Linia celulară HT22
HT22 este o linie celulară neuronală murină utilizată în mod obișnuit în cercetarea neuroștiințifică. Aceasta este valoroasă pentru studierea tulburărilor neurogenerative și testarea potențialelor terapii sau tratamente neuroprotectoare. În plus, celulele HT22 sunt sensibile la glutamat și, prin urmare, sunt utilizate pentru a investiga toxicitatea indusă de glutamat sau leziunile neuronale.
Acest articol evidențiază aspectele imperative ale celulelor HT22 care vă pot ajuta în activitatea dumneavoastră de cercetare. Acesta va discuta în principal:
- Atributele generale și originea celulelor HT22
- Informații privind cultivarea liniei celulare HT22
- Avantaje și dezavantaje ale liniei celulare HT22
- Aplicații de cercetare ale liniei celulare HT22
- Publicații de cercetare cu celule HT22
- Resurse pentru celulele HT22: Protocoale, videoclipuri și multe altele
1. Atribute generale și originea celulelor HT22
Această secțiune a articolului va pune în lumină originea și caracteristicile generale ale celulelor HT22. Cunoașterea acestor informații despre o linie celulară este necesară înainte de începerea lucrului pe aceasta. Aici veți afla: Ce sunt celulele HT22? Care este morfologia celulelor hipocampale HT22? Care este dimensiunea celulelor HT22?
HT22 este o linie celulară continuă derivată din regiunea hipocampus a creierului de șoarece. Este o subclonă a liniei celulare parentale HT-4, dezvoltată prin imortalizarea țesuturilor neuronale murine prin intermediul unui antigen T al poliomavirusului simian virus 40 (SV40) sensibil la temperatură.
Aceste celule diferă de celulele hipocampale mature, deoarece nu au receptori glutamatici și colinergici ca neuronii maturi de origine hipocampală. Astfel, ele nu sunt potrivite pentru studii de cercetare legate de memorie [1].
Celulele HT22 au un aspect asemănător celulelor epiteliale.
2. Informații privind cultivarea liniei celulare HT22
Celulele HT22 sunt utilizate în laboratoarele de cercetare în neuroștiințe. Înainte de a cultiva aceste celule, cercetătorii caută informații esențiale despre cultura celulară care să le ușureze și să le eficientizeze munca. Această secțiune acoperă toate punctele cheie pentru cultivarea celulelor HT22. Veți afla: Care este timpul de dublare a celulelor HT22? Cum se fac culturile de celule HT22? Care este protocolul de cultivare a celulelor HT22? Care este mediul de cultură al celulelor HT22?
Puncte-cheie pentru cultivarea celulelor HT22
|
Timpul de dublare: |
Timpul de dublare a celulelor HT22 este de aproximativ 15 ore. |
|
Aderente sau în suspensie: |
Celulele HT22 sunt aderente. |
|
Raport de subcultivare: |
Raportul de subcultivare pentru celulele hipocampale HT22 este de 1:3 până la 1:6. Pe scurt, mediul este îndepărtat, iar celulele aderente sunt clătite cu 1 x PBS. Soluția de disociere Accutase se adaugă în balon, iar celulele sunt incubate timp de 8 până la 10 minute la temperatura ambiantă. Ulterior, se adaugă mediu de cultură proaspăt, iar celulele sunt colectate într-un flacon pentru centrifugare. Peletul celular obținut se resuspendă cu grijă, iar celulele se distribuie într-un balon de cultură pentru creștere. |
|
Mediu de creștere: |
Mediul DMEM este utilizat pentru cultivarea celulelor HT22. Acesta este suplimentat cu 10% FBS, 4,5 g/L glucoză, 4 mM L-glutamină, 1,5 g/L NaHCO3 și 1,0 mM piruvat de sodiu pentru creșterea optimă a celulelor. |
|
Condiții de creștere: |
Culturile de celule HT22 sunt menținute într-un incubator umidificat (temperatură de 37 °C) cu oaprovizionare cu 5%CO2 . |
|
Depozitare: |
Celulele HT22 congelate pot fi păstrate pe termen lung la temperaturi sub -150 °C, fie în faza de vapori a azotului lichid, fie într-un congelator electric cu temperaturi foarte scăzute. |
|
Procesul de congelare și mediul: |
Celulele HT22 pot fi congelate în mediul CM-1 sau CM-ACF folosind o metodă de congelare lentă. Acest proces permite o scădere de numai 1 °C a temperaturii probei pe minut, protejează celulele de șoc și contribuie la menținerea viabilității acestora. |
|
Procesul de decongelare: |
Celulele sunt dezghețate într-o baie de apă la 37 °C timp de 40 până la 60 de secunde, până când rămâne o mică aglomerare de gheață. Ulterior, se adaugă mediul de cultură în celule, iar acestea sunt centrifugate pentru a elimina componentele mediului înghețat. Peletul celular este resuspendat, iar celulele sunt turnate în balonul nou care conține mediul de cultură. După aceasta, celulele sunt incubate la 37 °C într-un incubator timp de cel puțin 24 de ore. |
|
Nivelul de biosecuritate: |
Pentru cultivarea celulelor HT22 sunt obligatorii condiții de laborator de nivel de biosecuritate 1. |
3. Avantaje și dezavantaje ale liniei celulare HT22
Celulele hipocampale HT22 sunt asociate cu unele avantaje și dezavantaje care le diferențiază de alte linii celulare neuronale. Unele avantaje și dezavantaje notabile ale liniei celulare sunt menționate aici.
