Hep3B-cellen: onderzoek naar en ontdekkingen op het gebied van hepatocellulair carcinoom
HEP3B is een geïmmortaliseerde, van mensen afkomstige hepatocytencarcinoomcellijn. Deze wordt veel gebruikt in onderzoek naar hepatotoxiciteit en geneesmiddelmetabolisme. De transfectie-efficiëntie van HEP3B is aanzienlijk; daarom worden deze cellen vaak gebruikt om de ontwikkeling, progressie en therapeutische interventies van leverkanker te bestuderen. Dit artikel bevat alle benodigde informatie over de HEP3B-cellijn om u te helpen bij het werken ermee. Het omvat voornamelijk:
- Groei-medium
- Voor het kweken van HEP3B-cellen wordt EMEM-medium gebruikt dat 10% FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamine en Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) bevat.
- Verdubbelingstijd
- De verdubbelingstijd van HEP3B-cellen is ongeveer 36 uur.
- Groeitype
- Deze hepatomacellijn is hechtend.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel HEP3B
- Algemene kenmerken en oorsprong van HEP3B-cellen
- Kweekinformatie over de HEP3B-cellijn
- HEP3B-cellijn: voordelen en beperkingen
- Toepassingen van HEP3B-cellen in onderzoek
- Publicaties over de HEP3B-cellijn
- Bronnen voor de HEP3B-cellijn: protocollen, video's en meer
Algemene kenmerken en oorsprong van HEP3B-cellen
De belangrijkste informatie die u over een cellijn nodig hebt, is de oorsprong en de algemene kenmerken ervan. Dit kan u helpen bij het bepalen van het gebruik ervan in uw onderzoek en bij het omgaan met de cellijn. Dit artikel bevat alle essentiële informatie over de oorsprong en kenmerken van HEP3B. Hier leert u: Wat zijn Hep 3B-cellijnen? Wat is de oorsprong van Hep3B-cellen? Wat is de morfologie van HEP3B-cellen?
- HEP3B, een continue menselijke hepatomacellijn, is afkomstig van het leverweefsel van een 8-jarige Afrikaanse jongen met hepatocellulair carcinoom (HCC). De lijn werd in 1979 opgericht door Aden en collega's in het laboratorium van Barbara B. Knowles, Wistar Institute, Philadelphia, VS [1].
- HEP3B-cellen hebben een integratie van het hepatitis B-virus (HBV)-genoom in hun chromosoom.
- Deze hepatocytencarcinoomcellen vertonen een epitheliale morfologie.
- De HEP3B-cellen hebben een modaal chromosoomaantal van 60. In tegenstelling tot HepG2 bezitten ze geen herschikt chromosoom 1.
Wat is het verschil tussen HepG2 en Hep3B?
HepG2 en HEP3B verschillen in het aantal chromosomen per cel. HEP3B bevat 60 chromosomen, terwijl HepG2-cellen gemiddeld 55 chromosomen hebben. Bovendien is HepG2 niet-tumorigeen en hepatitis B-negatief, terwijl HEP3B tumorigeen en HBV-positief is.
Informatie over het kweken van de HEP3B-cellijn
Kennis over de kweekinformatie van een cellijn kan het u gemakkelijker maken. Dit gedeelte behandelt alle belangrijke punten voor het kweken van de HEP3B HBV-cellijn, waaronder: Wat is de verdubbelingstijd van Hep3B-cellen? Wat zijn de kweekomstandigheden voor HEP3B? Hoe kweekt u HEP3B HCC-cellen?
Belangrijke punten voor het kweken van HEP3B-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van HEP3B-cellen is ongeveer 36 uur.
Hechtend of in suspensie:
Deze hepatomacellijn is hechtend.
Splitsingsverhouding:
HEP3B-cellen worden gesubcultiveerd in een verhouding van 1:2 tot 1:4. Hechtende HEP3B-cellen worden gespoeld met 1x PBS en vervolgens geïncubeerd met de Accutase-dissociatieoplossing. Na 8 tot 10 minuten wordt vers medium toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd. De geoogste cellen worden vervolgens zorgvuldig opnieuw gesuspendeerd en in kolven met kweekmedium gegoten in een aanbevolen splitsingsverhouding.
Groei-medium:
Voor het kweken van HEP3B-cellen wordt EMEM-medium gebruikt dat 10% FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamine en Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) bevat.
