Jurkat E6.1 cellijn

Jurkat E6.1 is een kloon van de Jurkat cellijn, een geïmmortaliseerde menselijke T-lymfocyten cellijn afkomstig uit perifeer bloed. Ze werd voor het eerst gemaakt in 1977 en wordt gebruikt in onderzoek naar T-celreceptorsignalering, adoptietherapieën voor T-cellen en andere lymfocyten tegen kanker, onderzoek naar bloedgerelateerde proto-oncogenen, celoverleving en celdifferentiatie.

In dit artikel geven we alle informatie en voorwaarden die je moet begrijpen voordat je aan de slag gaat met gekloonde Jurkat E6.1 cellijnen:

Oorsprong, geschiedenis en algemene informatie
Kenmerken van de celkweek
Toepassingen van Jurkat E6.1 cellijnen
Publicaties
Voordelen en beperkingen
Bronnen: Protocollen, video's en meer

1. Oorsprong, geschiedenis en algemene informatie

Hier vindt u alle benodigde informatie over de geschiedenis, oorsprong en algemene kenmerken van de Jurkat E6.1 cellijn en hun behandeling in celkweek.

Jurkat E6.1 is een geïmmortaliseerde menselijke T-lymfocyt cellijn. Deze gekloonde cellijn is een afgeleide van de Jurkat cellijn die in 1976 werd verkregen uit het perifere bloed van een 14-jarige jongen die leed aan acute lymfoblastaire leukemie. Na isolatie uit bloed kreeg deze cellijn aanvankelijk de naam JM, omdat JM en Jurkat aangeven dat deze cellijnen van dezelfde patiënt zijn geïsoleerd. De Jurkat E6.1 cellijn werd gekloond uit cellijnen die bekend staan als Jurkat-FHCRC.
E6.1 cellijnen zijn afgeleid van leukemie; deze cellijnen worden gebruikt om de expressie van IL-2 te verhogen via simulatie met monoklonale antilichamen of lectine. Ze brengen T-cel antigeen receptoren tot expressie; daarom kunnen deze cellijnen worden gebruikt bij het bestuderen van aandoeningen van het immuunsysteem en immuun-oncologisch onderzoek.
Celmorfologie van Jurkat E6.1 cellen: Jurkat E6.1 cellen werden geïsoleerd uit een leukemiepatiënt en hebben een veranderde morfologie in vergelijking met T-Lymfocyten, waardoor ze onsterfelijke cellijnen zijn. De lymfoblastcel ontstaat wanneer naïeve lymfocyten worden geactiveerd door antigeenpresentatie door antigeenpresenterende cellen. Dit resulteert in een verhoogde groei van de kern, het cytoplasma, het mRNA en de eiwitten.
Celgrootte: Jurkat E6.1 cellijnen zijn gekloond geïmmortaliseerd met meestal een diameter variërend van 10-16 μm (de diameter kan variëren afhankelijk van het type suspensie). Deze cellijnen hebben een zeer bolvormige celvorm.
Genoom- en chromosoomnummer: Deze cellijnen zijn pseudodiploïde cellijnen van menselijke T-lymfocyten, met hun modelchromosoom chromosoom 46. Deze laten ook zien dat het modelchromosoom in ongeveer 74% aanwezig is en een polyploïdiegraad van ongeveer 5,3% laat zien. De karyotypestudies toonden een karyotype met 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). X- en Y-chromosomen hebben meestal een reguliere kopie in de meeste cellijnen.
Jurkat cellijnen vs E6.1 Jurkat cellijnen: Jurkat cellijnen zijn de primaire ouder cellijnen die voor het eerst geïsoleerd zijn uit de acute lymfoblastische leukemie patiënt. De E6.1 Jurkat cellijnen zijn echter gekloonde derivaten van Jurkat-FHCRC cellijnen.

T-cellen die kanker bestrijden: CAR T cel immunotherapie.

