Celulele ARPE-19 – O perspectivă specializată asupra cercetării celulelor epiteliale pigmentare retiniene cu ARPE-19
ARPE-19 sunt celule epiteliale pigmentare retiniene de origine umană, apărute spontan. Acestea sunt utilizate pentru a studia diverse aspecte ale biologiei retinei, afecțiunilor patologice și intervențiilor terapeutice (farmacologie). Acest articol își propune să ofere informații cuprinzătoare despre celulele imortalizate ARPE-19. În principal, vor fi discutate caracteristicile generale, condițiile de cultură și diverse aplicații de cercetare ale liniei celulare. Prin urmare, citind acest articol, veți dobândi o înțelegere aprofundată a:
- Mediu de creștere
- Pentru cultivarea liniei celulare ARPE-19 se utilizează mediu DMEM sau Ham’s F12. Mediul ARPE-19 este suplimentat cu 5% FBS, 3,1 g/L glucoză, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamină, 1,0 mM piruvat de sodiu și 1,2 g/L NaHCO3. Mediul se înlocuiește de 2-3 ori pe săptămână.
- Timp de dublare
- Timpul de dublare al ARPE-19 este de aproximativ 55-65 de ore. Acestea pot suferi până la 48 de dublări ale populației.
- Tipul de creștere
- ARPE-19 este o linie celulară aderentă.
- Nivel de biosecuritate
- BSL-1
- Disponibil de la
- Cytion — Comandați ARPE-19
- Celule ARPE-19: Origine și caracteristici generale
- Linia celulară ARPE-19: Informații privind cultivarea
- Avantajele și limitările celulelor ARPE-19
- Aplicații ale liniei celulare ARPE-19 în cercetare
- Celule ARPE-19: Publicații de cercetare
- Resurse pentru linia celulară ARPE-19: protocoale, videoclipuri și altele
- Celulele ARPE-19: Origine și caracteristici generale
- Linia celulară ARPE-19: Informații privind cultivarea
- Avantajele și limitările celulelor ARPE-19
- Aplicații ale liniei celulare ARPE-19 în cercetare
- 5. Celule ARPE-19: Publicații de cercetare
- Resurse pentru linia celulară ARPE-19: protocoale, videoclipuri și multe altele
- Întrebări frecvente
Celulele ARPE-19: Origine și caracteristici generale
Cunoașterea originii și a caracteristicilor generale ale unei linii celulare este esențială pentru utilizarea eficientă a acesteia în cercetare. Această secțiune a articolului va acoperi toate informațiile despre linia celulară ARPE. De exemplu: Ce este linia celulară ARPE-19? De ce să folosiți celulele ARPE-19? Ce este linia celulară ARPE-19/HPV-16? Celulele ARPE-19 sunt imortale? Care este morfologia și dimensiunea celulelor ARPE 19?
- Linia de celule epiteliale pigmentare retiniene imortalizate, ARPE-19, a fost derivată din ochii unui bărbat de 19 ani care a decedat în urma unui traumatism cranian suferit într-un accident. Aceasta a fost creată de Amy Aotaki-Keen în 1986.
- Aceste celule exprimă markeri ai celulelor epiteliale pigmentare retiniene, adică CRALBP și RPE-65, ceea ce sugerează că pot forma monostraturi stabile caracterizate prin polaritate morfologică și funcțională.
- Celulele ARPE-19 au o morfologie asemănătoare celulelor epiteliale.
- Celulele ARPE-19 au în mare parte un cariotip normal, cu excepția unei deleții și a unei adiții în brațul lung al cromozomilor 9 și, respectiv, 19. În plus, se observă și unele aneuploidii [1].
Linia celulară ARPE-19: Informații privind cultivarea
Informațiile de bază privind cultivarea celulelor sunt esențiale pentru manipularea și întreținerea corespunzătoare a unei linii celulare. Această secțiune vă va ajuta să aflați punctele cheie privind cultivarea liniei celulare ARPE-19. Veți afla: care este timpul de dublare al ARPE-19? Care este densitatea de însămânțare a ARPE-19? Care este densitatea celulară a ARPE-19? Care este mediul de congelare al ARPE-19? Cum se cultivă linia celulară ARPE-19?
Puncte cheie pentru cultivarea celulelor ARPE-19
Timpul de dublare a populației:
Timpul de dublare al ARPE-19 este de aproximativ 55-65 de ore. Acestea pot suferi până la 48 de dublări ale populației.
