HT22-cellijn
HT22 is een muizen-neuronale cellijn die veel wordt gebruikt in neurowetenschappelijk onderzoek. Deze cellijn is waardevol voor het bestuderen van neurodegeneratieve aandoeningen en het testen van potentiële neuroprotectieve therapieën of behandelingen. Bovendien zijn de HT22-cellen glutamaatgevoelig en worden ze daarom gebruikt om glutamaat-geïnduceerde toxiciteit of neuronale schade te onderzoeken.
- Groei-medium
- DMEM-medium wordt gebruikt voor het kweken van HT22-cellen. Het wordt aangevuld met 10% FBS, 4,5 g/l glucose, 4 mM L-glutamine, 1,5 g/l NaHCO3 en 1,0 mM natriumpyruvaat voor optimale celgroei.
- Verdubbelingstijd
- De verdubbelingstijd van HT22-cellen is ongeveer 15 uur.
- Groeitype
- HT22-cellen zijn hechtend.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel HT22
Dit artikel belicht de essentiële aspecten van HT22-cellen die u kunnen helpen bij uw onderzoek. Het behandelt voornamelijk:
- Algemene kenmerken en oorsprong van HT22-cellen
- Informatie over het kweken van de HT22-cellijn
- Voor- en nadelen van de HT22-cellijn
- Toepassingen van de HT22-cellijn in onderzoek
- Wetenschappelijke publicaties over HT22-cellen
- Bronnen voor HT22-cellen: protocollen, video's en meer
Algemene kenmerken en oorsprong van HT22-cellen
Dit deel van het artikel belicht de oorsprong en algemene kenmerken van HT22-cellen. Het is noodzakelijk om deze informatie over een cellijn te kennen voordat u ermee aan de slag gaat. Hier leert u: Wat zijn HT22-cellen? Wat is de morfologie van HT22-hippocampuscellen? Wat is de celgrootte van HT22?
HT22 is een continue cellijn afkomstig uit de hippocampus van de muizenhersenen. Het is een subkloon van de oorspronkelijke HT-4-cellijn, ontwikkeld door de onsterfelijkmaking van muizenneuronale weefsels via een temperatuurgevoelig polyomavirus, simian virus 40 (SV40) T-antigeen.
Deze cellen verschillen van volwassen hippocampus-cellen omdat ze geen glutamaat- en cholinerge receptoren hebben, zoals volwassen neuronen van hippocampus-oorsprong. Ze zijn dus niet geschikt voor onderzoek naar het geheugen [1].
HT22-cellen hebben het uiterlijk van epitheelcellen.
Informatie over het kweken van HT22-cellijnen
HT22-cellen worden gebruikt in neurowetenschappelijke onderzoekslaboratoria. Voordat ze deze cellen gaan kweken, zoeken onderzoekers naar essentiële informatie over celkweek die hun werk gemakkelijk en efficiënt maakt. In dit gedeelte komen alle belangrijke punten voor het kweken van HT22-cellen aan bod. U komt te weten: Wat is de verdubbelingstijd van HT22-cellen? Hoe kweekt u HT22-cellen? Wat is het kweekprotocol voor HT22-cellen? Wat is het kweekmedium voor HT22-cellen?
Belangrijke punten voor het kweken van HT22-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van HT22-cellen is ongeveer 15 uur.
Hechtend of in suspensie:
HT22-cellen zijn hechtend.
Subcultiveringsverhouding:
De subcultiveringsverhouding voor HT22-hippocampuscellen is 1:3 tot 1:6. Kort gezegd wordt het medium verwijderd en worden de hechtende cellen gespoeld met 1 x PBS. Accutase-dissociatieoplossing wordt aan de kolf toegevoegd en de cellen worden gedurende 8 tot 10 minuten bij omgevingstemperatuur geïncubeerd. Daarna wordt vers kweekmedium toegevoegd en worden de cellen in een buisje verzameld voor centrifugatie. Het verkregen celpellet wordt voorzichtig opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden in een kweekkolf gedoseerd voor groei.
