Hep3B-cellen: Onderzoek en ontdekking van hepatocellulair carcinoom
HEP3B is een geïmmortaliseerde, van de mens afgeleide cellijn voor hepatocytencarcinoom. Het wordt veel gebruikt in hepatotoxiciteit en drugmetabolisme onderzoek. HEP3B transfectie-efficiëntie is aanzienlijk; daarom worden deze cellen vaak gebruikt om de ontwikkeling en progressie van leverkanker en therapeutische interventies te bestuderen. Dit artikel bevat alle noodzakelijke informatie over de HEP3B cellijn om je te helpen ermee te werken. De belangrijkste informatie is
- Algemene kenmerken en oorsprong van HEP3B-cellen
- Kweekinformatie over HEP3B-cellijn
- HEP3B-cellijn: Voordelen & beperkingen
- Toepassingen van HEP3B-cellen in onderzoek
- Publicaties over HEP3B-cellijn
- Bronnen voor HEP3B-cellijn: Protocollen, video's en meer
1.algemene kenmerken en oorsprong van HEP3B-cellen
De belangrijkste informatie die je nodig hebt over een cellijn is de oorsprong en de algemene eigenschappen ervan. Dit kan je helpen bij het beslissen over het gebruik ervan in je onderzoek en je helpen bij de omgang ermee. Dit artikel bevat alle essentiële informatie over de oorsprong en kenmerken van HEP3B. Hier leer je het volgende: Wat zijn Hep 3B cellijnen? Wat is de oorsprong van Hep3B-cellen? Wat is de morfologie van HEP3B cellen?
- HEP3B, een continue menselijke hepatoomcellijn, is afkomstig uit het leverweefsel van een 8-jarige Afrikaanse jongen met hepatocellulair carcinoom (HCC). De lijn werd in 1979 gecreëerd door Aden en collega's in het laboratorium van Barbara B. Knowles, Wistar Institute, Philadelphia, VS [1].
- HEP3B-cellen hebben een integratie van het hepatitis B-virus (HBV)-genoom in hun chromosoom.
- Deze hepatocytaire carcinoomcellen vertonen een epitheliale morfologie.
- De HEP3B-cellen hebben een modaal chromosoomnummer van 60. In tegenstelling tot HepG2 hebben ze geen herschikt chromosoom 1.
Wat is het verschil tussen HepG2 en Hep3B?
HepG2 en HEP3B verschillen in het aantal chromosomen per cel. HEP3B bevat 60 chromosomen, terwijl HepG2-cellen gemiddeld 55 chromosomen hebben. Bovendien is HepG2 niet-tumorigeen en hepatitis B-negatief, terwijl HEP3B tumorigeen en HBV-positief is.
2.kweekinformatie over HEP3B cellijn
Kennis over de kweekinformatie van een cellijn kan je helpen om er gemakkelijk mee om te gaan. Dit gedeelte behandelt alle belangrijke punten voor het kweken van de HEP3B HBV-cellijn, waaronder: Wat is de verdubbelingstijd van Hep3B cellen? Wat zijn de HEP3B kweekcondities? Hoe kweek je HEP3B HCC-cellen?
