DLD-1-cellen: Toepassingen en inzichten van DLD-1-cellen in het onderzoek naar colorectale kanker
DLD-1 is een menselijke colorectale carcinoomcellijn die veel wordt gebruikt in kankeronderzoek. Het is een waardevol hulpmiddel voor het onderzoeken van verschillende aspecten van darmkanker, waaronder tumorontwikkeling, progressie, onderliggende moleculaire mechanismen en de respons op therapeutische middelen. DLD-1 is dus uitstekend geschikt voor het verkrijgen van inzicht in de ziekte en het ontwikkelen van mogelijke behandelingsstrategieën.
- Groei-medium
- RPMI 1640 met mediumsupplementen, waaronder 10% foetaal runderserum (FBS), 2,1 mM stabiele glutamine en 2,0 g/l NaHCO3, wordt gebruikt voor het kweken van DLD-1-cellen. Het medium moet 2-3 keer per week worden ververst.
- Verdubbelingstijd
- De verdubbelingstijd van DLD-1 is ongeveer 15 uur.
- Groeitype
- De DLD-1 is een hechtende menselijke darmkankercellijn. Cellen groeien uit tot monolaagjes.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel DLD-1
- Algemene kenmerken en oorsprong van DLD-1-cellen
- Kweekinformatie van de DLD-1-cellijn
- DLD-1-cellijn: voordelen en beperkingen
- Toepassingen van de DLD-1-cellijn in onderzoek
- 5. Wetenschappelijke publicaties over DLD-1-cellen
- Bronnen voor de DLD-1-cellijn: protocollen, video's en meer
- Veelgestelde vragen
Algemene kenmerken en oorsprong van DLD-1-cellen
Voordat een onderzoeker aan de slag gaat met een cellijn, is het eerste waar hij naar kijkt de oorsprong en de algemene kenmerken ervan. Dit artikel geeft een gedetailleerde introductie tot de DLD-1-cellijn. Het behandelt de volgende veelgestelde vragen: Wat zijn DLD-1-cellen? Wat is een DLD-1-kankercellijn? Wat zijn de mutaties in de DLD-1-cellijn? Hoe groot is een DLD-1-cel? Wat is de morfologie van DLD-1-cellen?
- DLD-1, een celijn van dikke darmkanker, is afkomstig uit de dikke darm van een 67-jarige mannelijke patiënt met colorectaal adenocarcinoom. De cel werd geïsoleerd door D.L. Dexter en collega's in de periode 1977-1979. Deze cellijn heeft dezelfde oorsprong als de HCT-8-, HCT-15- en HRT-18-cellijnen.
- Net als colorectale kankers vertonen DLD-1-cellen een fenotype van microsatellietinstabiliteit [1].
- DLD-1-mutaties omvatten KRAS, P53, BRAF, BRCA1 en BRCA2. Vanwege de DLD-1 P53-status, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 en DLD-1 KRAS-mutatie worden deze cellen beschouwd als ideaal voor kankeronderzoek.
- Deze cellen hebben een epitheelachtige morfologie.
- De grootte van de DLD-1-cellijn is ongeveer 15 µm.
- De menselijke colorectale kankercellijn DLD-1 bezit een pseudodiploïd karyotype. Ongeveer 86% van de cellen bezit een modaal chromosoomaantal van 46. Polyploïdie kan echter ook voorkomen in 17,1% van de celpopulatie.
Informatie over het kweken van de DLD-1-cellijn
Voordat u een cellijn kweekt, moet u de basisvereisten voor de celkweek kennen. In dit gedeelte worden de belangrijke punten belicht die u moet weten voordat u aan de slag gaat met de DLD-1-cellijn. Dit omvat: Wat is de verdubbelingstijd van DLD-1? Wat is het DLD-1-kweekmedium? Wat is de bezaaidichtheid van DLD-1-cellen? Hoe kweekt u DLD-1-cellen?
Belangrijke punten voor het kweken van DLD-1-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van DLD-1 is ongeveer 15 uur.