Kweekmedium:
DMEM-medium wordt gebruikt voor het kweken van HT22-cellen. Het wordt aangevuld met 10% FBS, 4,5 g/l glucose, 4 mM L-glutamine, 1,5 g/l NaHCO3 en 1,0 mM natriumpyruvaat voor optimale celgroei.
Groeicondities:
HT22-celculturen worden bewaard in een bevochtigde incubator (temperatuur 37 °C) met een CO2-toevoer van 5%.
Opslag:
Ingevroren HT22-cellen kunnen voor langdurige opslag bij een temperatuur van minder dan -150 °C worden bewaard, hetzij in de dampfase van vloeibare stikstof, hetzij in een elektrische vriezer voor ultralage temperaturen.
Invriesproces en medium:
HT22-cellen kunnen worden ingevroren in CM-1- of CM-ACF-media met behulp van een langzame invriesmethode. Dit proces zorgt ervoor dat de temperatuur van het monster slechts 1 °C per minuut daalt, beschermt de cellen tegen schokken en helpt hun levensvatbaarheid te behouden.
Ontdooiproces:
Cellen worden 40 tot 60 seconden in een waterbad van 37 °C ontdooid totdat er nog een klein klompje ijs overblijft. Daarna wordt kweekmedium aan de cellen toegevoegd en worden ze gecentrifugeerd om componenten van het invriesmedium te verwijderen. Het celpellet wordt opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden in de nieuwe kweekfles met kweekmedium gegoten. Vervolgens worden de cellen gedurende ten minste 24 uur bij 37 °C in een incubator geïncubeerd.
Bioveiligheidsniveau:
Voor het kweken van HT22-cellen is een laboratoriumomgeving van bioveiligheidsniveau 1 verplicht.
Voor- en nadelen van de HT22-cellijn
HT22-hippocampuscellen hebben een aantal voor- en nadelen die hen onderscheiden van andere neuronale cellijnen. Enkele opvallende voor- en nadelen van de cellijn worden hier genoemd.
Voordelen
De voordelen van de HT22-neuronale muizencellijn zijn:
-
Snelle groeisnelheid
HT22-cellen hebben een verdubbelingstijd van 15 uur, wat snel en efficiënt experimenteren mogelijk maakt en bijdraagt aan tijdige onderzoeksresultaten.
-
Onsterfelijkheid
HT22 is een geïmmortaliseerde cellijn, wat zorgt voor continue groei gedurende langere perioden. Dit zorgt voor een constante beschikbaarheid van cellen, bespaart tijd en kosten, en maakt langdurige experimenten met consistente resultaten mogelijk.
Nadelen
De nadelen van HT22-cellen zijn:
-
Van muizen afkomstig
De HT22-cellijn is afgeleid van hippocampusweefsel van muizen, wat mogelijk niet volledig de complexiteit van de fysiologie en het gedrag van menselijke neuronencellen weergeeft, waardoor de translationele relevantie ervan beperkt is.
4. Onderzoekstoepassingen van de HT22-cellijn
De HT22-cellen worden op grote schaal gebruikt in neurobiologisch onderzoek. In dit deel van het artikel worden enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn besproken:
- Neurowetenschappelijk onderzoek: HT22-cellen worden op grote schaal gebruikt in onderzoek naar neurodegeneratieve aandoeningen, zoals de ziekte van Alzheimer en de ziekte van Parkinson. Ze worden beschouwd als een waardevol onderzoeksinstrument voor het bestuderen van neurotoxiciteit en oxidatieve stressmechanismen die verband houden met deze ziekten. Uit onderzoek in 2020 bleek dat de PI3K/AKT/CREB-route betrokken is bij door hyperglykemie geïnduceerde neurale toxiciteit in HT22-cellen [2]. Evenzo werd in een recent onderzoek gesuggereerd dat de Nrf2/HO-1-route en de NF-κB-signaalas een belangrijke rol spelen bij de amyloïde-bèta-toxiciteit van HT22-cellen [3].