Aderente sau în suspensie:
ARPE-19 este o linie celulară aderentă.
Raportul de subcultivare:
Raportul de subcultivare al ARPE-19 este de 1:3 până la 1:5. Celulele aderente sunt clătite cu PBS 1x și incubate cu soluție de disociere, accutază, timp de 8 până la 10 minute. Celulele detașate sunt adăugate cu mediu proaspăt și centrifugate. Peletul celular a fost resuspendat din nou și turnat într-un flacon de cultură conținând mediu proaspăt.
Mediu de creștere:
Pentru cultivarea liniei celulare ARPE-19 se utilizează mediu DMEM sau Ham’s F12. Mediul ARPE-19 este suplimentat cu 5% FBS, 3,1 g/L glucoză, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamină, 1,0 mM piruvat de sodiu și 1,2 g/L NaHCO3. Mediul se înlocuiește de 2-3 ori pe săptămână.
Condiții de creștere:
Celulele ARPE-19 sunt păstrate într-un incubator umidificat la temperatura de 37 °C, cu un aport de 5% CO2.
Depozitare:
Linia celulară poate fi depozitată în faza de vapori a azotului lichid sau la o temperatură sub -150 °C pentru a proteja viabilitatea celulelor pe termen lung.
Procesul de congelare și mediul:
CM-1 sau CM-ACF sunt utilizate ca medii de congelare pentru ARPE-19. Pe scurt, celulele sunt congelate printr-o metodă de congelare lentă, care permite o scădere a temperaturii de numai 1 °C pe minut și protejează celulele de șoc.
Procesul de decongelare:
Celulele sunt decongelate într-o baie de apă presetată la 37 °C. După ce rămâne o mică bucată de gheață, celulele sunt adăugate într-un mediu de cultură proaspăt și centrifugate. Astfel se îndepărtează elementele mediului de congelare. Apoi, peleta celulară este resuspendată, iar celulele sunt transferate într-un flacon pentru cultivare.
Nivel de biosecuritate:
Celulele ARPE-19 sunt manipulate în laboratoare de biosecuritate 1.
Avantajele și limitările celulelor ARPE-19
Celulele ARPE-19 sunt utilizate pe scară largă în studiile de biologie celulară a retinei. La fel ca alte celule, și acestea prezintă anumite avantaje și limitări. Câteva dintre acestea sunt enumerate în această secțiune:
Avantaje
Principalele avantaje ale liniei celulare ARPE-19 includ:
Model de celule retiniene
Celulele ARPE-19 seamănă foarte mult cu celulele epiteliale pigmentare retiniene umane, ceea ce le face ideale pentru studierea bolilor retiniene și testarea medicamentelor.
Rată de creștere stabilă
Aceste celule prezintă o creștere stabilă și pot fi menținute pe perioade îndelungate, facilitând experimentele pe termen lung.
Receptivitate la transfecție
Linia celulară ARPE-19 este un gazdă excelentă pentru transfecție, utilizată pe scară largă atât în studiile de expresie tranzitorie, cât și în cele de expresie stabilă.
Limitări
Iată câteva limitări asociate liniei celulare ARPE-19:
Diferențiere limitată
Diferențierea ARPE-19 este limitată în comparație cu celulele retiniene primare. Acest lucru poate avea un impact potențial asupra anumitor studii legate de diferențiere.
Aplicații ale liniei celulare ARPE-19 în cercetare
Linia celulară ARPE-19 are numeroase aplicații în cercetarea retinei. Aici am vorbit despre câteva utilizări specifice și semnificative ale acestei linii celulare epiteliale pigmentare retiniene în cercetare.
- Cercetarea bolilor retiniene: Celulele ARPE-19 oferă informații valoroase despre patogeneza retinei. Cercetătorii utilizează celulele pentru a investiga mecanismele bolilor și potențialele tratamente. Un studiu realizat în 2020 a constatat că ARN-ul circular hsa_circ_0041795 interacționează cu miRNA-646 și VEGFC pentru a facilita leziunile induse de niveluri ridicate de glucoză în celulele epiteliale pigmentare retiniene umane ARPE-19. Prin urmare, studiul propune acest ARN circular ca țintă terapeutică și diagnostică eficientă pentru combaterea retinopatiei diabetice [2]. În mod similar, Jing Yang și colegii săi au utilizat celule ARPE-19 și au oferit informații privind patogeneza retinopatiei diabetice. Ei au studiat faptul că inhibarea lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) poate suprima răspunsul inflamator și tranziția epitelială la mezenchimală a celulelor ARPE-19 tratate cu niveluri ridicate de glucoză [3].
