HT-29 cellijn

HT-29 is een menselijke colorectale kankercellijn met een breed scala aan kanker- en toxicologische onderzoekstoepassingen. Zo zijn deze cellen gevoelig voor standaard chemotherapeutische behandelingen tegen darmkanker. Daarnaast is de HT-29 cellijn een goed gekarakteriseerd in vitro model om de reactie van darmepitheel op bacteriële infectie te onderzoeken. De HT-29 cellen bootsen de kenmerken na van rijpe darmcellen, d.w.z. enterocyten, en zijn dus geschikt voor aanhechtings- en mechanistische studies.

Dit artikel behandelt alle aspecten van de HT-29 cellijn die je moet weten voordat je ermee gaat werken. Het gaat voornamelijk over:

HT-29 cellen: Oorsprong en algemene informatie
Informatie over celkweek van de HT-29 cellijn
HT-29 cellen: Voordelen en beperkingen
HT-29 cellen: Toepassingen
Onderzoekspublicaties over HT-29 cellen
HT-29 cellen Hulpmiddelen: Protocollen, video's en meer

1. HT-29 cellen: Oorsprong en algemene informatie

Voordat je een cellijn gebruikt, moet je op de hoogte zijn van de algemene kenmerken en oorsprong van de cellijn. Deze sectie helpt je dat te leren: Wat zijn de HT-29 cellen? Is HT-29 een cellijn voor colorectale kanker? Wat is de morfologie van HT-29 cellen?

Wat is de HT-29 cellijn? HT-29 is een colorectale adenocarcinoomcellijn die in 1964 is ontwikkeld door Trempe en Fogh. De cellen werden oorspronkelijk afgeleid van de primaire tumor van een Kaukasische vrouw (44 jaar) met colorectaal adenocarcinoom [1]. Sinds de oprichting is deze cellijn gebruikt om de biologie van kankers te bestuderen.

Morfologie van HT-29 cellen: HT-29 cellijn heeft over het algemeen een epitheliale morfologie. Gedifferentieerde cellen groeien in monolagen, vormen nauwe cel-cel juncties en bezitten een apicale borstelrand. Als deze cellen worden gekweekt in een glucosegebrekkig medium of inducers zoals butyraat of zuur krijgen, vertonen ze enterocytachtige kenmerken.

Celgrootte: De diameter van de HT-29 colorectale kanker cellijn is 11 μm.

Genoom en ploïdie: Het modale aantal chromosomen voor de HT-29 cellijn is 71. Het kan variëren van 68-72. Bovendien is het gestroomlijnde chromosoomnummer voor HT-29 cellen hypertriploïd, waarbij de 2S-component voorkomt met een frequentie van 2,4%.

Wat is HT29 MTX? HT29 MTX is een methotrexaatresistente cellijn die is geïsoleerd uit de oorspronkelijke HT-29 menselijke darmkankercellijn door aanpassing aan 10 µM methotrexaat. Deze cellen vertonen kenmerken van slijmafscheidende volwassen gobletcellen.

Deling en beweging van darmkankercellen onder de microscoop.

2. Informatie over de celkweek van de HT-29 cellijn

Als je de basisvereisten voor het kweken van een cellijn kent, kun je er gemakkelijk mee werken. Je moet weten: wat is de verdubbelingstijd van de HT-29 cellijn? Wat is de zaaidichtheid van HT-29 cellen? Welke media voor HT-29 cellen?

Verdubbelingstijd	De gemiddelde verdubbelingstijd voor de HT-29 cellijn is 24 uur.
Adherent/suspensie	HT-29 is een adherente cellijn.
Dichtheid	De aanbevolen zaaidichtheid voor HT-29 cellen is 3 x¹⁰⁴ ^cellen/cm2. Gekweekte cellen worden gewassen met 1 X PBS en losgemaakt na incubatie met Accutase gedurende 8-10 minuten. Verse media wordt toegevoegd en de cellen worden gecentrifugeerd. De celpellet wordt geresuspendeerd en de cellen worden in nieuwe kolven geplaatst bij de aanbevolen celdichtheid.
Groeimedium	Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) aangevuld met 2,5 mM L-glutamine en 10% FBS wordt gebruikt voor een optimale kweek van HT-29 cellen. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden vervangen.
Groeicondities	HT-29 cellen vereisen een bevochtigde incubator met een temperatuur van 37 °C en 5%_CO2 voor groei.
Opslag	Deze cellen worden opgeslagen in de dampfase van vloeibare stikstof bij -195 °C.
Invriesmedium en -proces	Het invriesmedium dat gebruikt wordt voor de HT-29 cellijn is CM-1 of CM-ACF. De cellen worden bevroren door een langzaam vriesproces dat een temperatuurdaling van 1 °C veroorzaakt en de levensvatbaarheid van de cellen efficiënt beschermt.
Ontdooiproces	Bevroren HT-29 cellen worden ontdooid in een waterbad dat op 37 °C is ingesteld. Deze cellen kunnen worden geresuspendeerd en direct in de kolf met vers groeimedium worden gedoseerd. In tegenstelling hiermee kunnen de ontdooide cellen gecentrifugeerd worden om de vriesmediumelementen te verwijderen, geresuspendeerd worden in vers medium en gekweekt worden in kolven.
Bioveiligheidsniveau	Bioveiligheidsniveau 1 wordt gebruikt voor het hanteren en onderhouden van de HT-29 cellijn.

