HT22-cellijn
HT22 is een neuronale cellijn van muizen die vaak wordt gebruikt in neurowetenschappelijk onderzoek. Het is waardevol voor het bestuderen van neurogeneratieve aandoeningen en het testen van potentiële neuroprotectieve therapieën of behandelingen. Bovendien zijn HT22-cellen gevoelig voor glutamaat en worden ze dus gebruikt om glutamaat-geïnduceerde toxiciteit of neuronale schade te onderzoeken.
Dit artikel belicht de essentiële aspecten van HT22 cellen die je kunnen helpen bij je onderzoekswerk. Er wordt voornamelijk ingegaan op:
- Algemene eigenschappen en oorsprong van HT22 cellen
- Informatie over het kweken van HT22-cellijnen
- Voordelen en nadelen van HT22-cellijn
- Onderzoekstoepassingen van HT22-cellijn
- Onderzoekspublicaties met HT22 cellen
- Bronnen voor HT22-cellen: Protocollen, video's en meer
1. Algemene eigenschappen en oorsprong van HT22 cellen
Dit deel van het artikel zal licht werpen op de oorsprong en algemene kenmerken van HT22 cellen. Het is noodzakelijk om deze informatie over een cellijn te kennen voordat je ermee aan de slag gaat. Hierin leer je het volgende: Wat zijn HT22-cellen? Wat is de morfologie van HT22 hippocampale cellen? Wat is de grootte van HT22 cellen?
HT22 is een continue cellijn afkomstig van de hippocampus regio van de hersenen van de muis. Het is een subkloon van de ouderlijke HT-4 cellijn die is ontwikkeld door immortalisatie van murien neuronaal weefsel via een temperatuurgevoelig polyomavirus simian virus 40 (SV40) T antigeen.
Deze cellen verschillen van rijpe hippocampale cellen doordat ze glutamaat- en cholinerge receptoren missen zoals rijpe neuronen van hippocampale oorsprong. Daarom zijn ze niet geschikt voor geheugen-gerelateerd onderzoek [1].
HT22-cellen zien eruit als epitheelcellen.
2. HT22-cellijn kweekinformatie
HT22 cellen worden gebruikt in neurowetenschappelijke onderzoekslaboratoria. Voordat deze cellen worden gekweekt, zijn onderzoekers op zoek naar essentiële informatie over celkweek die hun werk gemakkelijk en efficiënt maakt. Dit gedeelte behandelt alle belangrijke punten voor het kweken van HT22 cellen. Je zult het volgende weten: Wat is de HT22 celverdubbelingstijd? Hoe kweek je HT22 cellen? Wat is het HT22 celkweekprotocol? Wat is het HT22 celmedium?
Belangrijkste punten voor het kweken van HT22 cellen
|
Verdubbelingstijd: |
De HT22 celverdubbelingstijd is ongeveer 15 uur. |
|
Adherent of in suspensie: |
HT22 cellen zijn adherent. |
|
Sub-kweek ratio: |
De sub-kweekverhouding voor HT22 hippocampale cellen is 1:3 tot 1:6. Kort gezegd wordt de media verwijderd en worden de adherente cellen gespoeld met 1 x PBS. Accutase dissociatie-oplossing wordt toegevoegd aan de kolf, en de cellen worden geïncubeerd gedurende 8 tot 10 minuten bij een omgevingstemperatuur. Daarna wordt verse kweekmedia toegevoegd en worden de cellen verzameld in een flacon om te centrifugeren. De verkregen celpellet wordt voorzichtig geresuspendeerd en de cellen worden in een kweekkolf gedoseerd om te groeien. |
|
Groeimedium: |
DMEM media wordt gebruikt voor het kweken van HT22 cellen. Het wordt aangevuld met 10% FBS, 4,5 g/L glucose, 4 mM L-glutamine, 1,5 g/L NaHCO3 en 1,0 mM natriumpyruvaat voor optimale celgroei. |
|
Groeicondities: |
HT22 celculturen worden gehouden in een vochtige incubator (37 ° C temperatuur) met een 5%CO2 toevoer . |
|
Opslag: |
Ingevroren HT22-cellen kunnen worden bewaard bij temperaturen lager dan -150 °C, hetzij in de dampfase van vloeibare stikstof of in een elektrische vriezer met ultralage temperatuur voor de lange termijn. |
|
Invriesproces en -medium: |
HT22 cellen kunnen worden ingevroren in CM-1 of CM-ACF media met behulp van een langzame invriesmethode. Bij dit proces daalt de temperatuur van het monster met slechts 1 °C per minuut, worden de cellen beschermd tegen schokken en blijft hun levensvatbaarheid behouden. |
|
Ontdooiproces: |
De cellen worden 40 tot 60 seconden in een waterbad van 37 °C ontdooid totdat er een klein ijsklontje overblijft. Daarna wordt cultuurmedia aan de cellen toegevoegd en worden ze gecentrifugeerd om de bestanddelen van de vriesmedia te verwijderen. De celpellet wordt geresuspendeerd en de cellen worden in de nieuwe kolf met kweekmedia gegoten. Hierna worden de cellen ten minste 24 uur geïncubeerd bij 37 °C in een incubator. |
|
Bioveiligheidsniveau: |
Biosafety level 1-laboratoriuminstellingen zijn verplicht voor het kweken van HT22-cellen. |
3. Voordelen en nadelen van HT22-cellijn
HT22 hippocampale cellen hebben een aantal voor- en nadelen die hen onderscheiden van andere neuronale cellijnen. Enkele opmerkelijke voor- en nadelen van de cellijn worden hier genoemd.
