Objętość: 100 ml
Przechowywanie: ≤ –15°C
Sterylność: filtrowane sterylnie
Stabilny roztwór glutaminy (L-alanil-L-glutamina, 200 mM) to wysoce stabilna forma dipeptydowa L-glutaminy, zaprojektowana jako bezpośredni zamiennik konwencjonalnej L-glutaminy w pożywkach do hodowli komórkowej. L-glutamina jest niezbędnym aminokwasem i głównym źródłem energii dla hodowanych komórek, odgrywającym kluczową rolę w rozwoju komórek, metabolizmie i syntezie białek.
Zastosowanie i korzyści
W standardowych pożywkach płynnych L-glutamina ulega stosunkowo szybkiej degradacji w temperaturze 37°C, co prowadzi do powstawania toksycznych produktów ubocznych, takich jak jony amonowe, które mogą negatywnie wpływać na żywotność komórek i wyniki eksperymentów. Stabilna glutamina pokonuje to ograniczenie, zapewniając nie ulegającą degradacji formę dipeptydu, która pozostaje nienaruszona w warunkach hodowli.
Komórki enzymatycznie rozszczepiają wiązanie dipeptydowe, uwalniając L-glutaminę w razie potrzeby, zapewniając ciągłe świeże dostawy i zapobiegając gromadzeniu się szkodliwych produktów ubocznych. Dzięki temu roztwór ten jest szczególnie korzystny w przypadku długotrwałych hodowli komórkowych i systemów wzrostu o wysokiej gęstości.
Skład i zastosowanie
Roztwór L-alanil-L-glutaminy jest przygotowywany w wodzie przeznaczonej do hodowli komórkowych w stężeniu 200 mM i jest filtrowany sterylnie do zastosowań wrażliwych na zanieczyszczenia. Można go rozcieńczać bezpośrednio w kompletnych pożywkach zgodnie z wymaganiami eksperymentalnymi. Przechowywać w temperaturze ≤ –15°C i unikać powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania, aby zachować stabilność produktu.
Wyłącznie do użytku badawczego. Nie nadaje się do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie nadaje się do stosowania u ludzi lub zwierząt.
Objętość: 100 ml
Przechowywanie: od +2°C do +8°C
Sterylność: filtrowane sterylnie
Roztwór buforowy HEPES (1 M), znany również jako kwas N-2-hydroksyetylo-piperazyno-N-2-etanosulfonowy, jest dwukationowym organicznym środkiem buforującym, szeroko stosowanym w pożywkach do hodowli komórek. Został opracowany w celu utrzymania stabilnych warunków pH w zakresie fizjologicznym od 6,7 do 8,6, wspierając optymalne funkcjonowanie komórek podczas zastosowań in vitro.
Zastosowanie i korzyści
HEPES zapewnia niezawodną zdolność buforowania w systemach hodowli komórkowej, szczególnie gdy komórki są przetwarzane poza inkubatorem CO₂. Dodanie 10–25 mM HEPES do pożywki hodowlanej zapewnia zwiększoną stabilność pH podczas długotrwałych manipulacji, pomagając utrzymać stałe warunki eksperymentalne.
Ten bufor jest nieprzepuszczalny dla błon, ma minimalny wpływ na reakcje biochemiczne i wykazuje silną stabilność chemiczną i enzymatyczną. Te właściwości sprawiają, że nadaje się on do szerokiego zakresu zastosowań w hodowli komórek i biochemii.
Skład i zastosowanie
Roztwór jest dostarczany w postaci 1 M koncentratu przygotowanego w wodzie przeznaczonej do hodowli komórkowej i jest filtrowany sterylnie do użytku w środowiskach wrażliwych na zanieczyszczenia. Można go rozcieńczyć do pożądanego stężenia roboczego w zależności od wymagań zastosowania. Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C i obchodzić się z nim w warunkach aseptycznych, aby zachować integralność produktu.
Wyłącznie do użytku badawczego. Nie nadaje się do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie nadaje się do stosowania u ludzi lub zwierząt.
Pojemność: 50 ml
Przechowywanie: od +2°C do +8°C
Sterylność: filtrowane sterylnie
Roztwór D-(+)-glukozy (roztwór dekstrozy) jest sterylnym, gotowym do użycia suplementem zawierającym naturalnie występujący cukier D-(+)-glukozę, który jest głównym składnikiem metabolizmu komórkowego. Glukoza bierze udział w podstawowych procesach biologicznych, takich jak produkcja energii, glikozylacja i tworzenie glikanów, które przyczyniają się do budowy i funkcjonowania komórek.
Zastosowanie i korzyści
Ten roztwór glukozy jest szeroko stosowany jako suplement w pożywkach do hodowli komórkowych oraz w wielu zastosowaniach biologii komórkowej i molekularnej. Jako główne źródło węgla i energii, glukoza wspomaga wzrost komórek, proliferację i aktywność metaboliczną. Jej udział w szlakach biosyntezy sprawia, że ma ona kluczowe znaczenie dla utrzymania prawidłowej fizjologii komórek i spójności eksperymentów.
Skład i zastosowanie
Roztwór jest dostarczany w wysokim stężeniu 250 g/l glukozy, co pozwala na elastyczne rozcieńczanie w pożywkach hodowlanych zgodnie z wymaganiami eksperymentalnymi. Jest filtrowany sterylnie, aby zapewnić przydatność do zastosowań wrażliwych na zanieczyszczenia. Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C i obchodzić się z nim w sposób aseptyczny, aby zachować jakość i stabilność produktu.
Wyłącznie do użytku badawczego. Nie nadaje się do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie nadaje się do stosowania u ludzi lub zwierząt.
Pojemność: 10 ml
Przechowywanie: od +2°C do +8°C
Sterylność: filtrowane sterylnie
Roztwór insuliny-transferryny-selenu (ITS) (100x) to chemicznie zdefiniowany suplement przeznaczony do szerokiego zakresu zastosowań w hodowli komórkowej. Najczęściej stosuje się go jako dodatek do podstawowych pożywek do hodowli komórkowej w celu wspierania wzrostu komórek w warunkach o obniżonej zawartości surowicy lub bez surowicy.
Zastosowanie i zalety
Nasz suplement ITS dostarcza niezbędnych składników wymaganych do optymalnego działania pożywek bezsurowicowych. Dzięki uzupełnieniu konwencjonalnych pożywek odżywczych o ITS można znacznie zmniejszyć zapotrzebowanie na surowicę płodową bydlęcą (FBS) do rutynowej hodowli wielu linii komórkowych. Pomaga to zminimalizować zmienność związaną ze stosowaniem surowicy, przy jednoczesnym utrzymaniu stałego wzrostu i żywotności komórek.
Insulina wspomaga wchłanianie i metabolizm kluczowych składników odżywczych, transferyna ułatwia transport żelaza, a selen przyczynia się do ochrony antyoksydacyjnej i aktywności enzymatycznej. Razem składniki te sprzyjają zrównoważonemu metabolizmowi komórkowemu i poprawiają powtarzalność w określonych systemach hodowli.
Skład i stosowanie
Insulina-transferyna-selen (ITS) jest dostarczana w postaci 100-krotnie stężonego roztworu w zrównoważonym roztworze soli Earle'a (EBSS) bez czerwieni fenolowej. W standardowych zastosowaniach należy rozcieńczyć w stosunku 1:100 w odpowiedniej pożywce podstawowej, aby uzyskać zalecane stężenie robocze. Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C i obchodzić się z produktem w warunkach aseptycznych, aby zachować jego stabilność i sterylność.
Wyłącznie do celów badawczych. Nie stosować w procedurach diagnostycznych ani terapeutycznych. Nie stosować u ludzi ani zwierząt.
Pojemność: 5 ml
Przechowywanie: od +2°C do +8°C
Sterylność: filtrowane sterylnie
Roztwór rekombinowanej insuliny ludzkiej jest chemicznie zdefiniowanym suplementem powszechnie stosowanym do hodowli linii komórkowych ssaków, w tym komórek jajnika chomika chińskiego (CHO). Ten roztwór klasy hodowli komórkowej zawiera rekombinowaną insulinę ludzką wyrażaną w Saccharomyces cerevisiae, co zapewnia wysoką czystość i stałą wydajność w zastosowaniach badawczych.