Hechtend of in suspensie:
DLD-1 is een hechtende menselijke darmkankercellijn. Cellen groeien uit tot monolaagjes.
Zaaidichtheid:
DLD-1-cellen worden gezaaid met een dichtheid van 1 tot 2 x 104 cellen/cm2. Hechtende cellen worden gewassen met 1x fosfaatbufferzoutoplossing (PBS) en geïncubeerd met een passageringoplossing (Accutase) bij kamertemperatuur. Na 8 tot 10 minuten incubatie worden de losgekomen cellen aan het kweekmedium toegevoegd en gecentrifugeerd. Het celpellet wordt vervolgens voorzichtig opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden in nieuwe kweekvaten met groeimedium gegoten.
Groeimedium:
RPMI 1640 met mediumsupplementen, waaronder 10% foetaal runderserum (FBS), 2,1 mM stabiel glutamine en 2,0 g/l NaHCO3, wordt gebruikt voor het kweken van DLD-1-cellen. Het medium moet 2-3 keer per week worden ververst.
Kweekomstandigheden:
DLD-1-culturen worden gehouden in een bevochtigde incubator bij 37 °C met een CO2-toevoer van 5%.
Opslag:
DLD-1-cellen worden bewaard in de dampfase van vloeibare stikstof of in een elektrische ultralage-temperatuurvriezer (bij een temperatuur van minder dan -150 °C).
Invriesproces en medium:
CM-1- of CM-ACF-invriesmedia kunnen worden gebruikt om de DLD-1-cellen in te vriezen. Een langzaam invriesproces wordt altijd aanbevolen, waarbij de temperatuur geleidelijk met 1 °C daalt, waardoor de cellen geen schok ondergaan en hun levensvatbaarheid behouden blijft.
Ontdooiproces:
Ingevroren cellen worden 40 tot 60 seconden ontdooid in een waterbad dat vooraf is ingesteld op een temperatuur van 37 °C, totdat er nog slechts een klein klompje ijs overblijft. Daarna worden de cellen aan een vers medium toegevoegd en gecentrifugeerd. Deze stap is nodig om de componenten van het invriesmedium uit de cellen te verwijderen. De verzamelde cellen worden opnieuw gesuspendeerd in een groeimedium en in de kolf gedaan om te groeien.
Bioveiligheidsniveau:
De DLD-1-cellijn wordt onderhouden in laboratoria met bioveiligheidsniveau 1.
DLD-1-cellijn: voordelen en beperkingen
In dit deel van het artikel bespreken we de voordelen en beperkingen van de DLD-1-darmkankercellijn.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van de DLD-1-cellijn zijn:
Model voor colorectale kanker
DLD-1-cellen bezitten mutaties die vaak voorkomen bij patiënten met colorectale kanker, zoals de DLD-1 KRAS-mutatie, DLD-1 BRCA en DLD-1 BRCA2. Deze relevantie maakt ze tot een klinisch geschikt celmodel voor het bestuderen van deze ziekte.
Tumorogene cellijn
DLD-1-cellen zijn tumorigeen. Ze kunnen tumoren veroorzaken wanneer ze in naakte muizen worden geïnjecteerd. Daarom gebruiken onderzoekers deze cellen om xenotransplantaat-tumormodellen te ontwikkelen die helpen bij het onderzoeken van tumorvorming, -ontwikkeling en -progressie in vivo.
Beperkingen
De beperkingen van de DLD-1-cellen zijn:
Heterogeniteit
DLD-1-kolonkankercelpopulaties vertonen genetische en fenotypische heterogeniteit. Dit kan de generaliseerbaarheid van onderzoeksresultaten beïnvloeden.
Toepassingen van de DLD-1-cellijn in onderzoek
De DLD-1-cellijn biedt een scala aan toepassingen in kankeronderzoek. In dit hoofdstuk worden enkele prominente toepassingen besproken.