HT-29 cellen onder 10x en 20x vergroting.

3. HT-29 cellen: Voordelen en beperkingen

Elke cellijn heeft unieke voor- en nadelen die hem onderscheiden van andere cellijnen. In dit gedeelte worden de belangrijkste voordelen en beperkingen van HT-29 cellen besproken.

Voordelen

De belangrijkste voordelen van HT-29 cellen zijn

Gemakkelijk te kweken
De HT-29 cellijn is gemakkelijk te hanteren en te onderhouden, zonder complexe kweekvereisten. Ze wordt op grote schaal gekweekt in onderzoekslaboratoria.
In vitro model van darmcellen
HT-29 cellen kunnen onder specifieke kweekomstandigheden differentiëren in rijpe darmcellen (enterocyten en slijmproducerende cellen). Ze worden gebruikt als cellulair model om de voedselvertering en biologische beschikbaarheid te bestuderen.
Hoge transfectie-efficiëntie
HT-29 darmkankercellen bieden een hoge transfectie-efficiëntie, waardoor ze geschikt zijn voor genexpressie- en regulatiestudies. Zowel transiënte als stabiele transfectie-experimenten kunnen worden uitgevoerd met verschillende methoden.
Gevoeligheid voor geneesmiddelen
HT-29 cellen zijn gevoelig voor chemotherapeutische geneesmiddelen zoals fluorouracil en oxaliplatin, die vaak worden gebruikt bij de behandeling van darmkanker. Ze worden gebruikt om geneesmiddelenresistentie te bestuderen en potentiële therapeutische geneesmiddelen voor colorectaal carcinoom te screenen.

Beperkingen

Heterogeniteit
HT-29 cellen vertonen net als andere kankercellijnen heterogeniteit en vormen mogelijk geen uniforme celpopulatie. Dit kan de reproduceerbaarheid van resultaten in bepaalde assays beïnvloeden en leiden tot kleine variaties in experimentele resultaten.
Beperkte differentiatie
HT-29 cellen hebben een beperkt differentiatiepotentieel. Ze differentiëren niet volledig naar darm- of coloncellen, maar vertonen slechts enkele karakteristieke kenmerken. Deze beperking kan hun gebruik bij het bestuderen van complexere biologische processen beperken.

4. hT-29 cellen: Toepassingen

De HT-29 cellijn wordt uitgebreid gekweekt in onderzoekslaboratoria vanwege zijn brede scala aan toepassingen. In deze paragraaf worden slechts enkele belangrijke toepassingen van HT-29 cellen besproken.

Kankeronderzoek: HT-29 is een colorectaal adenocarcinoom cellijn, dus het wordt gebruikt om kankerprogressie, ontwikkeling en onderliggende moleculaire mechanismen te bestuderen. Een onderzoek dat in 2018 werd uitgevoerd, gebruikte de HT-29 cellijn om de celmoleculen te onderzoeken die verantwoordelijk zijn voor metastase. In deze studie werd waargenomen dat vimentine- en CXCR4-genen celmetastase reguleren. Het transfecteren van microRNA-193a-5p mimic kan de mRNA-niveaus van deze genen verlagen en met succes de metastase van kankercellen verminderen [2].

Toxicologisch onderzoek: HT-29 cellijn wordt veel gebruikt in toxicologisch onderzoek. Deze colorectale carcinoomcellen worden gebruikt om de toxiciteit van verschillende kandidaat-geneesmiddelen te beoordelen met behulp van verschillende tests. Zo werd in een onderzoek het toxiciteitspotentieel van een ethanolisch extract van de plant Syzygium cumini op de HT-29 cellijn onderzocht. De resultaten toonden significante onderdrukking van HT-29 celgroei, wat duidt op de veelbelovende antikankereigenschappen van het extract [3].

Microbiologie: HT-29 kan worden gebruikt als gastcelsysteem om de pathogenese van potentiële microben, d.w.z. bacteriën en virussen, te onderzoeken. Onderzoekers kunnen HT-29 cellen infecteren met microben om hun virulentie en gastheerrespons te onderzoeken. Een dergelijke studie gebruikte HT-29 cellen om de probiotische eigenschappen van melkzuurbacteriën te onderzoeken [4]. Een andere studie gebruikte HT-29 cellen om de werkzaamheid en veiligheid van bacteriofaagbehandelingen te evalueren [5].