- Testarea medicamentelor: celulele ARPE-19 sunt utilizate pentru a evalua eficacitatea și siguranța medicamentelor și compușilor, contribuind la dezvoltarea tratamentelor sau terapiilor pentru bolile retiniene. De exemplu, un studiu realizat în 2019 a descoperit efectele protectoare ale bioactivelor Syzygium malaccense împotriva stresului indus de peroxidul de hidrogen în celulele epiteliale pigmentare retiniene umane, ARPE-19 [4]. În urma acestui studiu, un alt studiu a descoperit rolul terapeutic al extractului de Prunella vulgaris var. L împotriva leziunilor induse de lumina albastră în celulele ARPE-19 și în modelul de șoarece [5].
5. Celulele ARPE-19: Publicații de cercetare
Următoarele sunt câteva publicații de cercetare interesante care prezintă celulele epiteliale pigmentare retiniene ARPE-19.
Evaluarea răspunsurilor microARN în celulele ARPE-19 la stresul oxidativ
Acest articol de cercetare a fost publicat în 2018 în revista Cutaneous and Ocular Toxicology. Acest studiu a evaluat expresia miRNA ca răspuns la stresul oxidativ indus în celulele epiteliale pigmentare retiniene umane ARPE-19 prin tratament cu peroxid de hidrogen.
Această publicație din World Journal of Stem Cells (2021) a sugerat că mediul condiționat de celule ARPE-19 conține factori de creștere care încurajează diferențierea neurală a celulelor stem mezenchimale derivate din țesuturile adipoase.
Acest studiu a fost publicat în International Journal of Molecular Sciences (2019). Acesta afirmă că quercetina protejează eliberarea de chemokine stimulată de IL-1β în celulele ARPE-19 prin prevenirea activării cascadelor MAPK și NF-κB pentru a îmbunătăți răspunsul inflamator.
Acest articol de cercetare a fost publicat în International Journal of Molecular Sciences (2018). Acest studiu a evaluat efectele posibile ale stresului oxidativ și ale inflamației asupra funcțiilor SIRT1 (Sirtuin 1) și DNMT (metiltransferaze ADN), precum și asupra metilării LINE-1 (element nuclear intercalat lung-1) în celulele ARPE-19.
Acest articol din Antioxidants (2022) a constatat că extractele din flori de Chrysanthemum boreale exercită efecte protectoare împotriva leziunilor retiniene induse de N-retiniliden-N-retiniletanolamină (A2E) în celulele ARPE-19.
Resurse pentru linia celulară ARPE-19: protocoale, videoclipuri și multe altele
ARPE-19 este o linie celulară epitelială retiniană utilizată pe scară largă. Resursele disponibile care acoperă protocoalele de cultivare și transfecție a celulelor ARPE-19 sunt enumerate aici:
- Transfecția ARPE-19: Acest videoclip este un ghid pas cu pas pentru învățarea protocolului de transfecție pentru linia celulară ARPE-19.
Iată câteva resurse care descriu protocolul de cultivare a celulelor ARPE-19:
- Protocolul de cultivare a celulelor ARPE-19: Acest link conține informații despre cultivarea și întreținerea celulelor ARPE-19. Acesta cuprinde informații despre mediul ARPE-19, condițiile de cultivare, protocoalele de subcultivare și manipularea culturilor proliferative și crioconservate.
Referințe
- Schnichels, S., et al., Retina în eprubetă: culturi celulare, explante retiniene și modele animale pentru boli comune ale retinei. Progrese în cercetarea retinei și a ochiului, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. și X. Kang, hsa_circ_0041795 contribuie la leziunile celulelor epiteliale pigmentare retiniene umane (ARPE 19) induse de glucoză ridicată prin absorbția miR-646 și activarea VEGFC. Gene, 2020. 747: p. 144654.
- Yang, J., et al., SNHG1 silențiat a inhibat tranziția epitelial-mezenchimală și răspunsul inflamator al celulelor ARPE-19 indus de glucoză ridicată. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Efectul protector al derivaților de miricetină din Syzygium malaccense împotriva stresului indus de peroxidul de hidrogen în celulele ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
- Kim, J., K. Cho și S.-Y. Choung, Efectul protector al extractului de Prunella vulgaris var. L împotriva leziunilor induse de lumina albastră în celulele ARPE-19 și în retina șoarecilor. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: p. 622-631.