- Kankeronderzoek: DLD-1-cellen dienen als een waardevol in-vitromodel voor het begrijpen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de groei, ontwikkeling en progressie van colorectale kanker. Bovendien worden ze gebruikt voor het bestuderen van genexpressie, signaalroutes en de invloed van specifieke genetische mutaties op het gedrag van kankercellen. Uit onderzoek in 2022 bleek dat de PI3K/Akt/YAP-signaalcascade de migratie en invasie van de DLD-1-cellijn voor colorectale kanker reguleert [2].
- Ontwikkeling van geneesmiddelen: Onderzoekers gebruiken de DLD-1-cellijn om de effectiviteit van antikankergeneesmiddelen te testen en hun potentieel voor de behandeling van darmkanker te evalueren. Dit helpt bij de ontwikkeling van geneesmiddelen en het efficiënt bestrijden van de ziekte. In een studie uit 2022 werd de DLD-1-kankercellijn gebruikt om de antikankeractiviteit van siliciumftalocyanines, chemisch gesynthetiseerde verbindingen, te onderzoeken. De resultaten van de studie suggereerden dat deze verbindingen krachtige antikankermiddelen zijn [3]. Interessant genoeg ontdekte een ander onderzoek het antikankerpotentieel van een uit probiotica afkomstig P8-eiwit met behulp van DLD-1-cellen [4].
5. Wetenschappelijke publicaties over DLD-1-cellen
In dit gedeelte worden enkele interessante en veel geciteerde publicaties belicht waarin de DLD-1-koloncarcinoomcellijn centraal staat.
Deze publicatie is verschenen in het Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Uit het onderzoek bleek dat diosmine, een flavonoïde, celdood induceerde in DLD-1-cellen en ook celcyclusstilstand veroorzaakte; het kan dus een potentieel middel tegen kanker zijn.
Bromelaïne onderdrukt Kras-mutante colorectale kanker effectief door ferroptose te stimuleren
Deze studie in Animal Cells and Systems (2018) stelde dat bromelaïne, een enzym, de DLD-1 KRAS-mutatie onderdrukt en krachtige cytotoxische effecten uitoefent.
Dit onderzoeksartikel werd in 2019 gepubliceerd in het tijdschrift “Environmental Toxicology”. De studie onderzocht de antitumorale effecten van een natuurlijke verbinding, bergapten, met behulp van een DLD-1-colorectale cellijn.
Dit onderzoek in het Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) toonde aan dat nanocomposieten van curcumine en ijzeroxide zeer effectief zijn tegen DLD-1-colorectale kankercellen.
Dit onderzoeksartikel werd in 2020 gepubliceerd in het Turkish Journal of Biology. De studie stelde dat een natuurlijk product, epibrassinolide-gemedieerde activering van AKT in DLD-1-cellen, autofagie stimuleert die verband houdt met polyaminen.
Bronnen voor de DLD-1-cellijn: protocollen, video's en meer
Hieronder volgen enkele bronnen over DLD-1-cellen:
- DLD-1-transfectie: deze videotutorial is een uitgebreide gids over het DLD-1-in-vitro-transfectieprotocol.
- DLD-1-cellen: Dit onderzoeksartikel beschrijft kort de vereisten voor DLD-1-celcultuur, inclusief media en kweekomstandigheden. Bovendien kan het u helpen het transfectieprotocol voor DLD-1-cellen te leren.
De volgende links bevatten het protocol voor het kweken van DLD-1, van mensen afkomstige darmkankercellen.
- DLD-1-cellijn: Deze website biedt basisinformatie over de DLD-1-cellijn. Hier vindt u verschillende protocollen voor het kweken van DLD-1-cellen, waaronder subcultivering en het omgaan met cryogepreserveerde en prolifererende culturen.
Referenties
- Gavrilas, L.I., et al., Pro-apoptotische genen als nieuwe doelwitten voor enkelvoudige en combinatietherapieën met resveratrol en curcumine bij colorectale kanker. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP-signalering bevordert de migratie en invasie van DLD-1-colorectale kankercellen. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Antikankeractiviteit van nieuwe siliciumftalocyanines tegen de colorectale adenocarcinoomcellijn (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Antikankerrollen van het uit probiotica afgeleide P8-eiwit in de colorectale kankercellijn DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.