€ 430,00*

Inhoud: 1.5 milliliter

Prijzen excl. btw plus verzendkosten

cryovial

Productnummer: 300215

5. Onderzoekspublicaties over HT-29 cellen

Deze sectie zal een aantal opmerkelijke publicaties over HT-29 cellen belichten die je zullen helpen bij het opzetten van je onderzoek.

Evaluatie van het antikankereffect van ethanolisch extract van Syzygium cumini op HT-29 colorectale cellijn

In dit onderzoek werd Syzygium cumini ethanolisch extract voorgesteld als een potentieel antikankermiddel tegen colorectale kanker cellijn HT-29. Het extract onderdrukte de groei van kankercellen aanzienlijk.

Tetrandrine remt de groei van colonkankercellen HT-29 via de Bcl-2/Caspase 3/PARP-pathway en de G1/S-fase

Deze publicatie in Bioscience Reports testte de antikankeractiviteit van een verbinding, tetrandrine, op HT-29 cellen. De resultaten toonden aan dat tetrandrine de proliferatie en groei van kankercellen remt via de regulering van celsignaalroutes.

microRNA-193a-5p remt de migratie van humane HT-29 darmkankercellen via onderdrukking van de metastasepathway

Deze studie stelde voor dat miRNA-193a-5p mogelijk HT-29-celmetastase kan reguleren door metastase-gerelateerde genen te reguleren.

Bacteriofagen zijn virulenter voor bacteriën met menselijke cellen dan in een bacteriële cultuur; inzichten van HT-29 cellen

Dit artikel is in 2018 gepubliceerd in Nature Scientific Reports. Deze studie maakte gebruik van HT-29 tumorigene cellijn als darmcelmodel om de werkzaamheid van de voorgestelde bacteriofaagbehandeling te evalueren.

Probiotische eigenschappen van lactobacillen en hun vermogen om de hechting van enteropathogene bacteriën aan Caco-2- en HT-29-cellen te remmen

In deze studie gebruikten onderzoekers HT-29 cellen om de probiotische activiteiten van melkzuurbacteriën te onderzoeken. Interessant genoeg toonde het onderzoek aan dat lactobacillen de hechting van pathogene bacteriën aan de dikke darmcellen voorkomen.

6. HT-29 cellen Bronnen: Protocollen, video's en meer

Dit gedeelte behandelt een aantal online bronnen die beschikbaar zijn over HT-29 cellen en die helpen bij het leren van hun onderhoud, kweek- en transfectieprotocollen.

Protocollen voor celkweek

De volgende bronnen helpen je bij het kweken van HT-29 cellen.

HT-29 cellen kweken: Deze link biedt basiskennis over het groeimedium, ontdooien en subkweken van HT-29 cellen.
HT-29 kweken onderhouden: Dit artikel bevat alle nuttige informatie over het kweken en onderhouden van HT-29 cellen.

Transfectieprotocollen

HT-29 cellijn heeft een grote transfectie-efficiëntie en wordt vaak gebruikt in genexpressiestudies. De volgende bronnen beschrijven de mogelijke transfectieprotocollen voor deze cellen.

HT-29 transfecteren: Deze websitelink bevat het gedetailleerde protocol voor de transfectie van HT-29 cellen.
Transfectie van HT-29 cellijn: Dit document beschrijft het transfectieprotocol van de HT-29 cellijn met plasmide DNA.

Video's over HT-29 cellijn

Hier zijn enkele video's over het kweken en onderhouden van deze tumorigene cellijn.

Het doorgeven van cellen: Deze video toont het protocol voor het passeren van cellen voor adherente cellijnen.
HT-29 cellen transfecteren: Deze video begeleidt je met betrekking tot de transfectiemethode die wordt gebruikt voor HT-29 cellen.

We verwachten dat de informatie in dit artikel waardevol en voldoende voor je is om HT-29 cellijnen te hanteren en te onderhouden. Als je van plan bent HT-29 cellen in je onderzoek te gebruiken, bestel dan bij ons.

Referenties

Martínez-Maqueda, D., B. Miralles en I. Recio, HT29-cellijn. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: p. 113-124.
Shirafkan, N., et al., microRNA-193a-5p remt migratie van menselijke HT-29 darmkankercellen via onderdrukking van metastasepadway. Tijdschrift voor cellulaire biochemie, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
Khodavirdipour, A., R. Zarean, and R. Safaralizadeh, Evaluation of the anti-cancer effect of Syzygium cumini ethanolic extract on HT-29 colorectal cell line. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
Fonseca, H.C., et al., Probiotic properties of lactobacilli and their ability to inhibit the adhesion of enteropathogenic bacteria to Caco-2 and HT-29 cells. Probiotica en antimicrobiële eiwitten, 2021. 13: p. 102-112.
Shan, J., et al., Bacteriofagen zijn virulenter voor bacteriën met menselijke cellen dan ze zijn in bacteriële cultuur; inzichten van HT-29 cellen. Wetenschappelijke rapporten, 2018. 8(1): p. 5091.