Zastosowanie i zalety
Insulina jest rutynowo dodawana do bezsurowicowych i chemicznie zdefiniowanych pożywek w celu pobudzenia wzrostu i produktywności komórek. Jako kluczowy hormon regulacyjny insulina wspomaga wychwyt, wykorzystanie i magazynowanie glukozy, aminokwasów i kwasów tłuszczowych przez komórki. Hamuje również rozkład glikogenu, białek i lipidów, przyczyniając się w ten sposób do poprawy żywotności komórek i stabilności metabolicznej w systemach hodowli. Chemicznie zdefiniowana formuła wspiera powtarzalność i minimalizuje zmienność w wrażliwych procesach hodowli komórkowej.
Właściwości biologiczne i zastosowanie
Insulina jest dwułańcuchowym hormonem polipeptydowym naturalnie wytwarzanym przez komórki β wysp trzustkowych. Jej masa cząsteczkowa wynosi około 5800 Da. Łańcuchy α i β są połączone dwoma międzyłańcuchowymi wiązaniami disiarczkowymi, a łańcuch α zawiera jedno wewnątrzłańcuchowe wiązanie disiarczkowe. W przypadku zastosowań w hodowli komórkowej roztwór należy przechowywać w warunkach aseptycznych w temperaturze od +2°C do +8°C w celu zachowania stabilności i właściwości.
Wyłącznie do celów badawczych. Nie nadaje się do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie nadaje się do stosowania u ludzi ani zwierząt.
Objętość: 100 ml
Przechowywanie: od +2°C do +8°C
Sterylność: filtrowane sterylne
Roztwór pirogronianu sodu (100 mM) jest sterylnym, gotowym do użycia suplementem przeznaczonym do dostarczania dodatkowego, łatwo dostępnego źródła energii dla pożywek do hodowli komórkowych. Pirogronian sodu odgrywa kluczową rolę w metabolizmie energetycznym komórek i wspomaga wzrost komórek aktywnych metabolicznie i szybko proliferujących, takich jak komórki nowotworowe. Suplementacja może zwiększyć żywotność komórek i pomóc w utrzymaniu stabilności metabolicznej w systemach hodowlanych.
Zastosowanie i korzyści
Roztwór ten jest szeroko stosowany w rutynowej hodowli komórek w celu wzbogacenia pożywki w pirogronian i zapewnienia optymalnych warunków wzrostu. Wspomaga produkcję ATP, może pomóc w zmniejszeniu stresu oksydacyjnego i przyczynia się do poprawy wydajności metabolicznej hodowanych komórek. Produkt jest wytwarzany w wodzie przeznaczonej do hodowli komórek i filtrowany sterylnie, co zapewnia stałą jakość i powtarzalność w procesach badawczych.
Zastosowanie i kompatybilność
Zalecane stężenie końcowe dla większości zastosowań w hodowli komórek wynosi 1 mM pirogronianu sodu, które uzyskuje się poprzez rozcieńczenie 100 mM roztworu podstawowego w stosunku 1:100 w kompletnym podłożu hodowlanym. Roztwór jest kompatybilny z szeroką gamą podłoży podstawowych i linii komórek ssaków. Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C i chronić przed zanieczyszczeniem, aby zachować stabilność produktu.
Wyłącznie do użytku badawczego. Nie nadaje się do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie nadaje się do stosowania u ludzi lub zwierząt.
Pojemność: 100 ml Przechowywanie: ≤-15°C Sterylność: Sterylnie filtrowany
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) to sterylny, gotowy do użycia koncentrat zaprojektowany w celu zmniejszenia ryzyka skażenia mikrobiologicznego w hodowli komórkowej i powiązanych zastosowaniach laboratoryjnych. Roztwór 100x zawiera dobrze znane połączenie penicyliny, streptomycyny i amfoterycyny B, zapewniając szerokie spektrum działania przeciwdrobnoustrojowego przeciwko bakteriom Gram-dodatnim i Gram-ujemnym, drożdżom i grzybom nitkowatym. Preparat nadaje się do stosowania w hodowlach komórek eukariotycznych, pożywkach bakteryjnych i innych systemach wrażliwych na zanieczyszczenia, wspierając czyste i spójne operacje laboratoryjne.
Zastosowanie i korzyści Rozwiązanie to, zoptymalizowane pod kątem rutynowych protokołów badawczych, jest szeroko stosowane do utrzymywania aseptycznych warunków w procesach hodowli komórkowych. Zapewnia niezawodne działanie w środowiskach wrażliwych na zanieczyszczenia, pomagając naukowcom zmniejszyć ryzyko przerostu drobnoustrojów bez uszczerbku dla zdrowia komórek lub powtarzalności eksperymentów. Sterylnie filtrowana formuła eliminuje potrzebę dodatkowych etapów solubilizacji, wspierając usprawnione przygotowanie mediów i zmniejszając zmienność w codziennych procedurach laboratoryjnych.
Zastosowanie i kompatybilność Aby uzyskać standardowe stężenia robocze, należy rozcieńczyć roztwór w stosunku 1:100 w pełnym podłożu hodowlanym. Produkt jest kompatybilny z szeroką gamą linii komórkowych ssaków i pożywek podstawowych. Dzięki stałej dostępności produktu, badacze mogą korzystać z niezawodnej ciągłości dostaw i uproszczonego planowania logistycznego. Roztwór należy przechowywać w temperaturze ≤ -15 °C i chronić przed powtarzającymi się cyklami zamrażania i rozmrażania w celu zachowania stabilności. Wyłącznie do użytku badawczego. Nie stosować w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie stosować u ludzi ani zwierząt.
Pojemność: 100 ml Przechowywanie: +2°C do +8°C Sterylność: Sterylnie filtrowany
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) to sterylny suplement zaprojektowany w celu zwiększenia wzrostu i żywotności komórek w systemach hodowli komórek ssaków. Formuła odpowiada 100-krotnemu koncentratowi nieistotnych aminokwasów występujących w standardowej pożywce Minimum Essential Medium (MEM), umożliwiając bezpośrednie uzupełnienie pożywki podstawowej przy minimalnym przygotowaniu.
Zastosowanie i korzyści Suplement ten zapewnia dodatkową pulę aminokwasów dla szybko proliferujących komórek lub linii komórkowych, które utraciły zdolność do syntezy aminokwasów de novo. Zmniejszając obciążenie metaboliczne związane z biosyntezą, wspomaga lepszą kinetykę wzrostu, przedłużoną żywotność i większą spójność eksperymentalną
- szczególnie w hodowlach wrażliwych na składniki odżywcze lub o dużej gęstości.
Skład i zastosowanie Roztwór zawiera glicynę, L-alaninę, L-asparaginę, kwas L-asparaginowy, kwas L-glutaminowy, L-prolinę i L-serynę. Jest kompatybilny z MEM i większością innych standardowych mediów. Aby użyć, rozcieńczyć w stosunku 1:100 do końcowego podłoża hodowlanego. Produkt jest sterylnie filtrowany i gotowy do użycia bez dodatkowych czynności. Wyłącznie do użytku badawczego. Nie stosować w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie stosować u ludzi ani zwierząt.
- delikatna alternatywa dla trypsyny
Accutase to roztwór do odłączania komórek, który rewolucjonizuje przemysł hodowli komórkowych. Jest to mieszanka enzymów proteolitycznych i kolagenolitycznych, która naśladuje działanie trypsyny i kolagenazy. W przeciwieństwie do trypsyny, Accutase nie zawiera żadnych składników pochodzących od ssaków lub bakterii i jest znacznie łagodniejszy dla komórek, co czyni go idealnym rozwiązaniem do rutynowego odłączania komórek od standardowych naczyń plastikowych do hodowli tkankowych i naczyń plastikowych pokrytych powłoką adhezyjną. W tym wpisie na blogu omówimy zalety i zastosowania Accutase oraz sposób, w jaki zmienia ona zasady gry w hodowli komórkowej.
Zalety Accutase
Accutase ma kilka zalet w porównaniu z tradycyjnymi roztworami trypsyny. Po pierwsze, może być stosowana wszędzie tam, gdzie potrzebne jest delikatne i skuteczne oderwanie dowolnej przylegającej linii komórkowej, co czyni ją bezpośrednim zamiennikiem trypsyny. Po drugie, Accutase działa wyjątkowo dobrze na embrionalnych i neuronalnych komórkach macierzystych i wykazano, że utrzymuje żywotność tych komórek po pasażowaniu. Po trzecie, Accutase zachowuje większość epitopów do późniejszej analizy cytometrii przepływowej, co czyni ją idealną do analizy markerów powierzchniowych komórek.