- Geneesmiddelenscreening: HT22-cellen worden op grote schaal gebruikt voor het testen en screenen van geneesmiddelen. Ze helpen onderzoekers bij het identificeren van potentiële therapeutische middelen met neuroprotectieve effecten voor de bestrijding van neurodegeneratieve aandoeningen. Een in 2019 uitgevoerd onderzoek onderzocht het neuroprotectieve potentieel van de tetrahydrocurcumineverbinding in met glutamaat behandelde HT22-hippocampuscellen. Hierin induceert glutamaat oxidatieve stress in HT22-cellen en veroorzaakt het celdood door mitogeen-geactiveerde proteïnekinasen te activeren [4].
5. Wetenschappelijke publicaties over HT22-cellen
Hier volgen enkele interessante onderzoeksartikelen over de HT22-cellijn:
Deze studie in het International Journal of Molecular Medicine (2019) stelde het neuroprotectieve potentieel voor van crocine, een verbinding geïsoleerd uit de Crocus sativus L., in de door L-glutamaat beschadigde HT22-cellen.
Deze publicatie in Neuropharmacology (2018) meldde dat oxindoolderivaten bescherming bieden tegen door oxidatieve stress geïnduceerde HT22-celdood.
Dit onderzoeksartikel werd in 2019 gepubliceerd in het Journal of Ginseng Research. Deze studie onderzocht de neuroprotectieve effecten van een natuurlijk product, ginsenoside Rb2, met behulp van de HT22-cellijn. Uit de studie bleek dat ginsenoside Rb2 op efficiënte wijze door glutamaat geïnduceerde oxidatieve stress en celdood in HT22-cellen van de hippocampus van muizen verminderde.
Deze studie in Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) evalueerde het cytotoxische potentieel van zilvernanodeeltjes in de HT22-cellijn.
Ferrostatin-1 beschermt HT-22-cellen tegen oxidatieve toxiciteit
Dit onderzoeksartikel werd in 2020 gepubliceerd in Neural regeneration research. Het stelde dat ferrostatin-1, een remmer van ferroptose, oxidatieve toxiciteit in HT22-hippocampus-cellen voorkomt.
Bronnen voor HT22-cellen: protocollen, video's en meer
Sommige online bronnen over de HT22-cellen geven uitleg over de protocollen voor transfectie, differentiatie en celkweek:
- HT22-transfectie: Dit document bevat een geoptimaliseerd protocol voor HT22-transfectie in celkweekplaten met 24 en 96 putjes.
- HT22-celdifferentiatie: Dit artikel biedt een uitgebreide handleiding voor het HT22-differentiatieprotocol.
De volgende link bevat het HT22-celkweekprotocol:
- HT22-cel subcultivering: Deze link helpt u het subcultiveringsprotocol voor de HT22-cellijn te leren. Bovendien helpt het u bij het leren van het protocol voor het induceren van neurotoxiciteit in cellen.
- HT22-hippocampuscellen: Deze website bevat veel nuttige informatie over de verdubbelingstijd van HT22-cellen, media en protocollen voor celcultuur.
Referenties
- He, M., et al., Differentiatie maakt HT22-neuronen vatbaar voor excitotoxiciteit. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetine voorkomt door hoge glucosespiegels veroorzaakte neurotoxiciteit in HT22-cellen via de PI3K/Akt/CREB-signaalroute. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Beschermende effecten van berberine tegen door β-amyloïde geïnduceerde neurotoxiciteit in HT22-cellen via de Nrf2/HO-1-route. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Neuroprotectieve effecten van tetrahydrocurcumine tegen door glutamaat geïnduceerde oxidatieve stress in HT22-cellen van de hippocampus. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.