HT-29-cellijn
HT-29 is een menselijke colorectale kankercellijn met een breed scala aan toepassingen in kanker- en toxicologisch onderzoek. Deze cellen zijn bijvoorbeeld gevoelig voor standaard chemotherapeutische behandelingen tegen colorectale kanker. Bovendien is de HT-29-cellijn een goed gekarakteriseerd in-vitromodel om de reactie van het darmepitheel op bacteriële infecties te onderzoeken. De HT-29-cellen bootsen de kenmerken van volgroeide darmcellen, d.w.z. enterocyten, na en zijn daarom geschikt voor hechtings- en mechanistische studies.
- Groei-medium
- Zie productpagina
- Verdubbelingstijd
- Zie productpagina
- Groeitype
- Adherent
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel HT-29
HT-29-cellen: Oorsprong en algemene informatie
Voordat u een cellijn gaat gebruiken, is het belangrijk om de algemene kenmerken en de oorsprong van de cellijn te kennen. In dit gedeelte leert u: Wat zijn HT-29-cellen? Is HT-29 een cellijn voor colorectale kanker? Wat is de morfologie van HT-29-cellen?
Wat is de HT-29-cellijn? HT-29 is een cellijn van colorectaal adenocarcinoom die in 1964 door Trempe en Fogh is opgezet. De cellen zijn oorspronkelijk afkomstig van de primaire tumor van een blanke vrouw (44 jaar) met colorectaal adenocarcinoom [1]. Sinds de oprichting wordt deze cellijn gebruikt om de biologie van kankers te bestuderen.
Morfologie van HT-29-cellen: De HT-29-cellijn heeft over het algemeen een epitheelachtige morfologie. Gedifferentieerde cellen groeien in monolaagjes, vormen strakke cel-celverbindingen en bezitten een apicale borstelrand. Als deze cellen worden gekweekt in een medium met een tekort aan glucose of indien ze inductoren zoals butyraat of zuur krijgen toegediend, vertonen ze enterocyt-achtige kenmerken.
Celgrootte: De diameter van de HT-29-cellijn voor colorectale kanker is 11 μm.
Genome en ploïdie: Het modale aantal chromosomen voor de HT-29-cellijn is 71. Dit kan variëren van 68 tot 72. Bovendien is het gestroomlijnde chromosoomgetal voor HT-29-cellen hypertriploïd, waarbij de 2S-component voorkomt met een frequentie van 2,4 %.
Wat is HT29 MTX? HT29 MTX is een methotrexaatresistente cellijn die is geïsoleerd uit de oorspronkelijke HT-29 menselijke colonkankercellijn door aanpassing aan 10 µM methotrexaat. Deze cellen vertonen kenmerken van slijmafscheidende volwassen slijmbekercellen.
Informatie over de celkweek van de HT-29-cellijn
Kennis van de basisvereisten voor het kweken van een cellijn kan uw werk ermee vergemakkelijken. U moet weten: wat is de verdubbelingstijd van de HT-29-cellijn? Wat is de bezaaidichtheid van HT-29-cellen? Welke media zijn geschikt voor HT-29-cellen?
Verdubbelingstijd
De gemiddelde verdubbelingstijd voor de HT-29-cellijn is 24 uur.
Hechtend/suspensie
HT-29 is een hechtende cellijn.
Uitzaaidichtheid
De aanbevolen bezaaidichtheid voor HT-29-cellen is 3 x 104 cellen/cm2. Gekweekte cellen worden gewassen met 1X PBS en losgemaakt na incubatie met Accutase gedurende 8-10 minuten. Er wordt vers medium toegevoegd en de cellen worden gecentrifugeerd. Het celpellet wordt opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden in de aanbevolen celdichtheid in nieuwe kweekflessen gedoseerd.
Kweekmedium
Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM), aangevuld met 2,5 mM L-glutamine en 10 % FBS, wordt gebruikt voor een optimale kweek van HT-29-cellen. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
Groeiomstandigheden
HT-29-cellen hebben voor hun groei een bevochtigde incubator nodig met een temperatuur van 37 °C en een CO2-toevoer van 5 %.
Opslag
Deze cellen worden bewaard in de dampfase van vloeibare stikstof bij een temperatuur van minder dan -195 °C.
Invriesmedium en -proces
Het invriesmedium dat voor de HT-29-cellijn wordt gebruikt, is CM-1 of CM-ACF. Cellen worden ingevroren via een langzaam invriesproces dat een temperatuurdaling van 1 °C veroorzaakt en de levensvatbaarheid van de cellen efficiënt beschermt.