Groeicondities:
HEP3B-cellen worden gekweekt in een bevochtigde incubator bij 37 °C met een continue toevoer van 5% CO2.
Opslag:
Ingevroren HEP3B-cellen worden bij een temperatuur van minder dan -150 °C bewaard in een elektrische vriezer of in de dampfase van vloeibare stikstof.
Invriesproces en medium:
Het aanbevolen invriesmedium voor HEP3B-cellen is CM-1 of CM-ACF. Cellen worden ingevroren met behulp van een langzaam invriesproces waarbij de temperatuur slechts 1 °C per minuut daalt om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen.
Ontdooiproces:
Ingevroren cellen worden gedurende 40 tot 60 seconden ontdooid in een waterbad dat vooraf is ingesteld op 37 °C. Vervolgens worden deze cellen toegevoegd aan het verse groeimedium en gecentrifugeerd om elementen van het invriesmedium te verwijderen. De verzamelde cellen worden opnieuw gesuspendeerd en overgebracht naar nieuwe kweekflessen voor verdere groei.
Bioveiligheidsniveau:
Voor het kweken van HEP3B-cellen is een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1 vereist.
HEP3B-cellijn: voordelen en beperkingen
HEP3B is een veelgebruikte celijn van hepatocellulair carcinoom. In dit gedeelte wordt ingegaan op enkele belangrijke voordelen en beperkingen van deze hepatomacellen.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van HEP3B-cellen zijn:
Eenvoudig te kweken
HEP3B-cellen stellen geen hoge eisen aan de celkweek, waardoor ze gemakkelijk te hanteren en te onderhouden zijn in een onderzoekslaboratorium. Dit vereenvoudigt de experimentele procedures.
Hoge transfectie-efficiëntie
HEP3B-cellen vertonen een opmerkelijke transfectie-efficiëntie, waardoor ze op grote schaal worden gebruikt in genetische manipulatie en studies met betrekking tot genexpressie.
Tumorigeniciteit
HEP3B is een tumorogene hepatocellulaire carcinoomcellijn die in staat is tumoren te vormen wanneer deze wordt geïnjecteerd in een immuungecompromitteerde muis. Dit helpt bij het bestuderen van de progressie en ontwikkeling van kanker met behulp van HEP3B-xenotransplantaatmodellen.
HEP3B P53-status
HEP3B-cellen bezitten een P53-genmutatie die vergelijkbaar is met die van hepatocellulair carcinoom (HCC) en andere kankers, waardoor ze relevant zijn voor het bestuderen van de effecten van P53-mutaties op de groei, ontwikkeling en progressie van kanker.
Beperkingen
De beperking van de HEP3B-cellijn is:
In-vitrocelmodel
De HEP3B-cellijn dient als een in-vitro-model van hepatocellulaire carcinoom (HCC)-cellen. Het is echter mogelijk dat deze niet volledig de complexiteit van HCC weergeeft zoals die in levende organismen wordt aangetroffen. Bijgevolg kunnen de experimentele resultaten in vitro afwijken van die welke in vivo worden waargenomen.
Toepassingen van HEP3B-cellen in onderzoek
De HEP3B-cellijn biedt verschillende toepassingen in biomedisch onderzoek. Enkele van de belangrijkste onderzoekstoepassingen van de HEP3B-cellen zijn:
- Kankerbiologie: HEP3B is een menselijke hepatocellulaire carcinoomcellijn. Het is een onmisbaar celmodel voor het onderzoeken van cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling en progressie van HCC. Onderzoekers gebruiken deze cellen om genetische mutaties, cellulaire processen en celsignaleringsroutes te bestuderen die verband houden met leverkanker. Zo werd in een studie gebruikgemaakt van HEP3B-cellen en werd vastgesteld dat microRNA-223-3p de componenten van het NLRP3-inflammasoom reguleert, de proliferatie remt en de apoptose van HEP3B-hepatocarcinoomcellen versterkt [2].