Voordelen
De voordelen van de HT22 murine neuronale cellijn zijn:
-
Snelle groeisnelheid
HT22 cellen hebben een verdubbelingstijd van 15 uur, wat snelle en efficiënte experimenten mogelijk maakt en bijdraagt aan tijdige onderzoeksresultaten.
-
Immortalisatie
HT22 is een geïmmortaliseerde cellijn, waardoor continue groei gedurende langere perioden gegarandeerd is. Dit zorgt voor een consistente beschikbaarheid van cellen, vermindert tijd en kosten en vergemakkelijkt langetermijnexperimenten met consistente resultaten.
Nadelen
De nadelen van HT22 cellen zijn:
-
Muriene oorsprong
De HT22-cellijn is afgeleid van hippocampusweefsel van muizenhersenen, die mogelijk niet volledig de complexiteit van de fysiologie en het gedrag van menselijke neuroncellen vertegenwoordigen, waardoor hun translationele relevantie beperkt is.
4. Onderzoekstoepassingen van HT22-cellijn
HT22-cellen worden veel gebruikt in neurobiologisch onderzoek. Enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn worden in dit deel van het artikel besproken:
- Neurowetenschappelijk onderzoek: HT22-cellen worden veel gebruikt in onderzoek naar neurodegeneratieve ziekten, zoals de ziekte van Alzheimer en de ziekte van Parkinson. Ze worden beschouwd als een waardevol onderzoeksinstrument voor het bestuderen van neurotoxiciteit en oxidatieve stressmechanismen die verband houden met deze ziekten. Uit onderzoek in 2020 bleek dat de PI3K/AKT/CREB pathway betrokken is bij hyperglycemie-geïnduceerde neurale toxiciteit in HT22 cellen [2]. Een recente studie stelde ook voor dat de Nrf2/HO-1 pathway en de NF- κB signaleringsas een belangrijke rol spelen in HT22 amyloïde bèta toxiciteit [3].
- Screening op geneesmiddelen: HT22 cellen worden op grote schaal gebruikt voor het testen en screenen van geneesmiddelen. Ze helpen onderzoekers bij het identificeren van potentiële therapeutische middelen met neuroprotectieve effecten voor het bestrijden van neurodegeneratieve ziekten. Een studie uitgevoerd in 2019 onderzocht het neuroprotectieve potentieel van tetrahydrocurcumine in met glutamaat behandelde HT22 hippocampale cellen. Hierin induceert glutamaat oxidatieve stress in HT22-cellen en veroorzaakt celdood door het activeren van mitogeen-geactiveerde eiwitkinases [4].
5. Onderzoekspublicaties met HT22 cellen
Hier zijn enkele interessante onderzoekspublicaties waarin de HT22-cellijn wordt gebruikt:
Deze studie in het International Journal of Molecular Medicine (2019) stelde het neuroprotectieve potentieel voor van crocine, een verbinding geïsoleerd uit de Crocus sativus L. in de doorL-glutamaatbeschadigdeHT22-cellen.
Deze publicatie in Neuropharmacology (2018) meldt dat oxindole derivaten beschermen tegen HT22 celdood geïnduceerd door oxidatieve stress.
Dit onderzoeksartikel werd gepubliceerd in het Journal of Ginseng Research in 2019. Deze studie onderzocht de neuroprotectieve effecten van een natuurlijk product, ginsenoside Rb2, met behulp van HT22-cellijn. Uit het onderzoek bleek dat ginsenoside rb2 efficiënt glutamaat-geïnduceerde oxidatieve stress en celdood verminderde in murine hippocampale cellen HT22.
Deze studie in Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) evalueerde het cytotoxisch potentieel van zilveren nanodeeltjes in de HT22-cellijn.
Ferrostatine-1 beschermt HT-22 cellen tegen oxidatieve toxiciteit
Dit onderzoeksartikel werd in 2020 gepubliceerd in Neural regeneration research. Het stelde voor dat ferrostatin-1, een remmer van ferroptose, oxidatieve toxiciteit voorkomt in HT22 hippocampale cellen.
6. Bronnen voor HT22-cellen: Protocollen, video's en meer
Enkele online bronnen over HT22-cellen geven uitleg over hun transfectie-, differentiatie- en celkweekprotocollen:
- HT22 transfectie: Dit document bevat een geoptimaliseerd protocol voor HT22-transfectie in 24- en 96-wells celkweekplaten.
- HT22-celdifferentiatie: Dit artikel geeft je een uitgebreide gids over het HT22-differentiatieprotocol.
De volgende link bevat het HT22 celkweek protocol:
- HT22-cel subculturen: Deze link helpt je bij het leren van het subkweekprotocol voor de HT22 cellijn. Bovendien zal het u helpen bij het leren van het protocol voor het induceren van neurotoxiciteit in cellen.
- HT22 hippocampale cellen: Deze website bevat veel nuttige informatie over HT22 celverdubbelingstijd, media en celkweekprotocollen.
Referenties
- He, M., et al., Differentiatie maakt HT22-neuronen gevoelig voor excitotoxiciteit. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin prevents HT22 cells from high glucose-induced neurotoxicity via PI3K/Akt/CREB signaling pathway. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Protective effects of berberine against β-amyloid-induced neurotoxicity in HT22 cells via the Nrf2/HO-1 pathway. Bioorganische chemie, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Neuroprotective effects of tetrahydrocurcumin against glutamate-induced oxidative stress in hippocampal HT22 cells. Moleculen, 2019. 25(1): p. 144.