2. kenmerken celkweek

Belangrijkste punten voor het kweken van B16-cellen

Populatieverdubbelingstijd	De populatieverdubbelingstijd van Jurkat cellijnen is ongeveer 20,7 uur, waardoor een relatief snelle celontwikkeling mogelijk is.
Adherent of niet-adherent	E6.1 Jurkat cellijnen groeien in een niet-adherente modus, bestaande in suspensie, hetzij als eenlaagse groei of als vrij zwevende klonters.
Zaaidichtheid	De aanbevolen zaaidichtheid voor E6.1 Jurkat cellijnen is 1,0-2,0 x 105 levensvatbare cellen/mL om een gezonde hechting en optimale celgroei te garanderen.
Groeimedium	Het benodigde groeimedium voor E6.1 Jurkat cellijnen is ATCC-geformuleerd RPMI-1640 Medium (ATCC 30-2001). Het volledige medium wordt bereid door toevoeging van de gespecificeerde componenten, waaronder foetaal runderserum (ATCC 30-2002), om een eindconcentratie van 10% te bereiken.
Groeicondities	E6.1 Jurkat cellijnen kunnen worden gekweekt in een geschikte incubator met 5% lucht en CO2 beschikbaarheid met behulp van RPMI-1640 medium en foetaal runderserum.
Opslagcondities	Langdurige opslag van Jurkat cellijnen in een bevroren kweektoestand dient te geschieden bij -130 graden Celsius of in vloeibare stikstof in dampfase. Bewaren bij -70 graden Celsius kan leiden tot verlies van levensvatbaarheid van de cellen.
Invriezen	Een aliquot van ongeveer 0,5-1,0 ml celsuspensie wordt opgeslagen in cryogene buisjes om de cellijnen te bewaren. Deze buisjes worden vervolgens in een cryo-opslagcontainer geplaatst bij -70 graden Celsius. De buisjes worden overgebracht naar een tank met vloeibare stikstof en de volgende dag opgeslagen in de dampfase.
Ontdooien	Om de Jurkat cellijnen te ontdooien, moeten de celsuspensie flesjes in een waterbad van 37 graden Celsius worden geplaatst. De suspensie kan gedurende 2 minuten worden ontdooid onder voorzichtig roeren. Het is essentieel om de dop van de flacon buiten het waterbad te houden om contaminatie van de cellijnen te voorkomen.
Bioveiligheidsniveau	De groei van Jurkat cellijnen vereist een bioveiligheidsniveau van BSL-1 in het laboratorium, waarbij de basisveiligheidsmaatregelen worden gevolgd.

Jurkat E6.1 cellen groeien in clusters bij een vergroting van 10x en 20x.

3. toepassingen van Jurkat E6.1 cellijnen

Jurkat E6.1 cellijn wordt het meest gebruikt voor onderzoek en het bestuderen van aandoeningen die verband houden met het immuunsysteem en de bijbehorende kankers. Bovendien is het geschikt voor de studie van een aantal complexiteiten met betrekking tot HIV-infectie, omdat de CD4 T-celreceptor nodig is voor retrovirale toegang.

Hieronder worden enkele belangrijke gebieden besproken waar deze cellijnen worden gebruikt:

Modelsysteem voor T-celsignalering en apoptotische routes: Deze van T-cel-leukemie afgeleide cellijn wordt veel gebruikt in onderzoek waarbij TCR-signaleringscascade een rol speelt. Jurkat E6.1 geeft meer IL-2 en IL-8 af die vervolgens helpen bij T-celactivatie en de ontstekingsroutes in gang zetten. Deze cellijn staat ook bekend om zijn gehyperfosforyleerde Pyk2 en verhoogde productie van Vav1, dat een cruciale invloed heeft op de actine cytoskelet herschikking in T-cellen. TCR segregatie in Jurkat cellijn E6-1 kan ook worden verbeterd door krachtige expressie van LFA-1 dat vervolgens TCR-signalering en IL-2 expressie verbetert. Celproliferatie- en celcyclusstudies worden ook uitgevoerd in Jurkat E6.1 cellijnen. Ze hebben de voorkeur gekregen bij het bestuderen van apoptotische routes en de inductie van DNA-schade door verbindingen afkomstig van mariene en plantaardige bronnen. Een onderzoek in 2013 evalueerde het effect van epigonale geconditioneerde media van haaien op menselijke cellenmet behulp van deze cellijnen. Op dezelfde manier werd het onderdrukkende effect van plantaardig hirsutine op celproliferatie bestudeerd in Jurkat E6.1 cellijnen. Studies naar kankerbestrijding maken vaak ook gebruik van Jurkat E6.1 om hun geselecteerde doelwitten te evalueren. De invloed van mariene neurotoxines zoals Brevetoxines (PbTx) is ook bestudeerd in deze cellijnen.