Dodatkowo, Accutase nie musi być neutralizowana podczas pasażowania przylegających komórek. Dodanie większej ilości pożywki po rozdzieleniu komórek rozcieńcza Accutase tak, że nie jest już w stanie oddzielić komórek. Eliminuje to potrzebę etapu inaktywacji i oszczędza czas techników zajmujących się hodowlą komórek. Wreszcie, Accutase nie musi być dzielona na porcje, a butelka jest stabilna w lodówce przez 2 miesiące.
Zastosowania Accutazy
Accutase jest bezpośrednim zamiennikiem roztworu trypsyny i może być stosowany do pasażowania linii komórkowych. Ponadto, Accutase dobrze sprawdza się podczas odłączania komórek w celu analizy wielu markerów powierzchniowych komórek za pomocą cytometrii przepływowej i sortowania komórek. Inne zastosowania Accutase obejmują analizę markerów powierzchniowych komórek, test wzrostu wirusa, proliferację komórek, testy migracji komórek nowotworowych, rutynowe pasażowanie komórek, zwiększanie skali produkcji (bioreaktor) i cytometrię przepływową.
Skład Accutazy
Accutase nie zawiera składników pochodzących od ssaków lub bakterii i jest naturalną mieszaniną enzymów o aktywności proteolitycznej i kolagenolitycznej. Jest formułowany w znacznie niższym stężeniu niż trypsyna i kolagenaza, dzięki czemu jest mniej toksyczny i łagodniejszy, ale równie skuteczny.
Skuteczność Accutase
Wykazano, że Accutase jest skuteczny w odłączaniu komórek pierwotnych i macierzystych oraz utrzymuje wysoką żywotność komórek w porównaniu z enzymami pochodzenia zwierzęcego, takimi jak trypsyna. 100% komórek jest odzyskiwanych po 10 minutach, a pozostawienie komórek w Accutase do 45 minut nie jest szkodliwe, dzięki automatycznemu trawieniu Accutase.
Podsumowanie
Podsumowując, Accutase to potężne rozwiązanie, które zmienia zasady gry w hodowli komórkowej. Dzięki swojej łagodności, wydajności i wszechstronności, Accutase jest idealną alternatywą dla trypsyny. Jeśli szukasz niezawodnego i wydajnego rozwiązania do odłączania komórek, Accutase jest rozwiązaniem dla Ciebie.
Co zawiera EMEM?
EMEM to zmodyfikowana wersja minimalnego niezbędnego podłoża Eagle'a, zawierająca zrównoważony roztwór soli Earle'a, nieistotne aminokwasy, L-glutaminę, pirogronian sodu i wodorowęglan sodu. Należy zauważyć, że ten poziom wodorowęglanu sodu jest przeznaczony do stosowania w 5% CO2 w powietrzu. Aby zachować skuteczność, zaleca się przechowywanie pożywki w temperaturze od 2°C do 8°C w ciemności, gdy nie jest używana.
Do czego służy EMEM?
Minimalna pożywka niezbędna Eagle'a (EMEM) to pożywka do hodowli komórkowej, która może utrzymywać komórki w hodowli tkankowej. Pożywka zawiera wyższe stężenia aminokwasów, co pozwala na dokładniejsze przybliżenie składu białkowego hodowanych komórek ssaków. EMEM może być stosowany do hodowli różnych komórek, w tym fibroblastów, ludzkich komórek raka wątroby (HepG2) i ludzkich komórek astrocytów pochodzących z płodowego progenitora mózgu (PDA). Zazwyczaj stosuje się go w obecności płodowej surowicy bydlęcej (FBS), surowicy cielęcej lub końskiej.
Czym różni się EMEM od innych pożywek do hodowli komórkowych?
Chociaż EMEM i zmodyfikowane podłoże Eagle'a (DMEM) Dulbecco mają pewne podobieństwa, różnią się również. Obie pożywki nie zawierają białka i zawierają aminokwasy, sole, glukozę i witaminy niezbędne do zapewnienia komórkom energii i utrzymania ich w hodowli tkankowej. Formuła DMEM jest jednak zmodyfikowana tak, aby zawierała do czterech razy więcej witamin i aminokwasów oraz dwa do czterech razy więcej glukozy niż EMEM. Warto zauważyć, że EMEM różni się również od oryginalnego preparatu MEM.
Kontrola jakości
Sterylnie filtrowany
Przechowywanie i okres trwałości
Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C, chronić przed światłem.
Po otwarciu przechowywać w temperaturze 4°C i zużyć w ciągu 6-8 tygodni.
Warunki wysyłki
Temperatura otoczenia
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Unikać zamrażania i częstego podgrzewania do temperatury +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu.
Nie podgrzewać nośnika powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak urządzenia mikrofalowe.
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy usunąć wymaganą ilość i ogrzać ją do temperatury pokojowej przed użyciem.
Skład
Kategoria
Składniki
Stężenie (mg/L)
Aminokwasy
L-arginina HCl
126.00
L-cysteina 2 HCl
31.30
L-glutamina
292.00
L-histydyna HClH2O
42.00
L-Izoleucyna
52.00
L-Leucyna
52.00
L-Lizyna HCl
72.50
L-metionina
15.00
L-fenyloalanina
32.00
L-treonina
48.00
L-tryptofan
10.00
L-tyrozyna 2 Na 2H2O
51.90
L-walina
46.00
Witaminy
Chlorek choliny
1.00
Witaminy
Pantotenian D-wapnia
1.00
Kwas foliowy
1.00
mio-inozytol
2.00
Nikotynamid
1.00
Chlorowodorek pirydoksalu
1.00
Ryboflawina
0.10
Tiamina HCl
1.00
Sole nieorganiczne
CaCl2 2H2O
265.00
Sole nieorganiczne
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Inne składniki
D-glukoza
1000.00
Inne składniki
Sól sodowa czerwieni fenolowej
11.00
Kluczowe cechy Freeze Medium CM-1 obejmują:
Szeroka kompatybilność: Skuteczny dla szerokiej gamy typów komórek, w tym komórek pierwotnych, komórek macierzystych i ustalonych linii komórkowych.
Wysoka żywotność: Zoptymalizowany w celu maksymalizacji odzysku i żywotności komórek po rozmrożeniu, zapewniając wiarygodne wyniki eksperymentów.
Gotowy do użycia: Wygodnie przygotowany i wysterylizowany do natychmiastowego zastosowania, skracając czas przygotowania i zmniejszając ryzyko zanieczyszczenia.
Zwiększona stabilność: Utrzymuje stałą wydajność w standardowych warunkach kriokonserwacji, zapewniając powtarzalne wyniki.
Długi okres trwałości: CM-1 to zawierająca surowicę, gotowa do użycia pożywka do kriokonserwacji, którą można przechowywać w lodówce przez okres do jednego roku.
Używanie CM-1 do zamrażania komórek
Aby użyć CM-1 do zamrażania zarówno komórek adherentnych, jak i zawiesinowych, należy wykonać następujące kroki
W przypadku komórek przylegających należy je umyć i oddzielić od podłoża hodowlanego. W przypadku komórek w zawiesinie przejdź bezpośrednio do następnego kroku.
Policzyć komórki, aby upewnić się, że mają odpowiednie stężenie.
Odwirować komórki, aby je osuszyć, a następnie ponownie zawiesić w pożywce do zamrażania CM-1.
Przenieś ponownie zawieszone komórki do fiolek.
Użyj metody powolnego zamrażania przed przeniesieniem komórek do długoterminowego przechowywania
Metoda
Opis
Kroki
❄️
Ręczne zamrażanie
Metoda krok po kroku polegająca na stopniowym obniżaniu temperatury w celu zapewnienia żywotności komórek
1️⃣ Umieścić komórki w pożywce do zamrażania w temperaturze 4°C na 40 minut.
2️⃣ Przenieść do zamrażarki o temperaturze -80°C na 24 godziny.
3️⃣ Przechowywać komórki w ciekłym azocie w celu długotrwałego przechowywania
❄️
Korzystanie z Mr. Frosty
Wygodne urządzenie umożliwiające kontrolowane zamrażanie bez zasilania elektrycznego
1️⃣ Przygotować komórki w kriofiolach z pożywką do zamrażania.
2️⃣ Umieścić kriofiole w pojemniku Mr. Frosty.
3️⃣ Przechowywać w temperaturze -80°C przez 24 godziny przed przeniesieniem do ciekłego azotu
❄️
Zamrażarka o kontrolowanej prędkości
Precyzyjna zamrażarka firmy Thermo Fisher lub innych producentów przeznaczona do kontrolowanego obniżania temperatury
1️⃣ Zaprogramuj urządzenie tak, aby stopniowo obniżało temperaturę.
