Linia celulară A375 – Ghid privind cercetarea în domeniul melanomului

A375 este o linie celulară de melanom uman utilizată pe scară largă în cercetarea toxicologică și imuno-oncologică. Cercetătorii utilizează această linie celulară pentru a studia biologia cancerului și căile de semnalizare, pentru a testa sau a selecta potențiali agenți anticancerigeni și pentru a dezvolta terapii noi și eficiente.

Originea și caracteristicile generale ale celulelor A375

Cunoașterea originii și a caracteristicilor generale ale unei linii celulare vă poate ajuta să planificați utilizarea acesteia în cercetare. Această secțiune a articolului va acoperi originea și caracteristicile liniei celulare A375. De exemplu, ce este linia celulară A375? Care sunt caracteristicile liniei celulare A375? De unde provin celulele A375? Care este morfologia celulelor de melanom A375? Care este dimensiunea celulelor A375?

• Linia celulară de cancer de piele A375 provine din cultura de explant a unei tumori solide a unei femei de 54 de ani cu melanom malign [1].
• Celulele A375 au o morfologie de tip epitelial.
• Dimensiunea celulelor A375 este relativ mai mică în comparație cu alte linii celulare. Acestea au un diametru de aproximativ 12 µm.
• Celulele de melanom A375 sunt hipotriploide. Numărul modal de cromozomi pentru această linie celulară este 62. De obicei, fiecare celulă are nouă cromozomi marcatori și o copie a cromozomilor normali N2, N6 și N22.

Celulele A375: Informații privind cultura celulară

Culturile de celule A375 sunt ușor de întreținut. Acestea nu au cerințe stricte de cultivare. Această secțiune vă va ajuta să aflați informațiile necesare privind cultivarea celulelor. De exemplu, care este timpul de dublare al celulelor A375? Care este mediul de cultură al liniei celulare A375? Care este densitatea de însămânțare a celulelor A375? Celulele de melanom A375 sunt aderente?

Puncte cheie pentru cultivarea celulelor A375

Timpul de dublare a populației:

Timpul de dublare al A375 este de 20 de ore.

Aderente sau în suspensie:

A375 este o linie celulară de melanom uman aderentă.

Densitatea de însămânțare:

O densitate celulară de 1 x 10⁴ celule/cm² este ideală pentru culturile celulare A375. Celulele aderente sunt clătite cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) 1x și incubate cu soluție de pasare (Accutase). Ulterior, celulele au fost adăugate în mediu de cultură și centrifugate. Celulele recoltate au fost resuspendate într-un mediu de cultură și distribuite în flacoane noi pentru creștere.

Mediu de creștere:

DMEM este recomandat ca mediu ideal pentru A375 atunci când este suplimentat cu 10% ser fetal bovin (FBS), 4,5 g/L glucoză, 1,5 g/L NaHCO3, 4 mM L-glutamină și 1,0 mM piruvat de sodiu. Mediul A375 trebuie reînnoit de 2-3 ori pe săptămână.

Condiții de creștere:

Celulele de melanom A375 sunt cultivate într-un incubator umidificat (37 °C) cu o alimentare cu 5% CO2.

Depozitare:

Celulele A375 congelate trebuie păstrate la o temperatură sub -150 °C în faza de vapori a azotului lichid sau într-un congelator electric.

Procesul de congelare și mediul:

Pentru congelarea liniei celulare A375 se utilizează medii CM-1 sau CM-ACF. S-a optat pentru un proces de congelare lentă, care permite o scădere treptată a temperaturii cu 1 °C, pentru a proteja viabilitatea celulelor.

Procesul de decongelare:

Flaconul cu celule de melanom A375 congelate este agitat rapid în baia de apă timp de 40 până la 60 de secunde, până când rămâne doar un mic bulgăre de gheață. Celulele sunt adăugate cu mediu proaspăt și centrifugate pentru a îndepărta elementele mediului de congelare. Peleta celulară obținută a fost din nou resuspendată și turnată în flacoane noi.

Nivel de biosecuritate:

Culturile A375 sunt manipulate și menținute în condiții de laborator de nivel 1 de biosecuritate.

Aplicații de cercetare ale liniei celulare A375

Linia celulară A375 are aplicații extinse în cercetarea cancerului. Iată câteva dintre domeniile comune în care sunt utilizate celulele A375.