Belangrijkste punten voor het kweken van HEP3B-cellen
|
Verdubbelingstijd: |
De verdubbelingstijd van HEP3B-cellen is ongeveer 36 uur. |
|
Adherent of in suspensie: |
Deze hepatoma cellijn is adherent. |
|
Splitsingsverhouding: |
HEP3B-cellen worden gesubcultiveerd in een verhouding van 1:2 tot 1:4. Aanhangende HEP3B-cellen worden gespoeld met 1 x PBS en vervolgens geïncubeerd met de Accutase-dissociatieoplossing. Na 8 tot 10 minuten wordt verse media toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd. De geoogste cellen worden vervolgens voorzichtig geresuspendeerd en uitgegoten in kolven met kweekmedia in de aanbevolen splitsingsverhouding. |
|
Groeimedium: |
EMEM media met 10% FBS, 2,2 g/L NaHCO3, 2 mM L-Glutamine en Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) wordt gebruikt om HEP3B cellen te kweken. |
|
Groeicondities: |
HEP3B cellen worden gekweekt in een 37 ° C bevochtigde incubator met een continue 5% CO2 toevoer. |
|
Opslag: |
Ingevroren HEP3B-cellen worden bewaard bij temperaturen lager dan -150°C in een elektrische vriezer of de dampfase van vloeibare stikstof. |
|
Invriesproces en medium: |
Het aanbevolen invriesmedium voor HEP3B cellen is CM-1 of CM-ACF. De cellen worden bevroren met behulp van een langzaam vriesproces dat slechts een temperatuurdaling van 1 °C per minuut toestaat om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen. |
|
Ontdooiproces: |
Bevroren cellen worden ontdooid in een waterbad dat vooraf is ingesteld op 37°C gedurende 40 tot 60 seconden. Later worden deze cellen toegevoegd aan het verse groeimedium en gecentrifugeerd om bevroren media-elementen te verwijderen. Verzamelde cellen worden geresuspendeerd en in nieuwe kolven gedistribueerd om te groeien. |
|
Bioveiligheidsniveau: |
Een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1 is vereist voor HEP3B-celkweek. |
3.hEP3B-cellijn: Voordelen en beperkingen
HEP3B is een veelgebruikte cellijn voor hepatocellulair carcinoom. In dit gedeelte wordt ingegaan op enkele belangrijke voordelen en beperkingen van deze hepatoomcellen.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van HEP3B-cellen zijn:
|
Gemakkelijk te kweken |
HEP3B cellen hebben geen lastige celkweekvereisten, waardoor ze gemakkelijk te hanteren en te onderhouden zijn in een onderzoekslaboratorium. Dit vereenvoudigt experimentele procedures. |
|
Hoge transfectie-efficiëntie |
HEP3B cellen vertonen een opmerkelijke transfectie-efficiëntie, waardoor ze op grote schaal worden gebruikt voor genetische manipulatie en genexpressie-gerelateerde studies. |
|
Tumorigeniciteit |
HEP3B is een tumorigene hepatocellulaire carcinoom cellijn die tumoren kan vormen wanneer deze wordt geïnjecteerd in een immuungecompromitteerde muis. Dit helpt bij het bestuderen van de progressie en ontwikkeling van kanker met behulp van HEP3B xenograft-modellen. |
|
HEP3B P53-status |
HEP3B-cellen bezitten een P53-genmutatie die vergelijkbaar is met hepatocellulair carcinoom (HCC) en andere kankers, waardoor ze relevant zijn voor het bestuderen van de effecten van P53-mutatie op de groei, ontwikkeling en progressie van kanker. |
Beperkingen
De beperkingen van de HEP3B-cellijn zijn:
|
In vitro celmodel |
HEP3B-cellijn dient als een in vitro model van hepatocellulair carcinoom (HCC)-cellen. Het is echter mogelijk dat de complexiteit van HCC zoals aangetroffen in levende organismen niet volledig wordt gerepresenteerd. Bijgevolg kunnen de experimentele resultaten in vitro verschillen van de resultaten die in vivo worden waargenomen. |
4.toepassingen van HEP3B-cellen in onderzoek
HEP3B-cellijn biedt verschillende onderzoekstoepassingen in biomedisch onderzoek. Enkele van de belangrijkste onderzoekstoepassingen van HEP3B-cellen zijn:
- Kankerbiologie: HEP3B is een menselijke hepatocellulaire carcinoom cellijn. Het is een celmodel van onschatbare waarde om de cel- en moleculaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling en progressie van HCC. Onderzoekers gebruiken deze cellen om genetische mutaties, cellulaire processen en celsignaleringsroutes te bestuderen die in verband worden gebracht met leverkanker. In een studie met HEP3B-cellen werd bijvoorbeeld ontdekt dat microRNA-223-3p NLRP3 inflammasoomcomponenten reguleert, de proliferatie remt en de apoptose van HEP3B hepatocarcinoomcellen verbetert [2].
- Screening en ontwikkeling van geneesmiddelen: HEP3B-cellijn wordt ook gebruikt voor het testen, screenen en ontwikkelen van nieuwe geneesmiddelen tegen levercarcinoom. Bovendien wordt het gebruikt om de toxiciteit en werkzaamheid van verschillende medicijnen en behandelingen tegen kanker te evalueren. Onderzoekers gebruikten deze hepatoomcellen ook om het metabolisme van geneesmiddelen te bestuderen. Onderzoekers gebruikten HEP3B-cellen en beoordeelden het cytotoxische potentieel van Cotinus coggygria plantenextract op HEP3B hepatocytencarcinoomcellen [3].