2️⃣ Umieść przygotowane komórki w zamrażarce.
3️⃣ Po cyklu zamrażania przenieś komórki do ciekłego azotu
Przechowywać kriofiole w temperaturze poniżej -130°C lub w ciekłym azocie w celu długotrwałego przechowywania.
Składniki
Zawiera FBS, DMSO, glukozę, sole
Zdolność buforowania: pH = 7,2 do 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 oferuje niezawodne rozwiązanie do kriokonserwacji, zapewniając wysoką żywotność komórek i funkcjonalność po rozmrożeniu w szerokim zakresie zastosowań badawczych.
Pożywka Ham's F-12K (Kaighn's) została starannie opracowana w celu optymalizacji warunków hodowli komórek. Charakteryzuje się wzbogaconym składem, zapewniając podwyższony poziom niezbędnych składników, takich jak aminokwasy i pirogronian sodu, a także dodatkowe elementy, w tym putrescynę, tymidynę, hipoksantynę i cynk. Dodatki te umożliwiają badaczom uzupełnienie pożywki minimalną ilością surowicy lub określonymi składnikami dla określonych typów komórek, ułatwiając precyzyjne warunki eksperymentalne.
Warto zauważyć, że pożywka Ham's F-12K (Kaighn's) nie zawiera białek ani czynników wzrostu. W związku z tym często konieczna jest suplementacja czynnikami wzrostu i płodową surowicą bydlęcą (FBS), co pozwala badaczom dostosować pożywkę do wymagań ich konkretnych linii komórkowych. Aby uzyskać optymalną wydajność, stężenie FBS musi być starannie zoptymalizowane dla każdej linii komórkowej, zapewniając optymalny wzrost i funkcjonalność.
Aby utrzymać fizjologiczne pH, pożywka Ham's F-12K (Kaighn's) wykorzystuje system buforowy wodorowęglanu sodu (2,5 g / l), co wymaga kontrolowanego środowiska 5-10% CO2 podczas hodowli. Zapewnia to, że pH pożywki pozostaje w idealnym zakresie dla wzrostu i żywotności komórek
Kontrola jakości
pH = 7,2 +/
- 0,02 w temperaturze 20-25°C.
Każda partia została przetestowana pod kątem sterylności i nieobecności mykoplazmy i bakterii.
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Zamrażanie i podgrzewanie do temperatury +37°C obniża jakość produktu.
Nie podgrzewać pożywki do temperatury wyższej niż 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła (np. urządzeń mikrofalowych).
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy wyjąć tę ilość z butelki i podgrzać ją w temperaturze pokojowej.
Okres trwałości dla każdej pożywki oprócz pożywki podstawowej wynosi 8 tygodni od daty produkcji.
Skład
Składniki
mg/L
Sole nieorganiczne
Chlorek wapnia x 2H2O
135,24
Siarczan miedzi(II) x 5H2O
0,00
Siarczan żelaza(II) x 7H2O
0,83
Chlorek magnezu x 6H2O
105,72
Siarczan magnezu x 7H2O
394,49
Chlorek potasu
283,29
Diwodorofosforan potasu
58,52
Chlorek sodu
7597,20
wodorofosforan dwusodowybezwodny
115,02
Siarczan cynku x 7H2O
0,14
Inne składniki
D(+)-glukoza bezwodna
1260,00
Hipoksantyna
4,08
Kwas DL-α-liponowy
0,21
Czerwień fenolowa
3,00
Putrescyna x 2HCl
0,32
Pirogronian sodu
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidyna
0,73
Aminokwasy
L-alanina
17,82
L-arginina x HCl
421,40
L-asparagina x H2O
30,02
Kwas L-asparaginowy
26,62
L-cysteina x HCl x H2O
70,24
L-glutamina
292,20
Kwas L-glutaminowy
29,42
Glicyna
15,01
L-histydyna x HCl x H2O
41,92
L-Izoleucyna
7,87
L-Leucyna
26,24
L-Lizyna x HCl
73,04
L-metionina
8,95
L-fenyloalanina
9,91
L-prolina
69,06
L-seryna
21,02
L-treonina
23,82
L-tryptofan
4,08
L-tyrozyna
10,87
L-walina
23,42
Witaminy
D(+)-biotyna
0,07
D-pantotenian wapnia
0,48
Chlorek choliny
13,96
Kwas foliowy
1,32
mio-inozytol
18,02
Nikotynamid
0,04
Pirydoksyna x HCl
0,06
Ryboflawina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Witamina B12
1,36
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS) jest szeroko stosowanym roztworem buforowym w badaniach biologicznych i chemicznych. Odgrywa kluczową rolę w utrzymywaniu równowagi pH i osmolarności podczas różnych procedur eksperymentalnych, w tym przetwarzania tkanek i hodowli komórkowej. Nasz roztwór PBS jest starannie opracowany ze składników o wysokiej czystości, aby zapewnić stabilność i niezawodność w każdym eksperymencie. Osmolarność i stężenia jonów naszego PBS ściśle naśladują te występujące w ludzkim organizmie, dzięki czemu jest on izotoniczny i nietoksyczny dla większości komórek.
Skład naszego roztworu PBS
Nasz roztwór PBS to dostosowana pod względem pH mieszanka ultraczystych buforów fosforanowych i roztworów soli fizjologicznej. W stężeniu roboczym 1X zawiera:
8000 mg/l chlorku sodu (NaCl)
200 mg/l chlorku potasu (KCl)
1150 mg/L Bezwodny dwuzasadowy fosforan sodu (Na2HPO4)
200 mg/L Fosforan potasu jednozasadowy bezwodny (KH2PO4)
Taki skład zapewnia optymalne pH i równowagę jonową, odpowiednie do szerokiego zakresu zastosowań biologicznych.
Zastosowania naszego roztworu PBS
Nasz roztwór PBS jest idealny do różnych zastosowań w badaniach biologicznych. Jego izotoniczne i nietoksyczne właściwości sprawiają, że nadaje się do rozcieńczania substancji i płukania pojemników z komórkami. Roztwory PBS zawierające EDTA są skuteczne w odłączaniu przyczepionych i zbrylonych komórek. Do PBS nie należy jednak dodawać metali dwuwartościowych, takich jak cynk, ponieważ może to spowodować wytrącanie się osadów. W takich przypadkach zalecane są bufory Good's. Ponadto nasz roztwór PBS jest akceptowalną alternatywą dla wirusowego podłoża transportowego do transportu i przechowywania wirusów RNA, w tym SARS-CoV-2.
Kontrola jakości
Sterylnie filtrowany
Przechowywanie i okres trwałości
Przechowywać w temperaturze od +2°C do +25°C, chronić przed światłem.
Po otwarciu przechowywać w temperaturze od 2°C do 25°C i zużyć w ciągu 24 miesięcy.
Warunki wysyłki
Temperatura otoczenia
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Unikać zamrażania i częstego podgrzewania do temperatury +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu.
Nie podgrzewać nośnika powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak urządzenia mikrofalowe.
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy usunąć wymaganą ilość i ogrzać ją do temperatury pokojowej przed użyciem.
Skład
Kategoria
Składniki
Stężenie (mg/L)
Sole
Chlorek potasu
200
Fosforan potasu jednozasadowy bezwodny
200
Chlorek sodu
8000
Bezwodny dwuzasadowy fosforan sodu
1150
Początkowo zaprojektowana w celu wspierania wzrostu ludzkich komórek białaczkowych zarówno w hodowlach zawiesinowych, jak i jednowarstwowych, pożywka RPMI 1640 ewoluowała poprzez modyfikacje dokonywane przez badaczy i dostawców komercyjnych, aby stać się odpowiednią dla różnorodnych komórek ssaków. Jest wyjątkowo kompatybilna z liniami komórkowymi takimi jak HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyty i raki.
RPMI 1640 Medium wyróżnia się na tle innych pożywek do hodowli komórkowych ze względu na swój unikalny skład. Zawiera znaczną ilość fosforanów, aminokwasów i witamin. W szczególności zawiera biotynę, witaminę B12 i PABA, nieobecne w pożywce Eagle's Minimal Essential Medium lub Dulbecco's Modified Eagle Medium. Co więcej, RPMI 1640 Medium wykazuje znacznie podwyższone stężenie witamin inozytolu i choliny. Nie zawiera ona jednak białek, lipidów ani czynników wzrostu. W związku z tym suplementacja 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS) jest zwykle wymagana w celu zapewnienia optymalnych warunków do wzrostu komórek.