HIV-studies: Een van de belangrijkste toepassingen van Jurkat E6.1 cellijnen is hun vermogen om te dienen als een geschikt model voor HIV-studies vanwege hun eigenschap om verschillende signaleringsgebeurtenissen te kiezen die TCA induceren. Jurkat E6.1 cellijnen zijn niet alleen gebruikt voor het begrijpen van HIV-activatie, maar ook voor het ontleden van mechanismen achter HIV-latentie . HIV-replicatie en -infectie zijn op grote schaal bestudeerd in deze cellijnen, waar ze kunnen worden onderworpen aan genbewerking en gen-knock-out, zoals werd gedaan in een studie in 2021. Het effect van medicijnafgifte op HIV-infectie, zoals langwerkende efavirenz (Efa)-enfuvirtide (Enf) Co-loaded polymeer-lipide hybride nanodeeltjes (PLN) op virale intrede gebruikte Jurkat E6.1 cellijnen. CRISPR/Cas9-gemanipuleerde Jurkat E6.1 is meerdere malen gebruikt voor het bestuderen van mechanismen die betrokken zijn bij HIV-intrede, replicatie en infectie.

4. publicaties

Hier zijn een paar opmerkelijke voorbeelden uit de grote verzameling onderzoeken, waaronder Jurkat E6.1 cellijnen.

De seleniummetaboliet methylselenol reguleert de expressie van liganden die immuunactivatie uitlokken via de lymfocytenreceptor NKG2D

Met Jurkat E6.1, geïncubeerd in verschillende seleniumverbindingen om de ligandexpressie en oppervlakte-expressie van MICA/B te bestuderen.

Caracasinezuur, een ent-3,4-seco-kaureen, bevordert apoptose en celdifferentiatie door remming van de NFkB-signaalroute in leukemiecellen.

Inzicht in de door caracasinezuur geïnduceerde cytotoxiciteit in menselijke T-cellijnen zoals Jurkat E6.1 en HL-60.

Bewijs van in vitro ontwikkeling van geneesmiddelenresistentie tegen azidothymidine in T-lymfocytaire leukemiecellijnen (Jurkat E6-1/AZT-100) en in pediatrische patiënten met HIV-1-infectie

Gebruikte Jurkat E6.1, langdurig geïncubeerd met het geneesmiddel AZT om resistentie tegen azidothymidine (AZT) in HIV-1 geïnfecteerde patiënten te bestuderen.

Jurkat E6.1-cellijnonderzoek naar de effecten van enkele bio-indolen op de membraanfluïditeit

Dit onderzoek maakte gebruik van een gepolariseerd fluorescentieanalysesysteem om het effect van bio-indolen, waaronder serotonine, tryptofaan en melatonine, op de celmembraanfluïditeit in Jurkat E6.1 cellijnen te begrijpen.

Moleculair mechanisme van apoptose-inductie in Jurkat E6-1 cellen door Tribulus terrestris alkaloïd extract

Tribulus terrestris afgeleid alkaloïd extract induceerde apoptose in Jurkat E6.1 cellen om het onderliggende werkingsmechanisme te begrijpen.

Toename van LFA-1-expressie verbetert immuunsynaps-architectuur en T Cell Receptor Signaling in Jurkat E6.1-cellen

De T Cell receptor signalering in Jurkat E6.1 cellen werd verbeterd door de LFA-1 expressie krachtig te verhogen.

5. voordelen en beperkingen

Net als andere cellijnen heeft Jurkat E6.1 zijn voordelen en beperkingen.