• Cercetarea cancerului: Celulele A375 au aplicații pe scară largă în cercetarea melanomului. Cercetătorii au utilizat aceste celule pentru a investiga biologia cancerului de piele, procesele și mecanismele de semnalizare celulară subiacente, inclusiv proliferarea, migrația și invazia celulară. Acest lucru poate ajuta, de asemenea, cercetătorii să identifice noi ținte terapeutice moleculare. Un studiu realizat de Lin Zhu și colegii săi în 2019 a utilizat celule de melanom A375 extrem de agresive și a descoperit rolul microARN-3662 în creșterea și invazia celulelor de melanom A375. Rezultatele studiului indică faptul că microARN-3662 vizează gena ZEB1 și reglează creșterea celulelor de melanom in vitro și in vivo în modelul tumoral A375 [2]. În mod similar, cercetările efectuate în 2018 au descoperit că căile PI3K/AKT și MAPK/ERK sunt implicate în proliferarea și metastazarea liniei celulare A375 [3].
• Descoperirea și testarea medicamentelor: Linia celulară A375 este un model tumoral in vitro util pentru testarea și screeningul potențialilor agenți anticancerigeni. Cercetătorii evaluează toxicitatea și eficacitatea medicamentelor chimioterapeutice noi, a compușilor și a altor terapii folosind aceste celule de melanom A375. De exemplu, un studiu a explorat proprietățile anticanceroase ale micro- și nanovesiculelor derivate din grapefruit asupra celulelor canceroase de melanom uman A375. Rezultatele au arătat că micro- și nanovesiculele induc oprirea ciclului celular și apoptoza și împiedică expresia genelor în proliferarea, migrația și invazia celulară [4].

Celule A375: Publicații

Aici sunt menționate câteva publicații de cercetare semnificative care prezintă celulele A375.

Vitamina D și analogii săi cu efect calcemic redus modulează proprietățile anticanceroase ale cisplatinei și dacarbazinei în linia celulară A375 de melanom uman

Acest studiu a fost publicat în Journal of Oncology în 2019. Studiul a sugerat că tratamentul combinat cu vitamina D și analogii săi îmbunătățește activitatea anticancerigenă a cisplatinei și a dacarbazinei în celulele de melanom A375.

Evaluarea in vitro a efectelor anti-melanom (linia celulară A375) ale gelului și extractelor din frunze întregi provenite de la specii selectate de aloe

Această cercetare a fost publicată în Journal of Herbal Medicine în 2022. Acest studiu a explorat efectele anti-melanom ale gelului de aloe vera în celulele de melanom A375.

Membrul 2 al familiei Fermitin promovează progresia melanomului prin îmbunătățirea legării p-α-Pix de Rac1 pentru a activa calea MAPK

Acest studiu publicat în Oncogene (2021) a propus că membrul 2 al familiei fermitin (FERMT2 sau kindlin-2) favorizează progresia melanomului prin activarea MAPK prin legarea de p-α-Pix și Rac1.

FARP1 facilitează proliferarea celulară prin modularea căii de semnalizare MAPK în melanomul cutanat

Acest studiu publicat în The American Journal of Dermatopathology (2019) a sugerat că FARP1 poate facilita dezvoltarea și progresia melanomului cutanat. Prin urmare, acesta poate fi o țintă terapeutică utilă.

Potențialul citotoxic și apoptotic al extractelor de Phyllodium elegans asupra liniilor celulare canceroase umane

Acest articol de cercetare a fost publicat în Bioengineered (2019). Acest studiu a explorat activitatea citotoxică și apoptotică a unui extract din planta Phyllodium elegans asupra liniilor celulare de carcinom uman, inclusiv A375.

Resurse pentru linia celulară A375: protocoale, videoclipuri și multe altele

Următoarele sunt câteva resurse online care prezintă celulele A375.

• Transfecția celulelor A375: Acest tutorial video vă va ajuta să învățați pas cu pas transfecția celulelor A375.
• Cultivarea celulelor: Acest videoclip conține informații foarte utile privind cultivarea liniilor celulare.

Protocoalele de cultură celulară pentru celulele A375 sunt enumerate aici.

• Linia celulară A375: Acest link conține informații utile despre cultivarea și întreținerea liniei celulare A375, inclusiv mediile A375 și manipularea culturilor A375 congelate și în proliferare.

Referințe

1. Avram, S., et al., Standardizarea modelelor de melanom uman A375 pe membrana corioalantoidiană a embrionului de găină și pe șoareci Balb/c nude. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 vizează ZEB1 și atenuează invazia liniei celulare de melanom A375, extrem de agresivă. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inhibă proliferarea și metastazarea celulelor de melanom A375 prin suprimarea căilor PI3K/Akt și MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Micro- și nanovesiculele derivate din grapefruit prezintă profiluri metabolomice distincte și activități anticanceroase în linia celulară de melanom uman A375. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.