System buforowania pożywki RPMI 1640 opiera się na wodorowęglanie sodu i wymaga środowiska 5-10% CO2 w celu utrzymania fizjologicznie odpowiedniego pH. Włączenie środka redukującego glutation dodatkowo odróżnia tę pożywkę od innych.
Kontrola jakości
Sterylnie filtrowane
Przechowywanie i okres trwałości
Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C, chronić przed światłem.
Po otwarciu przechowywać w temperaturze 4°C i zużyć w ciągu 6-8 tygodni.
Warunki wysyłki
Temperatura otoczenia
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Unikać zamrażania i częstego podgrzewania do temperatury +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu.
Nie podgrzewać nośnika powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak urządzenia mikrofalowe.
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy usunąć wymaganą ilość i ogrzać ją do temperatury pokojowej przed użyciem.
Skład
Kategoria
Składniki
Stężenie (mg/L)
Aminokwasy
Glicyna
10.00
L-alanylo-L-glutamina
434.40
L-Arginina
200.00
L-asparaginaH2O
56.82
Kwas L-asparaginowy
20.00
L-cysteina 2HCl
65.20
Kwas L-glutaminowy
20.00
L-histydyna HClH2O
20.27
L-hydroksy-L-prolina
20.00
L-Izoleucyna
50.00
L-Leucyna
50.00
L-Lizyna HCl
40.00
L-metionina
15.00
L-fenyloalanina
15.00
L-prolina
20.00
L-seryna
30.00
L-treonina
20.00
L-tryptofan
5.00
L-tyrozyna 2Na 2H2O
28.83
L-walina
20.00
Witaminy
kwas p-aminobenzoesowy
1.00
D-biotyna
0.20
Chlorek choliny
3.00
Pantotenian D-wapnia
0.25
Kwas foliowy
1.00
mio-inozytol
35.00
Nikotynamid
1.00
Chlorowodorek pirydoksyny
1.00
Ryboflawina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Witamina B12
0.005
Sole nieorganiczne
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Inne składniki
D-glukoza
2000.00
Zredukowany L-glutation
1.00
Sól sodowa czerwieni fenolowej
5.30
Ten unikalny preparat łączy w sobie Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) i Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) w precyzyjnym stosunku 1:1. Dodatek L-glutaminy dodatkowo wzmacnia jej skład.
DMEM, pochodzący z Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), oferuje zwiększone stężenie aminokwasów i witamin w porównaniu do swojego poprzednika. Z kolei Ham's F-12 bazuje na pożywce Ham's F-10, zapewniając komplementarny zestaw niezbędnych składników.
Aby wspierać optymalny wzrost komórek, powszechną praktyką jest uzupełnianie DMEM:Ham's F12 o FBS w typowym stężeniu 5-10%. Dodatek ten jest konieczny, ponieważ w pożywce brakuje hormonów wzrostu, lipidów i białek kluczowych dla rozwoju komórek.
DMEM:Ham's F12 zawiera system buforowania pH i jest często uzupełniany czerwienią fenolową, wskaźnikiem pH. Komórki hodowane w DMEM:Ham's F12 lub jakiejkolwiek innej pożywce wykorzystującej system buforu wodorowęglanowego wymagają kontrolowanego środowiska CO2 na poziomie 5-10% w celu utrzymania odpowiedniego poziomu pH.
Kontrola jakości
Sterylnie filtrowany
Przechowywanie i okres trwałości
Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C, chronić przed światłem.
Po otwarciu przechowywać w temperaturze 4°C i zużyć w ciągu 6-8 tygodni.
Warunki wysyłki
Temperatura otoczenia
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Unikać zamrażania i częstego podgrzewania do temperatury +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu.
Nie podgrzewać nośnika powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak urządzenia mikrofalowe.
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy usunąć wymaganą ilość i ogrzać ją do temperatury pokojowej przed użyciem.
Skład
Kategoria
Składniki
Stężenie (mg/L)
Aminokwasy
Glicyna
18.75
L-alanina
4.45
L-arginina HCl
147.50
L-asparagina H₂O
7.50
Kwas L-asparaginowy
6.65
L-cysteina HCl H₂O
17.56
L-cysteina 2 HCl
31.29
Kwas L-glutaminowy
7.35
L-glutamina
365.00
L-histydyna HCl H₂O
31.48
L-Izoleucyna
54.47
L-leucyna
59.05
L-lizyna HCl
91.25
L-metionina
17.24
L-fenyloalanina
35.48
L-prolina
17.25
L-seryna
26.25
L-treonina
53.45
L-tryptofan
9.02
Sól disodowa L-tyrozyny
48.10
L-walina
52.85
Witaminy
D-biotyna
0.0035
Chlorek choliny
8.98
Pantotenian D-wapnia
2.24
Kwas foliowy
2.66
mio-inozytol
12.60
Nikotynamid
2.02
Chlorowodorek pirydoksyny
0.031
Chlorowodorek pirydoksalu
2.00
Ryboflawina
0.219
Chlorowodorek tiaminy
2.17
Witamina B12
0.68
Sole nieorganiczne
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Inne składniki
D-glukoza
3151.00
Hipoksantyna
2.40
HEPES
3574.50
Kwas linolowy
0.042
Kwas liponowy
0.105
Sól sodowa czerwieni fenolowej
8.63
Putrescyna 2 HCl
0.081
Pirogronian sodu
55.00
Tymidyna
0.365
- 0,02 w temperaturze 20-25°C. Każda partia została przetestowana pod kątem sterylności oraz braku mykoplazmy i bakterii. Przechowywanie Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C, w ciemnym miejscu. Zamrażanie i ogrzewanie do temperatury +37°C obniża jakość produktu. Nie należy podgrzewać pożywki do temperatury powyżej 37°C ani stosować niekontrolowanych źródeł ciepła (np. kuchenek mikrofalowych). Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy wyjąć tę ilość z butelki i ogrzać ją w temperaturze pokojowej. Okres przydatności do użycia dla wszystkich pożywek z wyjątkiem pożywki podstawowej wynosi od 6 do 8 tygodni od daty otwarcia. Skład Składniki mg/l Sole nieorganiczneChlorek wapnia x 2H2O132,00 Siarczan magnezu97,67 Chlorek potasu400,00 Chlorek sodu6460 Wodorofosforan disodowy (bezwodny)504,00 Inne składnikiD(+)-glukoza (bezwodna)3000 Glutation (zredukowany)0,5 Pepton mięsny600,00 Sól sodowa fenoloftaleiny11 AminokwasyL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H2O45,03 Kwas L-asparaginowy19,97 L-cysteina x HCl x H2O31,75 L-glutamina (stabilna)219,15 Kwas L-glutaminowy22,07 Glicyna7,51 L-histydyna x HCl x H2O20,96 L-hydroksyprolina19,67 L-izoleucyna39,36 L-leucyna39,36 L-lizyna x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenyloalanina16,52 L-prolina17,27 L-seryna26,28 L-treonina17,87 L-tryptofan3,06 Sól disodowa L-tyrozyny26,10 L-walina17,57 WitaminyKwas p-aminobenzoesowy1,0 Kwas askorbinowy0,56 D(+)-biotyna0,20 D-pantotenian wapnia0,2 Chlorek choliny5,0 Kwas foliowy10 Mio-inozytol36,00 Nikotynamid0,5 Kwas nikotynowy0,5 Chlorowodorek pirydoksalu0,50 Chlorowodorek pirydoksyny0,50 Ryboflawina0,2 Chlorowodorek tiaminy0,2 Witamina B122,00
Medium 199 oferuje szereg zastosowań w tej dziedzinie. Może skutecznie utrzymywać kompleks cumulus-oocyt (COC) i wspierać dojrzewanie oocytów in vitro. Dodatkowo jest on stosowany do płukania linii aspiracyjnych podczas pobierania komórek jajowych od niemieckich krów rasy Holstein. Co więcej, Medium 199 służy jako doskonała pożywka do hodowli komórek śródbłonka serca pochodzących od szczurów. Zastosowania te pokazują wszechstronność i zdolność adaptacji Medium 199 do różnych potrzeb eksperymentalnych.