- Screening en ontwikkeling van geneesmiddelen: De HEP3B-cellijn wordt ook gebruikt voor het testen, screenen en ontwikkelen van nieuwe therapieën tegen levercarcinoom. Bovendien wordt deze gebruikt om de toxiciteit en werkzaamheid van verschillende antikankermedicijnen en -behandelingen te evalueren. Onderzoekers gebruikten deze hepatomacellen ook om het metabolisme van geneesmiddelen te bestuderen. Onderzoekers gebruikten HEP3B-cellen en beoordeelden het cytotoxische potentieel van het plantenextract van Cotinus coggygria op HEP3B-hepatocytencarcinoomcellen [3].
- Virale infecties: HEP3B is een hepatitis B-virus-positieve cellijn; daarom wordt deze gebruikt om virale infecties te bestuderen die kunnen leiden tot de ontwikkeling van leverkanker, d.w.z. HBV en HCV. Dit kan helpen om virale infecties beter te begrijpen en potentiële antivirale behandelingen te ontwikkelen. Zo werd in een studie gebruik gemaakt van HEP3B-hepatocytencarcinoomcellen om het belang van ubiquitinatie voor de verspreiding van het hepatitis C-virus te onderzoeken. De bevindingen suggereerden dat ubiquitine-specifiek protease 15 (USP15) betrokken is bij de verspreiding van HCV via het reguleren van hepatocytspecifieke functies, waaronder de vorming van lipidedruppeltjes en HCV-RNA-translatie [4].
5. Publicaties over de HEP3B-cellijn
Dit deel van het artikel behandelt enkele interessante onderzoekspublicaties over HEP3B-cellen.
Deze publicatie in Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) stelde dat door luteoline veroorzaakte endoplasmatisch reticulumstress op een P53-onafhankelijke manier antitumorale effecten kan uitoefenen in P53-negatieve HEP3B-cellen.
Potentiële targeting van Hep3B-leverkankercellen door lupeol geïsoleerd uit Avicennia marina
Deze studie in Archiv der Pharmazie (2021) stelde een pentacyclisch triterpenoïde, lupeol, voor als een potentieel antikankermiddel tegen HEP3B-cellen.
Dit artikel is gepubliceerd in Molecular Medicine Reports (2017). De onderzoeksresultaten stellen dat het ethanolextract van Cnidium monnieri (L.) Cusson celdood (apoptose) en celcyclusstilstand induceert in hepatocarcinoomcellen HepG2 en HEP3B door regulering van de p53- en Akt/GSK-3β-signaalroute.
Dit onderzoek, gepubliceerd in Biomolecules and Therapeutics (2020), stelde dat auranofin synergetische activiteit vertoont en de door sulforafaan gemedieerde apoptose van HEP3B-cellen bevordert via activering van de PI3K/AKT-route.
Dit onderzoeksartikel in BioFactors (2023) stelt dat circulair RNA-0072309 antitumorale effecten uitoefent in hepatocellulaire carcinoomcellen HEP3B door zich te richten op miRNA-665.
Bronnen voor de HEP3B-cellijn: protocollen, video's en meer
Hieronder volgen enkele bronnen die beschikbaar zijn over HEP3B-cellen:
- HEP3B-transfectie: In deze video wordt het transfectieprotocol voor HEP3B-cellen uitgelegd.
- HEP3B-transfectie-efficiëntie: via deze link vindt u informatie over de samenstelling van HEP3B DMEM-medium, het passeren van cellen en het transfectieprotocol voor HEP3B-cellen. Daarnaast biedt deze link informatie over het optimaliseren van het HEP3B lipofectamine 3000-reagens in uw transfectieprotocol.
De volgende link bevat het HEP3B-celkweekprotocol:
- HEP3B-kweekomstandigheden: Via deze link leert u het protocol voor het hanteren en onderhouden van Huh7- en HEP3B-kweken.
- HEP3B-cellen: Deze website bevat veel informatie over HEP3B-cellen, waaronder HEP3B-media, het protocol voor het splitsen, ontdooien en hanteren van proliferatieve en cryogepreserveerde culturen.
Referenties
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Oorsprong en eigenschappen van hepatocellulaire carcinoomcellijnen. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguleert NLRP3 om apoptose te bevorderen en de proliferatie van Hep3B-cellen te remmen. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. en S. Selen-Isbilir, Cytotoxisch effect van Cotinus coggygria-extract op de Hep3B-kankercellijn. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 neemt deel aan de verspreiding van het hepatitis C-virus door regulering van de virale RNA-translatie en de vorming van lipidedruppeltjes. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.