SiHa-cellen - Licht werpen op onderzoek naar baarmoederhalskanker
SiHa cellen zijn baarmoederhalskankercellen die veel gebruikt worden in biomedisch onderzoek. Het zijn geweldige transfectiegastheren en dus geschikt voor genexpressiestudies. Vanwege hun menselijke oorsprong en de relevantie voor baarmoederhalskanker worden deze cellen voornamelijk gebruikt in kankerbiologie, virologie en onderzoeken naar de ontwikkeling van geneesmiddelen.
Algemene kenmerken en oorsprong van SiHa cellen
Inzicht in de oorsprong en algemene eigenschappen van een cellijn is cruciaal, omdat dit van invloed is op het gebruik ervan binnen je onderzoek. In dit artikel komt u meer te weten over de oorsprong van de SiHa cellijn, onderscheidende kenmerken en nog veel meer: Wat is de SiHa kankercellijn? Wat zijn SiHa cellen HPV? Wat is de oorsprong van de SiHa cellijn? Wat is de morfologie van SiHa?
- SiHa, de cervixcarcinoom cellijn is afgeleid van fragmenten van een primair uterusbiopt van een Aziatische vrouw (55 jaar) met plaveiselcelkanker [1].
- De SiHa cellijn vertoont een hypertriploïd karyotype. De meeste cellen hebben een gemiddeld chromosoomnummer tussen 69 en 72. Ongeveer 24% van de cellen heeft echter een modaal chromosoomnummer van 71.
- SiHa cellen zijn humaan papillomavirus 16 positief. Ze vertonen integratie van ongeveer 1 tot 2 kopieën van het HPV-genoom per cel [2].
- Deze baarmoederhalskankercellen vertonen een epitheliale morfologie.
SiHa cellijn: Informatie over kweken
Het onderhouden van een cellijnkweek is niet eenvoudig totdat je alle belangrijke punten voor het kweken kent. Dit moet je weten: Wat is de verdubbelingstijd van SiHa? Wat is SiHa celmedia? Hoe kweek je de SiHa cellijn?
Belangrijke punten voor het kweken van SiHa cellen
|
Verdubbelingstijd: |
De verdubbelingstijd voor SiHa cellen is ongeveer 17 uur. |
|
Adherent of in suspensie: |
SiHa is een adherente cellijn. |
|
Subcultiveringsverhouding: |
De subcultivatieverhouding voor SiHa-cellen is 1:2 tot 1:4. Voor passaging, en adherente cellen worden gespoeld met 1x PBS. Accutase-oplossing wordt toegevoegd en de cellen worden gedurende 8 tot 10 minuten bij omgevingstemperatuur geïncubeerd. Vervolgens wordt cultuurmedia toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd. De celpellet wordt geresuspendeerd en de cellen worden in de nieuwe kolf gegoten om gekweekt te worden. |
|
Groeimedium: |
Eagle's minimaal essentiële medium (EMEM) met 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 2,2 g/L NaHCO3 en Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) wordt gebruikt voor de ideale groei van SiHa-cellen. De media wordt 2 tot 3 keer per week vervangen. |
|
Groeicondities: |
SiHa cellen worden onderhouden in een 37°C bevochtigde incubator met 5% CO2 toevoer. |
|
Opslag: |
De bevroren SiHa cellen van de baarmoederhalskanker cellijn flacons worden opgeslagen bij een temperatuur onder -150°C in een elektrische vriezer of de dampfase van vloeibare stikstof voor een langere termijn. |
|
Invriesproces en -medium: |
CM-1 of CM-ACF invriesmedium wordt gebruikt voor het invriezen van SiHa cellen. De cellen worden ingevroren met een langzame vriesmethode die slechts een daling van 1 °C per minuut toestaat om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen. |
|
Ontdooien Proces: |
Bevroren cellen worden 40 tot 60 seconden in een waterbad van 37 °C gehouden totdat er een klein ijsklontje overblijft. Daarna wordt verse groeimedia toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd om de bestanddelen van de vriesmedia te verwijderen. De celpellet wordt geresuspendeerd en de cellen worden in een kweekkolf gedoseerd om te groeien. |
|
Bioveiligheidsniveau: |
Voor het hanteren en onderhouden van SiHa-celculturen is een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1 vereist. |
Voordelen en nadelen van de SiHa cellijn
Net als andere menselijke carcinoomcellijnen heeft ook SiHa een aantal duidelijke kenmerken die gepaard gaan met bepaalde voor- en nadelen. Hierin hebben we een paar belangrijke besproken.
Voordelen van de SiHa-cellijn voor baarmoederhalskanker
- Baarmoederhalskankermodel
- Afgeleid van cervicaal plaveiselcelcarcinoom.
- Wordt gebruikt om de mechanismen, groei en ontwikkeling van baarmoederhalskanker te bestuderen.
- Brengt de genen p53+ en pRB+ tot expressie die gerelateerd zijn aan DNA-herstel, celcyclusregulatie en tumorsuppressie.
- Tumorigeen potentieel
- SiHa cellen zijn tumorigeen en kunnen slecht gedifferentieerde graad III epidermoïd tumoren induceren in naakte muizen.
- Gebruikt voor in vivo kankeronderzoek en het testen van behandelingen tegen kanker.
Nadelen van SiHa-cellen
- Proliferatie
- SiHa cellen vermenigvuldigen zich snel, wat leidt tot overgroei.
- Moet vaak gepasseerd worden, waardoor het risico op genetische instabiliteit toeneemt, wat het gedrag van de cel na verloop van tijd kan beïnvloeden.
Onderzoekstoepassingen van SiHa cellen
De SiHa cellijn wordt veel gebruikt in onderzoek naar baarmoederhalskanker. Enkele specifieke toepassingen van deze cellijn worden hier besproken.