Historia
Opracowanie Medium 199 w latach 50-tych XX wieku stanowiło znaczący postęp w dziedzinie pożywek do hodowli tkankowych. Przed jej wprowadzeniem wiele podłoży hodowlanych opierało się na produktach pochodzenia zwierzęcego i ekstraktach tkankowych. Jednak Morgan i współpracownicy zrewolucjonizowali tę dziedzinę, opracowując całkowicie zdefiniowane źródło składników odżywczych dla hodowli komórkowych. Dzięki eksperymentom obejmującym różne kombinacje witamin, aminokwasów i innych czynników, odkryli oni wyjątkowe właściwości Medium 199 stymulujące wzrost.
Kontrola jakości
pH = 7,2 +/
- 0,02 w temperaturze 20-25°C.
Każda partia została przetestowana pod kątem sterylności i nieobecności mykoplazmy i bakterii.
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Zamrażanie i podgrzewanie do temperatury +37°C obniża jakość produktu.
Nie podgrzewać pożywki do temperatury wyższej niż 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła (np. urządzeń mikrofalowych).
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy wyjąć tę ilość z butelki i ogrzać ją w temperaturze pokojowej.
Okres trwałości dla każdej pożywki z wyjątkiem pożywki podstawowej wynosi 8 tygodni od daty produkcji.
Skład
Składniki
mg/L
Sole nieorganiczne
Chlorek wapnia x 2H2O
264,92
Azotan żelaza (III) x 9H2O
0,72
Siarczan magnezu
97,67
Chlorek potasu
400,00
Octan sodu x 3H2O
82,95
Chlorek sodu
6,800.00
Diwodorofosforan sodu x H2O
140,00
Inne składniki
Siarczan adeniny
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholesterol
0,20
2'-deoksyryboza
0,50
D(+)-glukoza bezwodna
1,000.00
Glutation (czerwony)
0,05
Guanina x HCl
0,30
Hipoksantyna
0,30
Czerwony fenol
10,00
D-ryboza
0,50
Tymina
0,30
Tween 80
4,90
Uracyl
0,30
Ksantyna
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminokwasy
L-Alanina
25,00
L-arginina x HCl
70,00
Kwas L-asparaginowy
30,00
L-cysteina x HCl x H2O
0,10
L-cysteina
20,00
L-glutamina stabilna
149,00
Kwas L-glutaminowy
67,00
Glicyna
50,00
L-histydyna x HCl x H2O
21,88
L-hydroksyprolina
10,00
L-Izoleucyna
20,00
L-Leucyna
60,00
L-Lizyna x HCl
70,00
L-metionina
15,00
L-fenyloalanina
25,00
L-prolina
40,00
L-seryna
25,00
L-treonina
30,00
L-tryptofan
10,00
L-tyrozyna
40,00
L-walina
25,00
Witaminy
kwas 4-aminobenzoesowy
0,05
Kwas askorbinowy
0,05
D(+)-biotyna
0,01
Kalcyferol
0,10
D-pantotenian wapnia
0,01
Chlorek choliny
0,50
Kwas foliowy
0,01
mio-inozytol
0,05
Menadion
0,01
Kwas nikotynowy
0.025
Nikotynamid
0.025
Pirydoksal x HCl
0.025
Pirydoksol x HCl
0.025
Ryboflawina
0,01
Sól disodowa fosforanu DL-α-tokoferolu
0,01
Tiamina x HCl
0,01
Octan witaminy A
0,14
IMDM dobrze nadaje się do szybko proliferujących hodowli komórkowych o dużej gęstości, w tym komórek Jurkat, COS-7 i makrofagów. Różne modyfikacje IMDM dostępne dla szeregu zastosowań w hodowli komórkowej można znaleźć za pomocą narzędzia wyboru mediów. Płynne pożywki dostarczają niezbędnych składników odżywczych do wszystkich zastosowań w hodowli komórkowej. Każda z naszych wysokiej jakości pożywek do hodowli komórkowych jest produkowana zgodnie z pierwotnie opublikowaną formułą lub modyfikacjami niezbędnymi do zapewnienia stałej wydajności i stabilności pożywki.
IMDM vs. DMEM
IMDM zawiera azotan potasu zamiast azotanu żelaza oraz HEPES i pirogronian sodu. Dodatkowe składniki IMDM sprawiają, że jest ona bardziej odpowiednia dla wyspecjalizowanych typów komórek i specyficznych zastosowań niż DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM i RPMI mają różne formuły, które mogą być istotne dla stymulacji PMA/jonomycyną. Jedną z istotnych różnic jest stężenie Ca2+. Podczas gdy RPMI zawiera 0,42 mM Ca2+, IMDM zawiera 1,49 mM.
Kontrola jakości
pH = 7,2 +/
- 0,02 w temperaturze 20-25°C.
Każda partia została przetestowana pod kątem sterylności i nieobecności mykoplazmy i bakterii.
Konserwacja
Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Zamrażanie i podgrzewanie do temperatury +37°C obniża jakość produktu.
Nie podgrzewać pożywki do temperatury wyższej niż 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła (np. urządzeń mikrofalowych).
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy wyjąć tę ilość z butelki i ogrzać ją w temperaturze pokojowej.
Okres trwałości dla każdej pożywki z wyjątkiem pożywki podstawowej wynosi 8 tygodni od daty produkcji.
Skład
Składniki
mg/L
Sole nieorganiczne
Chlorek wapnia x 2 H2O
219,00
Chlorek potasu
330,00
Azotan potasu
0.076
Bezwodny siarczan magnezu
97,73
Chlorek sodu
4,505.00
Diwodorofosforan sodu bezwodny
109,00
Selenin sodu
0,02
Inne składniki
D(+)-glukoza bezwodna
4,500.00
HEPES
5,958.00
Pirogronian sodu
110,00
Czerwień fenolowa
15,00
Aminokwasy
L-alanina
25,00
L-arginina x HCl
84,00
L-asparagina x H2O
25,00
Kwas L-asparaginowy
30,00
L-cysteina x 2HCl
91,24
L-glutamina
584,00
Kwas L-glutaminowy
75,00
Glicyna
30,00
L-histydyna x HCl x H2O
42,00
L-Izoleucyna
104,80
L-Leucyna
104,80
L-Lizyna x HCl
146,20
L-metionina
30,00
L-fenyloalanina
66,00
L-prolina
40,00
L-seryna
42,00
L-treonina
95,20
L-tryptofan
16,00
L-tyrozyna x 2Na
104,20
L-walina
93,60
Witaminy
D(+)-biotyna
0.013
D-pantotenian wapnia
4,00
Chlorek choliny
4,00
Kwas foliowy
4,00
mio-inozytol
7,20
Podłoża do hodowli komórkowych: Przegląd
W dziedzinie nauk przyrodniczych jedną z najważniejszych metod jest hodowla komórkowa. Usunięcie komórek, tkanek lub narządów ze zwierzęcia lub rośliny, a następnie wszczepienie tych komórek, tkanek lub narządów w sztucznym środowisku, które sprzyja ich przetrwaniu i/lub wzrostowi, jest tym, co rozumie się przez wyrażenie "hodowla komórkowa" Podstawowe potrzeby środowiskowe dla optymalnego rozwoju komórek to kontrolowana temperatura, podłoże do mocowania komórek, odpowiednia pożywka wzrostowa i inkubator, który utrzymuje optymalne pH i osmolalność. Komórki muszą mieć zapewnione te warunki, aby mogły w pełni rozwinąć swój potencjał.
Wybór odpowiedniej pożywki wzrostowej do hodowli in vitro jest etapem hodowli komórkowej, który jest zarówno najbardziej krytyczny, jak i najważniejszy. Pożywka wzrostowa, znana również jako podłoże hodowlane, to płyn lub żel opracowany w celu stymulowania rozwoju organizmów w skali mikroskopowej, komórkowej lub roślinnej. Podłoże stosowane do hodowli komórek często zawiera odpowiednią ilość energii i substancji kontrolujących cykl komórkowy. Głównymi składnikami pożywki są aminokwasy, witaminy, sole nieorganiczne, glukoza i surowica. Surowica jest dodawana do pożywki, ponieważ działa jako źródło czynników wzrostu, hormonów i czynników przywiązania. Oprócz dostarczania składników odżywczych, pożywka przyczynia się również do utrzymania poziomów pH i osmolalności.
Rodzaje pożywek stosowanych w hodowli komórkowej
Zarówno komórki ludzkie, jak i zwierzęce mogą być hodowane w sztucznej lub syntetycznej pożywce lub w całkowicie naturalnej pożywce uzupełnionej naturalnymi pierwiastkami. Poniżej przedstawiamy przegląd różnych obecnie dostępnych rodzajów pożywek.