Avantaje
Avantajele liniei celulare neuronale murine HT22 sunt:
-
Rata de creștere rapidă
Celulele HT22 au un timp de dublare de 15 ore, ceea ce permite o experimentare rapidă și eficientă și contribuie la obținerea în timp util a rezultatelor cercetării.
-
Imortalizare
HT22 este o linie celulară imortalizată, asigurând o creștere continuă pentru perioade îndelungate. Acest lucru asigură disponibilitatea constantă a celulelor, reduce timpul și costurile și facilitează experimentele pe termen lung cu rezultate constante.
Dezavantaje
Dezavantajele celulelor HT22 sunt:
-
Origine murină
Linia celulară HT22 a fost derivată din țesutul hipocampului cerebral de șoarece, care poate să nu reprezinte pe deplin complexitatea fiziologiei și comportamentului celulelor neuronale umane, limitând relevanța lor translațională.
4. Aplicații de cercetare ale liniei celulare HT22
Celulele HT22 sunt utilizate pe scară largă în cercetarea neurobiologică. Câteva aplicații promițătoare ale acestei linii celulare sunt discutate în această secțiune a articolului:
- Cercetarea în neuroștiințe: Celulele HT22 sunt utilizate pe scară largă în cercetarea bolilor neurodegenerative, și anume a bolilor Alzheimer și Parkinson. Acestea sunt considerate un instrument de cercetare valoros pentru studierea mecanismelor de neurotoxicitate și stres oxidativ legate de aceste boli. Cercetările efectuate în 2020 au constatat că calea PI3K/AKT/CREB este implicată în toxicitatea neuronală indusă de hiperglicemie în celulele HT22 [2]. În mod similar, un studiu recent a propus că calea Nrf2/HO-1 și axa de semnalizare NF- κB joacă roluri semnificative în toxicitatea beta amiloidă HT22 [3].
- Screeningul medicamentelor: Celulele HT22 sunt utilizate pe scară largă pentru testarea și depistarea medicamentelor. Ele ajută cercetătorii să identifice potențiali agenți terapeutici care prezintă efecte neuroprotectoare pentru combaterea bolilor neurodegenerative. Un studiu efectuat în 2019 a explorat potențialul neuroprotector al compusului tetrahidro curcumin în celulele hipocampale HT22 tratate cu glutamat. Aici, glutamatul induce stresul oxidativ în celulele HT22 și provoacă moartea celulară prin activarea protein kinazelor activate de mitogen [4].
5. Publicații de cercetare cu celule HT22
Iată câteva lucrări de cercetare interesante care prezintă linia celulară HT22:
Acest studiu din International Journal of Molecular Medicine (2019) a propus potențialul neuroprotector al crocinului, un compus izolat din Crocus sativus L. încelulele HT22deteriorate deL-glutamat.
Această publicație în Neuropharmacology (2018) a raportat că derivații oxindole protejează împotriva morții celulelor HT22 indusă de stresul oxidativ.
Această lucrare de cercetare a fost publicată în Journal of Ginseng Research în 2019. Acest studiu a explorat efectele neuroprotectoare ale unui produs natural, ginsenoside Rb2, folosind linia celulară HT22. Studiul a constatat că ginsenosida rb2 a redus eficient stresul oxidativ indus de glutamat și moartea celulară în celulele hipocampale murine HT22.
Acest studiu din Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) a evaluat potențialul citotoxic al nanoparticulelor de argint în linia celulară HT22.
Ferrostatin-1 protejează celulele HT-22 de toxicitatea oxidativă
Acest articol de cercetare a fost publicat în 2020 în Neural regeneration research. Acesta a propus că ferrostatin-1, un inhibitor al feroptozei, previne toxicitatea oxidativă în celulele hipocampale HT22.
6. Resurse pentru celulele HT22: Protocoale, videoclipuri și altele
Unele resurse online privind celulele HT22 explică protocoalele lor de transfecție, diferențiere și cultură celulară:
- Transfecție HT22: Acest document conține un protocol optimizat pentru transfecția HT22 în plăci de cultură celulară cu 24 și 96 de puțuri.
- Diferențierea celulelor HT22: Acest articol vă va ghida în mod cuprinzător cu privire la protocolul de diferențiere HT22.
Următorul link conține protocolul de cultivare a celulelor HT22:
- Subcultivarea celulelor HT22: Acest link vă va ajuta să învățați protocolul de subcultivare pentru linia celulară HT22. În plus, vă va ajuta să învățați protocolul pentru inducerea neurotoxicității în celule.
- Celule hipocampale HT22: Acest site web conține o mulțime de informații utile despre timpul de dublare a celulelor HT22, medii și protocoale de cultură celulară.
Referințe
- He, M., și colab., Diferențierea redă susceptibilitatea la excitotoxicitate în neuronii HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., și colab., Fisetin previne celulele HT22 de neurotoxicitatea indusă de glucoză ridicată prin intermediul căii de semnalizare PI3K/Akt/CREB. Frontiere în neuroștiință, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l. și colab., Efecte protectoare ale berberinei împotriva neurotoxicității induse de β-amiloid în celulele HT22 prin intermediul căii Nrf2/HO-1. Chimie bioorganică, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H. și colab. efecte neuroprotectoare ale tetrahidrocurcuminei împotriva stresului oxidativ indus de glutamat în celulele HT22 hipocampale. Molecule, 2019. 25(1): p. 144.