- Virale infecties: HEP3B is een hepatitis B virus-positieve cellijn; daarom wordt deze gebruikt om virale infecties te bestuderen die kunnen leiden tot de ontwikkeling van leverkanker, d.w.z. HBV en HCV. Dit kan helpen om virale infecties beter te begrijpen en mogelijke antivirale behandelingen te ontwikkelen. In een onderzoek werd bijvoorbeeld gebruik gemaakt van HEP3B hepatocytenkankercellen en werd het belang van ubiquitinatie voor de verspreiding van hepatitis c-virus onderzocht. De bevindingen suggereerden dat ubiquitine-specifiek protease 15 (USP15) betrokken is bij de verspreiding van HCV via het reguleren van hepatocyt-specifieke functies, waaronder de vorming van lipidedruppels en HCV RNA translatie [4].
5.publicaties over HEP3B-cellijn
In dit deel van het artikel komen enkele interessante onderzoekspublicaties over HEP3B-cellen aan bod.
Regeling van apoptose en autofagie door luteoline in menselijke hepatocellulaire kanker Hep3B-cellen
In deze publicatie in Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) werd voorgesteld dat luteoline-verbinding-geïnduceerde endoplasmatische reticulumstress op een P53-onafhankelijke manier anti-tumoreffecten kan uitoefenen in P53-null HEP3B-cellen.
Potentiële bestrijding van Hep3B leverkankercellen door lupeol geïsoleerd uit Avicennia marina
Deze studie in Archiv der Pharmazie (2021) stelde een pentacyclische triterpenoïde, lupeol, voor als een potentieel antikankermiddel tegen HEP3B-cellen.
Dit artikel is gepubliceerd in Molecular Medicine Reports (2017). De onderzoeksbevindingen stellen dat Cnidium monnieri (L.) Cusson ethanolextract celdood (apoptose) en celcyclusstilstand induceert in hepatocarcinoomcellen HepG2 en HEP3B via regulatie van de p53- en Akt/GSK-3β-signaleringsroute.
In dit onderzoek, gepubliceerd in Biomolecules and Therapeutics (2020), wordt voorgesteld dat auranofine een synergetische activiteit vertoont en de sulforafaan-gemedieerde apoptose van HEP3B-cellen bevordert via activering van de PI3K/AKT-signaleringsroute.
In dit onderzoeksartikel in BioFactors (2023) werd voorgesteld dat circulair RNA-0072309 antitumoreffecten uitoefent in hepatocellulaire carcinoomcellen HEP3B via targeting van miRNA-665.
6.bronnen voor HEP3B-cellijn: Protocollen, video's en meer
Hieronder volgen enkele bronnen die beschikbaar zijn over HEP3B-cellen:
- HEP3B transfectie: Deze video legt het transfectieprotocol voor HEP3B-cellen uit.
- HEP3B transfectie efficiëntie: Deze link zal u helpen leren HEP3B DMEM medium samenstelling, cel passaging en transfectie protocol voor HEP3B cellen. Daarnaast biedt het informatie voor het optimaliseren van de HEP3B lipofectamine 3000 reagens in uw transfectie protocol.
De volgende link bevat de HEP3B celkweek protocol:
- HEP3B kweekomstandigheden: Deze link zal u helpen het protocol voor het hanteren en onderhouden van Huh7 en HEP3B culturen te leren.
- HEP3B cellen: Deze website heeft veel informatie over HEP3B-cellen, waaronder HEP3B-media, het protocol voor het splitsen van cellen, ontdooien en de behandeling van proliferatieve en gecryopreserveerde culturen.
Referenties
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Oorsprong en eigenschappen van cellijnen voor hepatocellulair carcinoom. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguleert NLRP3 om apoptose te bevorderen en proliferatie van hep3B-cellen te remmen. Experimentele en therapeutische geneeskunde, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. en S. Selen-Isbilir, Cytotoxisch effect van Cotinus coggygria-extract op Hep3B-kankercellijn. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 participeert in hepatitis C virus propagatie door regulatie van virale RNA translatie en lipid droplet formation. Tijdschrift voor Virologie, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.