Ontdooiproces
Ingevroren HT-29-cellen worden ontdooid in een waterbad ingesteld op een temperatuur van 37 °C. Deze cellen kunnen opnieuw worden gesuspendeerd en direct in de kolf met vers groeimedium worden gedoseerd. In tegenstelling hiermee kunnen de ontdooide cellen worden gecentrifugeerd om elementen van het invriesmedium te verwijderen, opnieuw worden gesuspendeerd in vers medium en in kolven worden gekweekt.
Bioveiligheidsniveau
Bioveiligheidsniveau 1 wordt gebruikt voor de hantering en het onderhoud van de HT-29-cellijn.
HT-29-cellen: voordelen en beperkingen
Elke cellijn heeft unieke voor- en nadelen die haar onderscheiden van andere cellijnen. In dit gedeelte worden de belangrijkste voordelen en beperkingen van HT-29-cellen besproken.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van HT-29-cellen zijn:
-
Eenvoudig te kweken
De HT-29-cellijn is eenvoudig te hanteren en te onderhouden, zonder ingewikkelde kweekvereisten. De cellen worden op grote schaal gekweekt in onderzoekslaboratoria.
-
In-vitro-model van darmcellen
HT-29-cellen kunnen onder specifieke kweekomstandigheden differentiëren tot volwassen darmcellen (enterocyten en slijmproducerende cellen). Ze worden gebruikt als cellulair model om de vertering van voedsel en de biologische beschikbaarheid te bestuderen.
-
Hoge transfectie-efficiëntie
HT-29-darmkankercellen bieden een hoge transfectie-efficiëntie, waardoor ze geschikt zijn voor onderzoek naar genexpressie en -regulatie. Zowel tijdelijke als stabiele transfectie-experimenten kunnen worden uitgevoerd met behulp van verschillende methoden.
-
Gevoeligheid voor geneesmiddelen
HT-29-cellen zijn gevoelig voor chemotherapeutische geneesmiddelen zoals fluorouracil en oxaliplatine, die vaak worden gebruikt bij de behandeling van colonkanker. Ze worden gebruikt om geneesmiddelresistentie te bestuderen en potentiële therapeutische geneesmiddelen voor colorectaal carcinoom te screenen.
Beperkingen
-
Heterogeniteit
HT-29-cellen vertonen, net als andere kankercellijnen, heterogeniteit en vormen mogelijk geen uniforme celpopulatie. Dit kan de reproduceerbaarheid van resultaten in bepaalde assays beïnvloeden en leiden tot kleine variaties in experimentele uitkomsten.
-
Beperkte differentiatie
HT-29-cellen hebben een beperkt differentiatiepotentieel. Ze differentiëren niet volledig tot darm- of coloncellen, maar vertonen slechts enkele karakteristieke kenmerken. Deze beperking kan het gebruik ervan bij het bestuderen van complexere biologische processen beperken.
HT-29-cellen: Toepassingen
De HT-29-cellijn wordt op grote schaal gekweekt in onderzoekslaboratoria vanwege het brede scala aan toepassingen. In dit gedeelte worden slechts enkele belangrijke toepassingen van HT-29-cellen behandeld.
Kankeronderzoek: HT-29 is een colorectale adenocarcinoomcellijn en wordt daarom gebruikt om de progressie, ontwikkeling en onderliggende moleculaire mechanismen van kanker te bestuderen. In een studie uit 2018 werd de HT-29-cellijn gebruikt om de celmoleculen te onderzoeken die verantwoordelijk zijn voor metastase. Uit deze studie bleek dat de vimentine- en CXCR4-genen de celmetastase reguleren. Transfectie met microRNA-193a-5p-mimic kan daarentegen de mRNA-niveaus van deze genen verlagen en de metastase van kankercellen met succes verminderen [2].
Toxicologisch onderzoek: De HT-29-cellijn wordt op grote schaal gebruikt in toxicologisch onderzoek. Deze colorectale carcinoomcellen worden gebruikt om de toxiciteit van verschillende kandidaat-geneesmiddelen te beoordelen met behulp van verschillende assays. Zo onderzocht een studie het toxiciteitspotentieel van een ethanolisch extract van de plant Syzygium cumini op de HT-29-cellijn. De resultaten toonden een significante remming van de HT-29-celgroei aan, wat wijst op de veelbelovende antikankereigenschappen van het extract [3].