Voordelen

Er zijn veel redenen waarom Jurkat E6.1 de voorkeur geniet in deze toepassingen:

Groeiwijze
Jurkat E6.1 is een suspensie en niet-adherente cellijn, wat betekent dat het in suspensie groeit en zich niet hecht aan het kweekoppervlak.
Expressie van genen
De Jurkat E6.1 cellijn brengt genen tot expressie die coderen voor interleukine-2 (IL-2) en CD3. Na stimulatie met monoklonale antilichamen, lectines of phorbol esters tegen het T3 antigene complex, is aangetoond dat deze cellen versterkt IL-2 produceren.
Expressie van antigenen
Jurkat E6.1 cellijn brengt CD3 antigeen tot expressie, geassocieerd met T cel activatie en signalering.
Expressie van markers
De cellijn brengt de T cel antigeen receptor (TCR) markers tot expressie, die cruciaal zijn bij T celherkenning en immuunrespons.
Toepasbaarheid voor transfectie
Jurkat kloon E6.1 cellijn is geschikt voor gastheer transfectie experimenten, waardoor de introductie van exogeen genetisch materiaal in de cellen voor verschillende onderzoeksdoeleinden.

Beperkingen

Laten we na de voordelen de beperkingen doornemen die geassocieerd worden met het gebruik van Jurkat E6.1 cellijnen:

Celtransfectie met virale vector
Transfectie van Jurkat E6.1 cellen is een uitdaging vanwege hun T-cel oorsprong. Meestal zijn dure en tijdrovende virale vectoren nodig voor genetische modificatie. Niet-virale vectoren hebben een lage transfectie-efficiëntie en aanzienlijke toxiciteit in Jurkat cellen laten zien.
Bacteriële verontreiniging
Jurkat E6.1 celculturen moeten worden gecontroleerd op mogelijke bacteriële verontreiniging om de integriteit van de experimentele resultaten te waarborgen.
Virale verontreinigingen
Jurkat E6.1 cellijnen brengen verschillende chemokine-receptoren en lage CD4-niveaus tot expressie, wat virale toegang vergemakkelijkt. Dit maakt ze vatbaar voor T-celinfecterende virussen zoals HTLV en HIV.

€ 430,00*

Inhoud: 1.5 milliliter

Prijzen excl. btw plus verzendkosten

cryovial

Productnummer: 300223

6.bronnen: Protocollen, video's en meer

Dit gedeelte bevat de methoden en protocollen voor celkweek en transfectie, evenals educatieve video's met betrekking tot deze cellijn:

Protocollen voor celkweek

Hier zijn enkele basis kweekprocedures die gevolgd moeten worden voor deze cellijn:

Cell Culture SOP, Propagation of Jurkat: De Universiteit van Californië heeft ook een methode op hun USCS Genome browser voor het kweken van Jurkat kloon E6-1.
Jurkat, kloon E6-1 Cultuur en behandeling: De Elabscience opgenomen cultuur behandeling protocol op hun product beschrijving site.

Transfectie protocollen

Hier is de lijst van verschillende transfectie protocollen beschikbaar:

Jurkat Cellen Transfectie Protocol Lipofectamine LTX Reagent: Een Jurkat-celtransfectieprotocol met Lipofectamine LTX Reagent, van ThermoFisher.
Amaxa™ 4D-Nucleofector™ Protocol voor Jurkat-kloon E6.1 [ATCC®]: De Lonza Group AG leverde het transfectieprotocol voor Jurkat-kloon E6.1 van ATCC met behulp van 4D-Nucleofector® X Unit.

Video's over Jurkat E6.1

Er zijn verschillende uitstekende video's over celkweekconcepten, procedures, proliferatie, uitplaten en andere onderwerpen.

Cellen passeren:De basis van celkweek: Dit is een geweldige video voor de basisgids passaging menselijke cellijnen door ThermoFisher.
Cellen ontdooien: Basisprincipes celkweek: Deze video geeft basisinstructies voor het kweken en ontdooien van cellen door ThermoFisher.
Plasmide DNA Transfectie Protocol: Deze video richt zich op het protocol van Plasmide DNA-transfectie met Lipofectamine® LTX en Plus™ Reagent, door ThermoFisher.
Apoptose meten met suspensie Jurkat-cellen behandeld met 3 micromolair Staurosporine: Deze video laat zien hoe een apoptosetest wordt uitgevoerd op de Celigo image cytometer met Hoechst en caspase 3/7 reagentia van Nexcelom Bioscience.