi monoclonali, lectine sau esteri de forbol împotriva complexului antigenic T3, s-a demonstrat că aceste celule produc IL-2 în cantități amplificate.
-
Expresia antigenelor
Linia celulară Jurkat E6.1 exprimă antigenul CD3, asociat cu activarea și semnalizarea celulelor T.
-
Markeri de expresie
Linia celulară exprimă markerii receptorului antigenic al celulelor T (TCR), care sunt esențiali în recunoașterea celulelor T și în răspunsul imun.
-
Aplicabilitate pentru transfecție
Linia celulară Jurkat clona E6.1 este adecvată pentru experimente de transfecție a gazdei, permițând introducerea de material genetic exogen în celule în diverse scopuri de cercetare.
Limitări
După ce am prezentat avantajele, să trecem în revistă limitările asociate utilizării liniilor celulare Jurkat E6.1:
-
Transfecția celulară cu vectori virali
Transfecția celulelor Jurkat E6.1 este dificilă datorită originii lor din celule T. De obicei, pentru modificarea genetică sunt necesari vectori virali costisitori și care necesită mult timp. Vectorii non-virali au demonstrat o eficiență scăzută a transfecției și o toxicitate semnificativă în celulele Jurkat.
-
Contaminarea bacteriană
Culturile celulare Jurkat E6.1 trebuie monitorizate pentru a depista o eventuală contaminare bacteriană, în vederea asigurării integrității rezultatelor experimentale.
-
Contaminări virale
Liniile celulare Jurkat E6.1 exprimă diverși receptori de chemokine și niveluri scăzute de CD4, facilitând pătrunderea virusului. Acest lucru le face susceptibile la virusuri care infectează celulele T, precum HTLV și HIV.
6. Resurse: protocoale, videoclipuri și altele
Această secțiune va prezenta metodele și protocoalele pentru cultivarea și transfecția celulară, precum și videoclipuri educaționale legate de această linie celulară:
Protocoale de cultivare celulară
Iată câteva proceduri de bază de cultură care trebuie urmate pentru această linie celulară:
- Procedura standard de operare (SOP) pentru cultura celulară, propagarea Jurkat: Universitatea din California a furnizat, de asemenea, o metodă pe browserul USCS Genome pentru cultivarea clonului Jurkat E6-1.
- Jurkat, clona E6-1 – Cultivare și manipulare: Elabscience a inclus un protocol de manipulare a culturii pe site-ul său de descriere a produsului.
Protocoale de transfecție
Iată lista diferitelor protocoale de transfecție disponibile:
- Protocol de transfecție a celulelor Jurkat cu reactivul Lipofectamine LTX: Un protocol de transfecție a celulelor Jurkat care utilizează reactivul Lipofectamine LTX, de la ThermoFisher.
- Protocolul Amaxa™ 4D-Nucleofector™ pentru clona Jurkat E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG a furnizat protocolul de transfecție pentru clona Jurkat E6.1 de la ATCC, utilizând unitatea 4D-Nucleofector® X.
Videoclipuri despre Jurkat E6.1
Există mai multe videoclipuri excelente care acoperă concepte de cultură celulară, proceduri, proliferare, însămânțare și alte subiecte.
- Pasarea celulelor: Noțiuni de bază privind cultura celulară: Acesta este un videoclip excelent care oferă un ghid de bază privind pasarea liniilor celulare umane, realizat de ThermoFisher.
- Decongelarea celulelor: Noțiuni de bază privind cultura celulară: Acest videoclip oferă instrucțiuni de bază privind cultura celulară și decongelarea, realizat de ThermoFisher.
- Protocol de transfecție cu ADN plasmidic: Acest videoclip se concentrează pe protocolul de transfecție cu ADN plasmidic folosind Lipofectamine® LTX și reactivul Plus™, realizat de ThermoFisher.
- Măsurarea apoptozei folosind celule Jurkat în suspensie tratate cu 3 micromolari de staurosporină: Acest videoclip demonstrează cum se efectuează un test de apoptoză pe citometrul de imagine Celigo folosind reactivi Hoechst și caspază 3/7, realizat de Nexcelom Bioscience.