Pożywki naturalne
W pożywkach naturalnych mogą znajdować się wyłącznie płyny biologiczne występujące w stanie naturalnym. Naturalne pożywki są bardzo pomocne i łatwe w hodowli szerokiej gamy typów komórek zwierzęcych. Brak zrozumienia dokładnych składników, które składają się na pożywki naturalne, jest głównym czynnikiem przyczyniającym się do niskiej powtarzalności wyników uzyskanych przy użyciu pożywek naturalnych.
Pożywki sztuczne
Przygotowanie sztucznych lub syntetycznych pożywek obejmuje dodanie składników odżywczych (zarówno organicznych, jak i nieorganicznych), białek surowicy, węglowodanów, kofaktorów, witamin i soli, a także faz gazowych O2 i CO2 [1].
Różne rodzaje sztucznych pożywek zostały opracowane w celu spełnienia jednej lub więcej z poniższych funkcji: 1) Natychmiastowe przeżycie (zrównoważony roztwór soli o precyzyjnym pH i ciśnieniu osmotycznym). 2) Długotrwałe przeżycie (zrównoważony roztwór soli uzupełniony różnymi formułami organicznych substancji chemicznych i/lub surowicy). 3) Nieokreślony rozwój. 4) Specjalistyczne funkcje.
Istnieją cztery różne klasyfikacje sztucznych pożywek:
Pożywki zawierające surowicę
Najczęstszym rodzajem suplementu znajdującym się w pożywce stosowanej do hodowli komórek zwierzęcych jest płodowa surowica bydlęca. Jest ona dodawana do pożywki hodowlanej jako niedrogi suplement w celu osiągnięcia najlepszych możliwych warunków wzrostu. Oprócz działania jako transporter lub chelator dla składników odżywczych, które są niestabilne lub nierozpuszczalne w wodzie, hormonów i czynników wzrostu, inhibitorów proteaz i innych substancji, surowica wiąże i neutralizuje szkodliwe cząsteczki.
Pożywki bez surowicy
Obecność surowicy w pożywce ma wiele wad i może powodować poważne błędy w interpretacji w badaniach immunologicznych [2, 3]. Stworzono wiele różnych pożywek bez surowicy [4, 5]. Pożywki te są zazwyczaj specjalnie opracowane w celu wspierania hodowli pojedynczego typu komórek, takich jak Knockout Serum Replacement i Knockout DMEM firmy Thermo Fisher Scientific oraz pożywka mTESR firmy Stem Cell Technologies [6] dla komórek macierzystych [7].
Dodatkowo, pożywki te zawierają określone ilości oczyszczonych czynników wzrostu, lipoprotein i innych białek, które są zwykle dostarczane przez surowicę [8]. Pożywki te są często określane jako "zdefiniowane pożywki kulturowe", ponieważ ich składniki są dobrze znane.
Pożywki zdefiniowane chemicznie
Pożywki te zawierają ultraczyste składniki nieorganiczne i organiczne, które nie zostały skażone żadnymi zanieczyszczeniami. Mogą one również zawierać czyste dodatki białkowe, takie jak czynniki wzrostu.
modyfikacja genetyczna bakterii lub drożdży, wraz z dodatkiem określonych kwasów tłuszczowych, witamin, cholesterolu i aminokwasów, skutkuje produkcją ich części składowych [9].
Pożywki bezbiałkowe
Pożywki bezbiałkowe to takie, które w ogóle nie zawierają białka, a zamiast tego zawierają jedynie elementy niebiałkowe. W porównaniu do pożywek z dodatkiem surowicy, stosowanie pożywek bez dodatku białka sprzyja większej proliferacji komórek i ekspresji białek oraz ułatwia oczyszczanie wszelkich produktów wytworzonych w dalszym procesie [10-12]. Białko nie jest zawarte w preparatach takich jak MEM i RPMI-1640. Jednakże, suplement białkowy może być podawany, jeśli jest to konieczne.
Podłoże hodowlane i jego podstawowe składniki
Komercyjne pożywki hodowlane mogą być kupowane w postaci proszku lub płynu i często zawierają różne składniki odżywcze, takie jak aminokwasy, glukoza, sole, witaminy i inne suplementy diety.
Zapotrzebowanie na te składniki jest różne dla każdej linii komórkowej, a te różnice są odpowiedzialne za dużą liczbę różnych formuł pożywek. Każdy składnik jest odpowiedzialny za określoną funkcję, która zostanie opisana w kolejnych akapitach:
Systemy buforujące
Aby utrzymać optymalne warunki wzrostu, należy kontrolować pH, co często odbywa się za pomocą jednego z dwóch systemów buforujących:
Naturalny system buforowania
Stosunek CO2/H2CO3 w atmosferze jest równy stosunkowi w podłożu, tworząc naturalny mechanizm buforujący. Aby zachować naturalny mechanizm buforujący, kultury muszą być przechowywane w środowisku powietrza z 5-10% CO2, co często osiąga się za pomocą inkubatora CO2. Jedną z największych zalet stosowania naturalnych buforów jest ich taniość i bezpieczeństwo.
HEPES
Buforowanie chemiczne przy użyciu zwitterionu HEPES ma większą zdolność buforowania w zakresie pH 7,2-7,4 i nie wymaga regulowanego środowiska gazowego. W przypadku określonych typów komórek większa dawka HEPES może być szkodliwa. Pożywki zawierające HEPES są również znacznie bardziej podatne na fototoksyczne działanie światła fluorescencyjnego [13].
Czerwień fenolowa
Wskaźnik pH w postaci czerwieni fenolowej jest często zawarty w dostępnych na rynku pożywkach hodowlanych, umożliwiając ciągłe monitorowanie pH. Poprzez ekspansję komórek, metabolity wytwarzane przez te komórki powodują zmianę pH, a tym samym zmianę koloru pożywki. Czerwień fenolowa ma podwójny wpływ na kolor pożywki, zmieniając ją na żółtą przy kwaśnym pH i fioletową przy zasadowym pH. pH 7,4, optymalna wartość dla hodowli komórkowej, powoduje, że pożywka wydaje się fluorescencyjna na czerwono.
Czerwień fenolowa ma jednak kilka wad: Po pierwsze, czerwień fenolowa jest w stanie symulować działanie wielu hormonów steroidowych, głównie estrogenu [14]. Dlatego podczas badania komórek wrażliwych na estrogeny, takich jak tkanka piersi, zaleca się stosowanie pożywki wolnej od czerwieni fenolowej. Równowaga sodowo-potasowa jest zakłócana przez obecność czerwieni fenolowej w kilku preparatach bez surowicy. Dodanie surowicy lub hormonu przysadki bydlęcej do pożywki może przeciwdziałać temu efektowi [15]. Po trzecie, wykrywanie w eksperymentach cytometrii przepływowej jest utrudnione przez obecność czerwieni fenolowej.
Sole nieorganiczne
Pożywki zawierające sole nieorganiczne, takie jak jony sodu, potasu i wapnia, pomagają utrzymać równowagę osmotyczną i regulują potencjał błonowy.
Aminokwasy
Ponieważ aminokwasy są podstawowymi składnikami białek, są one niezbędnym składnikiem każdego pojedynczego podłoża do wzrostu komórek, jakie kiedykolwiek wymyślono. Ponieważ komórki nie są w stanie samodzielnie wytwarzać niektórych aminokwasów, ważne jest, aby podłoże hodowlane zawierało niezbędne aminokwasy. Są one niezbędne do proliferacji komórek, a ich stężenie określa maksymalną gęstość komórek, jaką można osiągnąć. Szczególnie istotna jest L-glutamina, niezbędny aminokwas.
L-glutamina funkcjonuje jako wtórne źródło energii dla metabolizmu i przyczynia się do produkcji azotu NAD, NADPH i nukleotydów. Ze względu na fakt, że L-glutamina jest niestabilnym aminokwasem, który z czasem zmienia się w formę, której komórki nie są w stanie wykorzystać, musi być podawana do pożywki.
Ponadto, nieistotne aminokwasy mogą być dostarczane do pożywki w celu uzupełnienia tych, które zostały zużyte podczas procesu wzrostu. Wzrost komórek jest przyspieszony, a ich żywotność zwiększona, gdy pożywka wzrostowa jest uzupełniona o aminokwasy nieistotne.
Węglowodany
Węglowodany w postaci cukrów są głównym źródłem energii. Wiele pożywek zawiera również maltozę i fruktozę oprócz bardziej powszechnych cukrów glukozy i galaktozy.