- Humaan papillomavirus (HPV) gerelateerde studies: SiHa cellen zijn HPV 16 positief en dus waardevolle entiteiten voor het bestuderen van humaan papillomavirusinfectie, de moleculaire mechanismen en de rol ervan in de ontwikkeling en progressie van baarmoederhalskanker. Onderzoekers gebruiken deze cellen ook om virale replicatie, integratie en de invloed ervan op gastheercelprocessen te onderzoeken. In een onderzoek dat in 2020 werd uitgevoerd, werd de SiHa-cellijn gebruikt om de rol van HPV E6/E7 oncoproteïnen in de ontwikkeling van baarmoederhalskanker te onderzoeken door deze te targeten met CRISPR-technologie. Uit de bevindingen bleek dat het uitschakelen van E6/E7-genen groeiremming en apoptose van de SiHa-cel veroorzaakte. Daarom kunnen deze virale genen dienen als cruciale medicijndoelen voor het ontwikkelen van therapieën tegen HPV-geassocieerde baarmoederhalskanker [3].
- Kankerbiologie: SiHa-cellen dienen als een model van onschatbare waarde voor het bestuderen van de biologie van baarmoederhalskanker, waaronder de ontwikkeling, progressie, metastase en invasie van kanker. Onderzoekers gebruiken deze cellen om de genetische mutaties en onderliggende moleculaire routes te onderzoeken die bijdragen aan de ontwikkeling en groei van baarmoederhalskanker. In een studie waarbij SiHa-cellen werden gebruikt, werd bijvoorbeeld ontdekt dat verhoogde SEC61G (SEC61 translocon subunit gamma) de proliferatie van baarmoederhalskankercellen stimuleert door activering van de MAPK-cascade [4].
- Screening en testen van geneesmiddelen: SiHa is een veelgebruikte baarmoederhalskankerlijn om de werkzaamheid van potentiële antikankergeneesmiddelen specifiek voor HPV-geassocieerde baarmoederhalskanker te beoordelen. Onderzoekers onderzoeken het antiproliferatieve, apoptotische en anti-metastatische potentieel van geneesmiddelen met behulp van deze cellen. Zoals een studie uitgevoerd in 2019 waarin het cytotoxische potentieel van Vatica diospyroides Symington Type SS fruitextracten op SiHa baarmoederhalskankercellijn werd onderzocht [5].
SiHa cellen voor uw onderzoek!
Onderzoekspublicaties met SiHa cellen
Enkele belangrijke en vaak geciteerde onderzoekspublicaties hebben betrekking op de SiHa cervicale squameuze carcinoom cellijn.
In deze publicatie in OncoTargets and Therapy (2019) werd voorgesteld dat een natuurlijke verbinding aloë-emodine HPV E6/E7 en glucosemetabolisme-geassocieerde apoptotische effecten uitoefent in SiHa baarmoederhalskankercellen.
Dit artikel werd in 2022 gepubliceerd in het Future Journal of Pharmaceutical Sciences. Deze studie onderzocht de anti-tumoractiviteiten van Excoecaria agallocha (L.) plantenbladextract in de SiHa baarmoederhalskanker cellijn.
Deze studie, gepubliceerd in het Journal of Sol-Gel Science and Technology (2022), stelde dat de 1, 10-fenantroline molecule na koppeling met zinksulfaat nanodeeltjes significante antiproliferatieve effecten uitoefent in SiHa cellen.
Dit onderzoek werd in 2019 gepubliceerd in Oncology Reports. Het onderzoek onthulde dat Astragaloside IV, een natuurproduct, de migratie en invasie van SiHa-cellen onderdrukt door TGF-β1-gemedieerde PI3K- en MAPK-signaleringsroutes te moduleren.
Deze studie in Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) onthulde dat IFI16 (interferon-gamma induceerbaar eiwit 16) het PD-L1-gen reguleert via activering van de STING-TBK1-NF-kB-route om de groei van SiHa baarmoederhalskankercel te bevorderen.
Hulpmiddelen voor SiHa-cellijn: Protocollen, video's en meer
Hier zijn enkele online bronnen met de SiHa cellen.
- SiHa cel transfectie: Dit onderzoeksartikel bevat een protocol voor het onderhouden van SiHa baarmoederhalskankercellen en voor SiHa celtransfectie.
De volgende link bevat informatie over celkweek voor SiHa cellen.
- SiHa cellijn: Deze website bevat veel waardevolle gegevens over de SiHa cellijn. Dit omvat informatie over groeimedia, kweekomstandigheden, protocollen voor het subkweken van SiHa cellen en het hanteren van de proliferatieve en gecryopreserveerde culturen.
FAQs voor SiHa cervixcarcinoomcellen
Referenties
- Melzer, C., J. von der Ohe, and R. Hass, Beknopte review: crosstalk of mesenchymal stroma/stem-like cells with cancer cells provides therapeutic potential. Stamcellen, 2018. 36(7): p. 951-968.
- Ostrowska, K.M., et al., Onderzoek naar de invloed van hoog-risico humaan papillomavirus op de biochemische samenstelling van baarmoederhalskankercellen met behulp van vibratiespectroscopie. Analyst, 2010. 135(12): p. 3087-3093.
- Chen, Y., et al., In vitro en in vivo groeiremming van humane baarmoederhalskankercellen via splitsing van humaan papillomavirus E6/E7-mRNA's door CRISPR/Cas13a-systeem. Antiviraal onderzoek, 2020. 178: p. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G bevordert de proliferatie van baarmoederhalskanker door activering van de MAPK-signaleringsroute. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Anticancer potential of fruit extracts from Vatica diospyroides symington type SS and their effect on program cell death of cervical cancer cell lines. The Scientific World Journal, 2019. 2019.