Microbiologie: HT-29 kan worden gebruikt als gastheercelsysteem om de pathogenese van potentiële microben, d.w.z. bacteriën en virussen, te onderzoeken. Onderzoekers kunnen HT-29-cellen infecteren met microben om hun virulentie en de reactie van de gastheer te onderzoeken. In een dergelijke studie werden HT-29-cellen gebruikt om de probiotische eigenschappen van melkzuurbacteriën te onderzoeken [4]. In een andere studie werden HT-29-cellen gebruikt om de werkzaamheid en veiligheid van bacteriofaagbehandelingen te evalueren [5].
5. Wetenschappelijke publicaties over HT-29-cellen
In dit gedeelte worden enkele opmerkelijke publicaties over HT-29-cellen belicht die u kunnen helpen bij het opzetten van uw onderzoek.
In deze studie werd het ethanol-extract van Syzygium cumini voorgesteld als een potentieel middel tegen de colorectale kankercellijn HT-29. Het extract remde de groei van kankercellen aanzienlijk.
Deze publicatie in Bioscience Reports testte de antikankeractiviteit van een verbinding, Tetrandrine, op HT-29-cellen. De resultaten toonden aan dat tetrandrine de proliferatie en groei van kankercellen remt via regulering van celsignaleringsroutes.
Deze studie stelde dat miRNA-193a-5p mogelijk de metastase van HT-29-cellen kan reguleren door metastase-gerelateerde genen te reguleren.
Dit artikel is in 2018 gepubliceerd in Nature Scientific Reports. In deze studie werd de tumorogene HT-29-cellijn gebruikt als een intestinaal celmodel om de werkzaamheid van de voorgestelde bacteriofaagbehandeling te evalueren.
In deze studie gebruikten onderzoekers HT-29-cellen om de probiotische activiteiten van melkzuurbacteriën te onderzoeken. Interessant genoeg wees de studie uit dat lactobacillen de hechting van pathogene bacteriën aan coloncellen voorkomen.
HT-29-cellen Bronnen: protocollen, video's en meer
In dit gedeelte worden enkele online bronnen over HT-29-cellen besproken die u kunnen helpen bij het leren van de protocollen voor het onderhoud, de kweek en de transfectie ervan.
Protocollen voor celkweek
De volgende bronnen geven u informatie over het subcultiveren van HT-29-cellen.
- HT-29-cellen kweken: via deze link vindt u basiskennis over het groeimedium, het ontdooien en het subcultiveren van HT-29-cellen.
- HT-29-culturen onderhouden: Dit artikel bevat alle nuttige informatie over het kweken en onderhouden van HT-29-cellen.
Transfectieprotocollen
De HT-29-cellijn heeft een hoge transfectie-efficiëntie en wordt vaak gebruikt in genexpressiestudies. De volgende bronnen beschrijven de mogelijke transfectieprotocollen voor deze cellen.
- Transfectie van HT-29: Deze website bevat het gedetailleerde protocol voor de transfectie van HT-29-cellen.
- Transfectie van de HT-29-cellijn: Dit document beschrijft het transfectieprotocol van de HT-29-cellijn met plasmide-DNA.
Video's met betrekking tot de HT-29-cellijn
Hier zijn enkele video's over het kweken en onderhouden van deze tumorogene cellijn.
- Cellen passeren: Deze video toont het protocol voor het passeren van cellen voor hechtende cellijnen.
- Transfectie van HT-29-cellen: Deze video begeleidt u bij de transfectiemethode die wordt gebruikt voor HT-29-cellen.
Wij verwachten dat de informatie in dit artikel waardevol en toereikend is voor het hanteren en onderhouden van de HT-29-cellijn. Als u van plan bent HT-29-cellen in uw onderzoek te gebruiken, bestel dan bij ons.
Referenties
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles en I. Recio, HT29-cellijn. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: p. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., microRNA‐193a‐5p remt de migratie van menselijke HT‐29-darmkankercellen via onderdrukking van het metastasepad. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean en R. Safaralizadeh, Evaluatie van het antikankereffect van het ethanolische extract van Syzygium cumini op de HT-29-colorectale cellijn. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Probiotische eigenschappen van lactobacillen en hun vermogen om de hechting van enteropathogene bacteriën aan Caco-2- en HT-29-cellen te remmen. Probiotics and antimicrobial proteins, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J., et al., Bacteriofagen zijn virulenter voor bacteriën met menselijke cellen dan in bacteriecultuur; inzichten uit HT-29-cellen. Scientific reports, 2018. 8(1): p. 5091.