Białka i peptydy
Albumina, transferyna i fibronektyna są najczęściej stosowanymi białkami i peptydami. Są one szczególnie istotne w pożywkach, które nie zawierają surowicy. Albumina, transferyna, aprotynina, fetuina i fibronektyna to niektóre z białek, które można znaleźć w surowicy, która jest bogatym źródłem białka.
Albumina jest podstawowym białkiem występującym we krwi, a jej funkcją jest wiązanie i transportowanie różnych substancji, w tym wody, soli, wolnych kwasów tłuszczowych, hormonów i witamin, między różnymi narządami i komórkami. Zdolność albuminy do przyłączania się do substancji chemicznych sprawia, że jest ona skutecznym kandydatem do usuwania szkodliwych związków z pożywki, w której hodowane są komórki.
Aprotynina jest środkiem ochronnym w systemach hodowli komórkowych, ponieważ jest stabilna w neutralnym i kwaśnym pH, a także odporna na wysokie temperatury i zniszczenia, które mogą być spowodowane przez enzymy proteolityczne. Jest zdolna do hamowania wielu proteaz serynowych, w tym między innymi trypsyny.
Fetuina jest glikoproteiną, którą można wykryć w większych ilościach w surowicy płodów i noworodków w porównaniu z surowicą dorosłych. Ponadto działa ona jako inhibitor proteazy serynowej. Białko fibronektyna jest niezbędnym składnikiem w procesie adhezji komórek. Transferyna to białko, które transportuje żelazo i jest odpowiedzialne za dostarczanie żelaza do błon komórkowych.
Kwasy tłuszczowe i lipidy
Odgrywają kluczową rolę w pożywce bez surowicy, gdy surowica jest nieobecna.
Witaminy
Liczne witaminy są niezbędne do rozwoju i proliferacji komórek. Witaminy nie mogą być wytwarzane w odpowiednich ilościach przez komórki i dlatego są niezbędne w hodowli tkankowej jako suplementy diety.
W hodowli komórkowej podstawowym źródłem witamin jest surowica, jednak pożywki są również poddawane działaniu różnych witamin w celu dostosowania ich do określonego typu komórek. Najczęściej witaminy z grupy B są wykorzystywane do stymulacji wzrostu.
Pierwiastki śladowe
Pierwiastki chemiczne, takie jak miedź, cynk, selen i półprodukty kwasów trikarboksylowych, są znane jako pierwiastki śladowe. Pierwiastki śladowe są często dodawane do pożywek, które nie zawierają surowicy, w celu zastąpienia tych, które są zwykle obecne w surowicy. Pierwiastki te są ważnymi składnikami chemicznymi, które są wymagane do zdrowego rozwoju komórek. Wiele reakcji biochemicznych zależy od pewnych mikroelementów, takich jak aktywność enzymów.
Suplementy pożywki
Pełna pożywka wzrostowa sugerowana dla niektórych linii komórkowych wymaga dodatkowych składników, które są nieobecne w pożywce podstawowej i surowicy. Te suplementy diety wspierają wzrost komórek i odpowiednie funkcje metaboliczne.
Chociaż hormony, czynniki wzrostu i cząsteczki sygnalizacyjne są niezbędne do odpowiedniej proliferacji poszczególnych linii komórkowych, zawsze należy podjąć następujące środki ostrożności: Ponieważ dodanie suplementów może zmienić osmolalność całej pożywki wzrostowej, co może hamować rozwój komórek, zawsze zaleca się sprawdzenie osmolalności po dodaniu suplementów. Dla większości linii komórkowych optymalna osmolalność wynosi od 260 do 320 mOSM/kg.
Antybiotyki
Antybiotyki są często stosowane w celu zahamowania rozwoju zanieczyszczeń bakteryjnych i grzybiczych [16], chociaż nie są one niezbędne do wzrostu komórek. Ponieważ antybiotyki mogą ukrywać zanieczyszczenie mykoplazmą i opornymi bakteriami, nie zaleca się ich rutynowego stosowania w hodowli komórkowej [17, 18].
Ponadto antybiotyki mogą zaburzać metabolizm komórek nadwrażliwych. Często stosowane są kombinacje penicyliny i streptomycyny produkowane przez MilliporeSigma i Life Technologies. Plazmocyna została wykorzystana w hodowli linii komórkowych glejaka TS603, TS516 i BT260 [19] i wykazano, że jest skuteczna w usuwaniu skażenia mykoplazmą (20).
Surowica
Albuminy, czynniki wzrostu i inhibitory wzrostu są obecne w surowicy. Surowica jest jednym z najważniejszych składników pożywki do hodowli komórkowych, ponieważ dostarcza aminokwasów, białek, witamin (zwłaszcza witamin rozpuszczalnych w tłuszczach, takich jak A, D, E i K), węglowodanów, lipidów, hormonów, czynników wzrostu, minerałów i pierwiastków śladowych.
Surowica płodowa i cielęca jest często wykorzystywana do promowania rozwoju hodowanych komórek. Surowica płodowa jest bogatym źródłem czynników wzrostu i jest odpowiednia do klonowania komórek i rozwoju wrażliwych komórek. Ze względu na zmniejszone możliwości stymulowania wzrostu, surowica cielęca jest stosowana w eksperymentach z inhibicją kontaktową. Normalne pożywki wzrostowe często zawierają od 2% do 10% surowicy. Dodanie surowicy do podłoża hodowlanego służy następującym celom [21]:
-
Surowica dostarcza niezbędnych składników odżywczych dla komórek (zarówno w roztworze, jak i przyłączonych do białek).
-
Kilka czynników wzrostu i hormonów zaangażowanych w promocję wzrostu i wyspecjalizowaną aktywność komórek jest zawartych w surowicy.
-
Zawiera wiele białek wiążących, takich jak albumina i transferyna, które transportują inne substancje chemiczne do komórki. Na przykład albumina dostarcza do komórek tłuszcze, witaminy, hormony itp.
-
Dostarcza również białek, takich jak fibronektyna, które zwiększają przyczepność komórek do podłoża. Dodatkowo wytwarza elementy rozprzestrzeniające, które pomagają w ekspansji komórek przed podziałem.
-
Dostarcza inhibitorów proteazy, które zapobiegają proteolizie w komórkach.
-
Zawiera również minerały, takie jak Na+, K+, Zn2+ i Fe2+.
-
Zwiększa lepkość pożywki, chroniąc komórki przed urazami mechanicznymi podczas mieszania hodowli zawiesinowej.
-
Jest również buforem.
Odniesienia
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Odżywianie komórek zwierzęcych w hodowli tkankowej; wstępne badania nad pożywką syntetyczną. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Szybka adsorpcja składnika płodowej surowicy cielęcej przez komórki ssaków w hodowli. Potencjalne źródło artefaktów w badaniach surowic odpornościowych na antygeny specyficzne dla komórek. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Dodanie surowicy do pożywki stosowanej do przygotowania zawiesin komórkowych jako możliwe źródło artefaktów w reakcjach komórkowych badanych za pomocą testu podkolanowego węzła chłonnego. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercyjne pożywki bez surowicy: wzrost hybrydomy i produkcja przeciwciał monoklonalnych. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Methods for growth of cultured cells in serum-free medium. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNA-free TDP-43 into anisotropic intranuclear liquid spherical shells. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Senescencja wywołana syndromem down-syndrome zaburza architekturę jądrową progenitorów neuronalnych. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Całkowite zastąpienie surowicy albuminą, transferyną i lipidem sojowym w hodowlach limfocytów B reagujących na lipopolisacharyd. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematyczne ulepszanie chemicznie zdefiniowanej pożywki bezbiałkowej do wzrostu hybrydoma i produkcji przeciwciał monoklonalnych. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. A protein-free medium for the growth of hybridoma and other cells of the immune system. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serum-free cell culture: a unifying approach. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Clonal growth of chinese hamster cell lines in protein-free media. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Czerwień fenolowa w pożywkach do hodowli tkankowych jest słabym estrogenem: implikacje dotyczące badania komórek reagujących na estrogeny w hodowli. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Rozwój pożywek bez surowicy. In: Master JRW, editor. Animal Cell Culture, 3rd ed. Oxford:Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Stosowanie antybiotyków w pożywkach do hodowli komórkowych. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Spread and control of mycoplasmal infection of cell cultures. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Changing medium and passaging cell lines. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Demetylaza histonowa KDM6A bezpośrednio wyczuwa tlen w celu kontrolowania chromatyny i losu komórek. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53